HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的２株ＭｃＡｂ。此两株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＮＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中，对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。将此两株ＭｃＡｂ用于慢性丙型肝炎病人肝活检免疫组化研究，获得较为满意的结果。

丙型肝炎病毒IgM测定及临床初步应用

丙型肝炎病毒ＩｇＭ测定及临床初步应用李保仝，马勇，杨毓华，李芳秋，胡进军，熊华（南京军区南京总医院微生物科，南京２１０００２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）标志物的检测，目前使用较多的是抗ＨＣＶ－ＩｇＧ诊断试剂盒，但ＩｇＧ抗体一般仅可作回顾性分析，对ＨＣＶ急...

抑抗灵对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响

目的 :观察抑抗灵片乙醇和水相提取物对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响。 方法 :将复方中药抑抗灵的乙醇和水相提取物分别加入细胞培养液中 ,再分别加入分泌人 μ链单克隆抗体细胞株、分泌A组轮状病毒共同抗原单克隆抗体细胞株、分泌HCVC33单克隆抗体细胞株和分泌白色念珠菌胞浆抗原的单克隆抗体细胞株 ,在37℃含有 10 %CO2 培养 96h ,取培养上清测定单克隆抗体含量。 结果 :抑抗灵乙醇提取物在 8.1～ 32 .5g/L、水提取物在 46 .0～ 183.8g/L、水提取物浓缩液在 5 2 .1～ 2 0 8.2g/L范围内 ,对培养的杂交瘤细胞分泌单克隆抗体能力有明显的抑制作用。 结论 :中药抑抗灵提取物在一定的剂量范围内 ,有抑制抗体分泌细胞分泌抗体作用 ;抑抗灵的乙醇提取液的抑制作用似更加显著。

红细胞生成素单克隆抗体制备及初步鉴定

为获取高效价的红细胞生成素（ＥＰＯ）单抗，以建立重组人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）测定方法。用基因重组的ｈＥＰＯ与小鼠血清白蛋白经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基－３（２－吡啶基二硫）丙酸酯（ＳＰＤＰ）交联后，常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，并用细胞融合技术制备分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ杂交瘤细胞；用间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术将ｈＥＰＯＭｃＡｂ与白色念珠菌胞质抗原的ＭｃＡｂ、嗜肺性军团病杆菌ＭｃＡｂ、ＨＣＶ核心肽ＭｃＡｂ、人μ链ＭｃＡｂ、ＩＦＮ－γＭｃＡｂ的间接ＥＬＩＳＡ同时进行特异性鉴定。经融合后检测，获取一株分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。初步鉴定，ｈＥＰＯＭｃＡｂ针对ｈＥＰＯ间接ＥＬＩＳＡ效价为１０－７（对照腹水为１０－３）；免疫印迹结果显示：此ＭｃＡｂ与基因重组的ｈＥＰＯ在分子量３０００～４０００之间有一条显色带，而其它几种ＭｃＡｂ均为阴性结果。小分子物质经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白交联后用作免疫抗原，可提高小分子物质的免疫原性，容易获取高效价的单克隆抗体。

丙型肝炎病毒标志物测定的临床应用

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。 方法 :对 2 44份 HCV感染者、33份对照血清和 35份 HCV特异性 Ig G抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行 HCV四种标志物测定。抗HCV- Ig G、Ig M和 GOR抗体采用间接 EL ISA法 ,HCV C33抗原采用双抗体夹心 EL ISA法。 结果 :抗 HCV- Ig G、抗 HCV- Ig M、HCV C33和抗 GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高 ,分别为 10 0 .0 %、85 .7%、46 .4%和 6 4.3% ;急性输血后丙型肝炎组检出率为 6 6 .7%、10 0 .0 %、2 2 .9%和 42 .9% ;慢性稳定性丙型肝炎组为 94.1%、2 6 .5 %、17.6 %和 5 2 .9% ;血透患者组为 6 2 .6 %、31.3%、4.8%和 45 .6 %。血清抗 HCV Ig G阳性组初乳为 17.1%、2 .9%、8.5 %和 37.1%。血清和初乳对照组除 1例献血员血清抗 HCV- Ig G阳性外 ,其余均为阴性结果。 结论 :除抗 HCV- Ig G外 ,抗 HCV- Ig M、HCV C33和 GOR抗体三种标志物在 HCV感染的相关疾病组中 ,有一定的阳性检出率 ,均可作为 HCV感染的标志 ,可用于 HCV感染后的实验室诊断。

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。

用人工合成肽检测丁型肝炎病毒IgM抗体及其初步临床应用

用人工合成肽检测丁型肝炎病毒ＩｇＭ抗体及其初步临床应用李保仝，赵波，杨毓华（南京军区总医院，全军医学检验中心微生物科）ＨＤＶ的感染为世界性分布，但呈地方流行性，我国各地区对ＨＤＶ的感染情况亦有不少报道。目前对ＨＤＶ感染的诊断方法已有了重要进展，但仍满...

