1700001O22RIK基因在小鼠睾丸的特异表达及生物信息学分析

目的:研究1700001O22RIK(RIKEN c DNA 1700001O22)基因在小鼠睾丸的表达特征,结合生物信息学分析初步探讨其功能。方法:通过分析小鼠基因表达谱芯片,发现1700001O22RIK基因特异性表达于睾丸组织。采用RT-PCR、实时PCR、Western印迹及免疫组化等方法分析该基因在成年C57BL/6J小鼠各组织中的表达特征,以及不同发育阶段小鼠的睾丸组织中的表达变化。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果:1700001O22RIK基因在小鼠睾丸组织中呈现特异性表达,表达水平具有年龄依赖性,在成年期表达最强;1700001O22RIK蛋白在成年小鼠睾丸组织中主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。经生物信息学分析,1700001O22RIK基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性,提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论:1700001O22RIK属于睾丸特异性基因,主要表达于生精小管的精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞,提示其可能参与精子发生的调节。

Ccdc70基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:探讨Ccdc70(Coiled-coil domain containing 70)基因在小鼠睾丸中的表达特征并分析其在生精过程中的潜在功能。方法:经表达谱芯片筛选出小鼠睾丸特异性基因Ccdc70,通过RT-PCR、real-time PCR、Western印迹及免疫组化检测Ccdc70基因在成年小鼠睾丸中表达特征,并对该蛋白做相关的生物信息学分析。结果:RT-PCR、real-time PCR和Western印迹结果表明Ccdc70基因在小鼠睾丸中高表达,在附睾中低表达;免疫组化结果表明Ccdc70蛋白在睾丸中主要表达于小鼠精母细胞和圆形精子胞质,在附睾中主要表达在附睾管上皮细胞。生物信息学分析显示该蛋白存在一个CCDC结构域,并在哺乳动物进化过程中高度保守。结论:Ccdc70为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于精母细胞、圆形精子及附睾管上皮细胞,提示其可能参与调控小鼠精子发生过程及附睾精子的进一步成熟。

剂量敏感的性别反转先天性肾上腺发育不良基因1与雄激素受体相互作用的研究

目的：剂量敏感的性别反转-先天性肾上腺发育不良基因1（dosage-sensitive sex reversal, adrenal hypoplasia critical region, on chromosome X, gene 1, DAX1）和雄激素受体（androgen receptor, AR）在男性生殖系统中均发挥着不可替代的作用，以往研究证明二者之间存在某些联系，本实验主要检测DAX-1和AR蛋白在细胞内的相互作用情况。方法构建人的带HA多肽标签的DAX-1真核表达载体,以脂质体方式将该质粒和雄激素受体真核表达质粒共转染至非洲绿猴肾成纤维细胞（COS-7）中，转染48h后收集细胞提取总蛋白，利用免疫共沉淀技术检测DAX-1和AR蛋白在细胞内的相互作用。结果成功构建了人DAX-1真核表达载体；免疫共沉淀实验结果显示DAX-1和AR蛋白在COS-7细胞内可以相互作用。结论 DAX-1与AR蛋白在细胞内可能存在相互作用，为后续研究DAX-1功能、突变致病及DAX-1与AR的作用机制奠定基础。

非梗阻性无精子症患者TSG23基因的单核苷酸变异分析

目的：分析TSG23基因在非梗阻性无精子症患者中单核苷酸变异。方法采用第二代高通量测序方法对临床收集的776例非梗阻性无精子症患者和709例已正常生育男性的外周血DNA进行TSG23基因外显子捕获测序；采用传统的Sanger测序技术对第二代高通量测序发现的新的突变位点进行验证。结果经过对测序质量控制和外显子测序结果分析筛选，有757例患者和709例的测序结果纳入生物信息学分析，共获得7个突变位点，其中3个为同义突变，4个为错义突变，有4个位点为新发现突变位点；所有位点中非梗阻性无精子症患者特有的突变位点1个，为同义突变，已育正常男性特有的突变位点2个，均为错义突变。结论现有的检测结果显示，TSG23基因的单核苷酸变异与非梗阻性无精子症的发生无明显的相关性。

睾丸特异性基因BC051628在小鼠中的表达及生物信息学分析

目的研究睾丸特异性基因BC051628在小鼠中的表达特征。方法通过分析小鼠基因表达谱芯片，发现BC051628基因特异性表达于睾丸组织。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时聚合酶链反应（Real-timePCR）、蛋白免疫印迹法（WesternNot）及免疫组化等方法分析该基因在小鼠不同组织及睾丸不同发育阶段的表达特征。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果BC051628基因在小鼠各组织中呈现睾丸特异性表达并伴随明显年龄依耐性。免疫组化染色发现BC051628蛋白主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子。生物信息学分析发现BC051628基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性，提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论BC051628属于睾丸特异性基因，可能在生精过程发挥重要作用。

miR-16在肾癌中表达和临床意义的研究

目的检测肾癌组织及癌旁正常组织中miR-16的表达,分析miR-16表达水平与临床病理特征之间的关系,为深入研究miR-16在肾癌的发生发展中功能作用奠定基础。方法在标本库中随机挑选48例手术切除的肾癌及配对癌旁组织标本,提取总RNA并通过反转录获得cDNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测标本中miR-16表达量,统计学分析其表达量与患者临床病理特征间的联系。结果 48对标本中41例(85.42%)肾癌标本miR-16表达上调,统计学分析证实肾癌组织中miR-16表达量明显高于配对的癌旁正常组织(P<0.01)。肾癌中miR-16表达量与患者性别、年龄、肾癌组织类型、TNM分期、AJCC临床分期无明显相关(P>0.05)。结论 miR-16在肾癌标本中明显表达上调,提示其可能与肾癌的发生发展有关。