不同基因型丙型肝炎病毒感染者的自身免疫表现

目的 研究不同基因型HCV感染的丙型肝炎患者体内的自身抗体和其他免疫指标。方法 2 4例丙肝患者为研究组 ,5 2例健康体检者为对照组。HCV感染用RT PCR证实。HCV基因型的检测用型特异性探针核酸杂交法检测。抗核抗体和抗平滑肌抗体用免疫荧光法检测 ,抗Sm抗体和抗RNP抗体用对流免疫电泳法检测 ,类风湿因子、抗双链DNA抗体、抗心磷脂抗体、抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体用ELISA检测。冷球蛋白用冷沉淀法检测。免疫球蛋白水平用速率散射比浊法测定。循环免疫复合物用抗补体法测定。结果 ( 1) 2 4例丙肝患者中 ,13例 ( 5 4 2 % )为Ⅱ型HCV(okamoto分型法 )感染 ,7例 ( 2 9 2 % )为Ⅲ型 ,2例 ( 8 3 % )为混和型 (Ⅱ型 +Ⅲ型 ) ,2例 ( 8 3 % )难以确定。 ( 2 )自身抗体检测 :患者组中有 10例( 4 1 7% )检出 2 1项次自身抗体。Ⅱ型HCV感染的 13例中有 7例检出 16项次 ,Ⅲ型HCV感染的 7例中有 1例检出 1项次 ,Ⅱ型和Ⅲ型混和感染的 2例中检出 4项次自身抗体。检出自身抗体的患者中有 7例检出类风湿因子 ,4例检出抗核抗体 ,4例检出抗心磷脂抗体 ,2例检出抗平滑肌抗体 ,2例检出抗甲状腺球蛋白抗体 ,1例检出抗甲状腺微粒体抗体 ,1例检出抗双链DNA抗体。结论 ( 1)在本地区的丙肝患者中 。

中药抑抗灵治疗抗精子抗体介导的免疫性不育的实验研究Ⅱ

目的 :观察中药抑抗灵对抗精子抗体 (AsAb)介导的免疫性不育的疗效。 方法 :在建立AsAb介导的免疫性不育动物模型的基础上 ,用抑抗灵对新西兰兔进行治疗 ,治疗完成即AsAb阴转率达到预期疗效时 ,雌雄兔交配 ,观察孕育结果。 结果 :原免疫状态雄 (+)雌 (- )抑抗灵治疗的低、高剂量组不育率为 2 0 % ,中剂量组为 0 ,强地松对照组为 0 ,未治疗组为 6 0 % ;雄 (- )雌 (+)低剂量组不育率为 0 ,中剂量组不育率为 2 0 % ,高剂量组不育率为2 5 % ,强地松对照组为 2 5 % ,未治疗组不育率为 4 0 % ;雄 (+)雌 (+) 3个剂量组的不育率均为 2 0 % ,强地松对照组为 2 0 % ,未治疗组不育率为 6 0 % ;阴性对照组不育率为 2 0 %。原免疫状态为雄 (+)雌 (- )抑抗灵低剂量组、中剂量组、高剂量组新生兔体重分别为 (5 1.7± 8.8) g ,(5 0 .5± 6 .4 ) g ,(5 3.5± 7.2 ) g ;强地松对照组和未治疗组新生兔体重分别为 (5 0 .5± 6 .1) g ,(5 1.6± 4 .3) g ;原免疫状态为雄 (- )雌 (+)抑抗灵低剂量组 ,中剂量组 ,高剂量组新生兔体重分别为 (49.7± 5 .9)g ,(5 1.1± 5 .5 )g ,(5 0 .8± 4 .1)g ;强地松对照组和未治疗组新生兔体重分别 (5 1.6±6 .2 ) g ,(5 1.6± 4 .2 ) g。原免疫状态为雄 (+)雌 (+)抑抗灵低剂量组 。

抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用

目的 制备抗人甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体及建立应用方法。方法 用亲和层析法自人血清中提取甘露聚糖结合凝集素 (MBL) ,免疫Balb/c小鼠 ,通过细胞融合的方法 ,得到 3株稳定分泌抗人MBL单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株。建立检测MBL的ELISA。结果 本组mAb识别相对分子质量 (Mr)为 310 0 0的MBL分子 ,与MBL作用后可明显抑制MBL 甘露聚糖复合物的抗补体效应。用ELISA检测 186例健康人血清中MBL水平为 2 6 9± 1 5 8mg/L。结论 成功地获得了抗MBL的mAb并用于建立ELISA。

HCV基因分型生物芯片探针设计的探讨

目的 探讨适用于临床实验室的丙型肝炎病毒(hepatictisCvirus,HCV)基因分型诊断芯片的探针设计方案。方法 用TaxonomyBrowser和BLAST工具搜索GenBank中所有已登录的HCV序列,用Clustal.W算法进行序列连配与比对,用生物信息学方法获得 5′非编码区(5′UTR)和核心蛋白区(C区)的比对文件,根据探针设计的原则和要求,确定探针在序列中的位置。用Oligo6. 0和PrimerPremier5. 0软件设计探针。设计芯片上 6×6的探针阵列模式。结果 从 778个HCV序列中获得 5′UTR和C区序列变异比对文件,发现 7个存在活跃共突变的区域。根据序列分析数据设计了 5′UTR27个探针和C区 9个探针。设计了由不同的探针组合构成的 33种杂交阵列模式。结论 采用 5′UTR和C区多探针联合检测的基因芯片技术可简化HCV分型方法,提高检测结果的特异性。

男性不育病人精液中磷脂酶A2的测定及其临床意义

目的 :探讨人精液中磷脂酶A2 (PLA2 )含量测定在男性不育症中的临床意义。 方法 :以自制的 2株PLA2单克隆抗体建立酶联免疫吸附试验 (ELISA)、免疫细胞化学法 (ICC)和流式细胞术 (FCM)等 3种方法 ,分别检测男性不育病人精浆及精子头部PLA2的含量 ,并与生育组进行比较。精液常规分析采用计算机辅助精液分析系统 (CASA)进行。 结果 :男性不育病人精浆中PLA2含量分别为 :无精子症组 (31.13± 14 .4 9)ng ml,少精子症组 (17.71±12 .4 5 )ng ml,精子数目正常组 (16 .4 6± 11.31)ng ml;与生育组 [(8.0 9± 3.15 )ng ml]相比差异均有极显著性 (P <0 .0 1) ;精浆中PLA2含量与精子密度呈显著负相关 (r=- 0 .6 0 2 ,P <0 .0 5 ) ,而与精子活动力及活率无显著相关性 (r=0 .2 6 6和r=- 0 .2 0 0 ,P均 >0 .0 5 ) ;ICC和FCM试验均提示 ,生育组精子头部PLA2含量显著高于各不育组病人 ,且FCM试验显示差异有极显著性 (P <0 .0 1)。 结论 :精浆中PLA2与男性生育密切相关 ,精子头部PLA2含量缺乏可能是引起男性不育的病因之一。精液中PLA2含量测定方法的建立可为探讨男性不育的发病机制提供有力的依据。

检测白色念珠菌p47抗原ELISA法的建立及临床应用价值

目的 :建立检测血清中白色念珠菌相对分子质量 470 0 0 (p47)抗原的实验室方法 ,并探讨其临床应用价值。 方法 :亲和层析纯化白色念珠菌 p47抗原 ,制备抗 p47单抗和多抗 ,建立 EL ISA法检测血清中 p47抗原 ,并以美国 Biom erica公司试剂盒对照 ,同时检测血液病患者和念珠菌培养阳性的患者。 结果 :血液病组 6 9例患者中 ,本法检测 10例阳性 ,Biomerica法 9例阳性 ;培养阳性组 12 6例患者 ,本法检测 8例阳性 ,Biom erica法 6例阳性。两种方法的阳性符合率为 40 %。 结论 :对怀疑侵袭性念珠菌感染的患者 ,检测血清中 p47抗原是一种有应用前景的诊断方法。

人中性粒细胞防御素单克隆抗体制备及初步应用

目的 制备人中性粒细胞防御素 1单克隆抗体 (HNP 1McAb) ,并用HNP 1McAb建立直接免疫荧光法对正常人及一系列髓性白血病患者中性粒细胞进行免疫细胞化学染色。方法 用连续酸 尿素 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化人中性粒细胞防御素组份 (HNP 1～ 3) ,以纯化的HNP 1为抗原制备特异性的HNP 1McAb ,并建立了HNP 1McAb直接免疫荧光染色法。将分离纯化的正常人和兔外周血中性粒细胞、淋巴细胞 ,粒细胞白血病、淋巴细胞白血病患者的骨髓和外周血分别制成涂片 ,进行免疫荧光染色。结果 HNP 1McAb与正常人外周血中性粒细胞及急、慢性粒细胞白血病骨髓和外周血涂片的原、早幼、中幼、晚幼和成熟的中性粒细胞均呈特异的阳性反应。人红细胞、淋巴细胞及其他非粒细胞系统的有核细胞均呈阴性反应。对兔的中性粒细胞无交叉反应。结论 HNP 1可作为粒细胞系统的特异性分化标志 ,其相应的HNP

精液中丙型肝炎病毒的研究

目的 :检测精液中是否存在丙型肝炎病毒 (HepatitisCviruse,HCV) ,探讨HCV性传播途径的可能性。 方法 :用双抗体夹心ELISA法检测 147例精浆HCV抗原 ;HCV抗原阳性者检测其夫妻双方血清中抗HCV IgM和抗HCV IgG ;同时采用 90 %和 45 % 2层Percoll梯度离心 ,分离HCV抗原阳性病人的精子 ,用RT PCR分别检测其精浆(组分 1)、90 %Percoll层精子 (组分 2 )、45 %Percoll层精子 (组分 3)及最上层圆形细胞 (组分 4)中的HCV RNA。 结果 :147例精浆中HCV抗原阳性的 4例 (2 7% ) ;4例HCV抗原阳性病人夫妻双方血清抗HCV抗体均为阴性 ;4例HCV抗原阳性病人有 2例精浆中检测出HCV RNA ,而Percoll分离后 3个组分中HCV RNA均为阴性。 结论 :①HCV感染存在性传播途径 ;②人工授精中供精者HCV的检测必不可少 ;③采用Percoll梯度离心分离精子 ,可大大降低感染HCV的风险。

血透患者病毒感染状况初步调查

目的与方法 :对 43例血液透析患者的五种肝炎相关病毒 (HBV、HCV、HEV、HGV和 CMV)标志物进行了检测。 结果 :以单项抗 - HCV Ig G检出率最高 ,达 5 8.1% (2 5 /4 3) ;抗 - CMV Ig M检出率次之 ,为 41.9% (18/4 3) ;其后依次为 HBs Ag30 .2 % (13/4 3) ,抗 - HCV Ig M2 5 .6 % (11/4 3) ,抗 - HBc18.6 % (8/2 5 ) ,抗 - HBs16 .3% (7/4 3) ,抗 - HGV Ig G 9.3% (4/4 3) ,HBe Ag 7.0 % (3/4 3) ,抗 HBe 4.7% (2 /4 3) ,抗 CMV- Ig G 4.7% (2 /4 3) ,抗 HEV- Ig G2 .3% (1/4 3) ;未测得抗 - HEV Ig M。HBV标志物总的阳性率为 80 % ,HCV为 73% ,CMV为 5 6 %。有 5例患者同时检出 HBV、HCV和 CMV标志物。 结论 :血液透析是肝炎相关病毒传播的一条重要途径 ,不仅可传播 HBV和HCV,而且还可传播 HEV和 HGV,临床上应引起对此类病毒感染的重视。

大鼠肝Kupffer细胞分离培养及鉴定

目的 :参照 Smedsrod等方法加以适当的修正 ,建立简便、有效和稳定的大鼠肝 Kupffer细胞分离、纯化和培养方法。 方法 :1联合酶原位循环灌注消化 ;2 Nycodenz不连续密度梯度离心 ;3选择性贴壁纯化 ;经大鼠单核 -巨噬细胞单克隆抗体 ED1( MΦ-Mc Ab ED1)鉴定。 结果 :最终获得大鼠肝 Kupffer细胞产量 ( 2 8.68± 4)× 10 6/鼠肝 ,细胞纯度 96% ,细胞活性大于 95 %。 结论 :本文建立的大鼠肝 Kupffer细胞分离方法 ,操作简便易行、效果稳定 。

免疫转印法检测白色念珠菌菌丝组分蛋白抗体

目的 为了探讨血清中白色念珠菌菌丝相蛋白组分抗体的实验室诊断意义。方法 应用超声粉碎和ConA Sepharose4B亲和层析除去细胞壁甘露糖和甘露糖蛋白后 ,收集蛋白抗原 ,通过免疫转印技术 ,检测血清标本中相应抗原的抗体。结果 血库血清 40份中 ,1例阳性 ;白色念珠菌培养阳性的 90名患者 ,抗体阳性 5 8例 ;热带念珠菌培养阳性的 17名患者 ,10例抗体阳性。使用大量抗菌药物和 /或免疫抑制剂治疗而培养阴性的 14名患者中 ,抗体阳性 7例。抗体阳性的 75例结果中 ,15例出现 2 9ku和 47ku条带 ,5 1例单独出现 47ku条带 ,9例仅出现 2 9ku条带。结论 免疫转印法检测抗体可作为深部念珠菌感染的参考指标 ,并可提供抗体动态变化模式 ,为深入研究打下基础。