内源酶对刺参肠自溶的作用

以刺参肠为原料,通过诱导自溶并添加各种酶抑制剂,以三氯乙酸可溶性寡肽和还原糖释放量为指标,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法,研究内源酶在刺参肠自溶过程中的作用。结果表明,在一定的浓度范围内,胃蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、α-淀粉酶抑制剂和β-1,3-葡萄糖苷酶抑制剂对刺参肠的自溶均具有一定的抑制作用,且丝氨酸蛋白酶抑制剂N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮作用较强。说明胃蛋白酶、胰蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、α-淀粉酶和β-1,3-葡萄糖苷酶参与刺参肠自溶过程。

栉孔扇贝裙边酶解物及其美拉德产物特性

以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶为工具酶,制备栉孔扇贝裙边酶解物。研究了酶解物的水解度(DH)、肽分子质量分布、氨基酸组成、酶解物及美拉德产物清除DPPH自由基的能力。结果表明,加酶量3 000U/g,底物质量分数4%,酶解时间3h,经中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解获得的酶解物水解度分别达到了37.6%和19.2%。酶解物中的肽分子质量以3ku以下为主,其中木瓜蛋白酶水解产物占59.7%~67.6%,中性蛋白酶水解产物占64.5%~78.2%。随着酶解时间的延长,酶解物对DPPH的清除能力逐渐提高。经美拉德反应后,IC_(50)降低到酶解物的1/17~1/36,抗氧化能力显著提高。

刺参肠酶解-美拉德反应衍生物的特性

本文以刺参肠为原料,利用中性蛋白酶酶解获得酶解物,将酶解物与核糖进行美拉德反应得到刺参肠酶解-美拉德反应衍生物(MRPs-C)。再分别通过5、3、1 k Da的超滤膜进行超滤,得到组分MRPs-Ⅰ(>5 k Da)、组分MRPs-Ⅱ(3~5 k Da)、组分MRPs-Ⅲ(1~3 k Da)及组分MRPs-Ⅳ(<1 k Da)四部分。对比各组分在色度、紫外吸收、荧光强度及褐变程度的差异,并考察它们的ABTS^+、DPPH自由基的清除能力、还原能力、Fe^(2+)螯合能力及抗脂质过氧化作用。结果显示,通过比较四个超滤组分的特性,组分MRPs-Ⅰ的褐变程度、紫外吸收及荧光强度分别是组分MRPs-Ⅱ的5.0、2.7及1.1倍,其余组分较组分MRPs-Ⅰ和MRPs-Ⅱ的褐变程度更低,MRPs-Ⅳ对自由基清除能力、还原能力、Fe^(2+)螯合能力及抗脂质过氧化能力最强,其中对ABTS^+自由基的清除能力达到4.56 Trolox当量/μL样品,对DPPH自由基的清除率达到47.56%。上述结果说明,刺参肠酶解-美拉德反应衍生物中大于5 k Da的组分对其褐变程度、紫外吸收及荧光强度有较大贡献,低于1 k Da的组分对其抗氧化能力具有较大贡献。

虾夷扇贝裙边酶解物美拉德反应产物的自由基清除活性

以虾夷扇贝裙边为原料,利用中性蛋白酶制备其酶解物及美拉德反应产物。扇贝裙边蛋白的条带主要分布在200,97 ku和42 ku。其经中性蛋白酶酶解3 h后,水解度达28.95%。将酶解物与核糖反应制备美拉德反应产物,并分析其抗氧化活性和风味物质组成。结果表明:美拉德反应生成较多的中间产物和褐色物质。经美拉德反应后,酶解物生成较多挥发性成分,尤其是杂环化合物种类增加。此外,酶解物的羟基和ABTS自由基清除能力仅分别为42.7%和31.64%,且未表现出明显的DPPH自由基清除能力。然而,经12 h的美拉德反应后,酶解物的羟自由基、DPPH和ABTS自由基清除能均力得到显著提高,表明扇贝裙边酶解物-核糖美拉德反应产物具有良好的抗氧化能力,可作为抗氧化剂应用于食品工业中。

海参肠组织蛋白酶D的提取及酶学特性研究

本研究以海参肠为原料,采用p H3.0 50 mmol/L甘氨酸-盐酸缓冲体系,按1∶6(w/v)的料液比,在4℃浸提1 h,获得海参肠组织蛋白酶D的粗酶液。以酸变性牛血红蛋白为底物,进行酶活测定,并研究了该酶的酶学性质。结果表明,海参肠组织蛋白酶D粗酶的最适p H为3.0,在p H3.0~7.0之间稳定性较好;最适反应温度为50℃,在4~40℃具有较高稳定性。5 mmol/L的金属离子Mg^(2+)、Ca^(2+)、Ni^(2+)、Zn^(2+)、Cd^(2+)和K^+对该酶有激活作用,而Fe^(3+)和Fe^(2+)则对其有抑制作用。天冬氨酸蛋白酶抑制剂Pepstatin A对该酶活性有较强的抑制作用。上述结果说明,在本研究条件下提取获得的海参肠组织蛋白酶D粗酶是一种酸性蛋白酶,其组成以天冬氨酸蛋白酶为主。

刺参体壁及罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白特性的对比研究

本实验对刺参体壁酶促溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen from Stichopus japonicus,sjPSC)和罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen from Oreochromis niloticus,onPSC)的理化特性进行对比研究。结果表明,两种胶原蛋白的紫外与傅里叶变换红外光谱分析结果都较为相似。由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可知,两种胶原蛋白均以α-和β-链为主,在非还原和还原条件下,二者的电泳图谱非常相似,这表明蛋白中没有二硫键被还原。甘氨酸是sjPSC和onPSC中主要氨基酸,其中每1 000个氨基酸残基中分别含有(344.57±2.16)、(353.00±4.84)个甘氨酸残基。相比较而言,sjPSC中谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、酪氨酸含量较高,onPSC中L-羟脯氨酸、L-脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸含量较高。在V8酶和α-糜蛋白酶作用下,sjPSC和onPSC的肽谱分析表明二者的结构有一定区别,尤其是谷氨酸、天冬氨酸及羟脯氨酸残基。

海参体腔液提取物对南美白对虾自溶的抑制作用

目的:研究海参加工副产物海参体腔液提取物对南美白对虾虾靡自溶中蛋白质降解的抑制作用。方法:通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对南美白对虾自溶中蛋白质的降解情况进行分析,并进一步利用SDS-PAGE和三氯乙酸(TCA)可溶性寡肽释放量指标分析海参体腔液及其提取物对南美白对虾自溶中蛋白质降解的影响。结果:南美白对虾自溶的适宜条件为pH 3.0、孵育温度50℃、孵育时间2 h。在此条件下,南美白对虾的肌球蛋白重链(200 kDa左右)和肌动蛋白(44.3 kDa左右)的条带灰度均有不同程度的降低,表明蛋白质发生降解。海参体腔液对南美白对虾自溶中蛋白质降解起到一定抑制作用,当海参体腔液提取物添加量为6.25~25.00 g/100 g虾靡时,南美白对虾自溶中蛋白质降解被显著抑制;提取物添加量为12.50~25.00 g/100 g虾靡时,也显著抑制TCA可溶性寡肽的释放。结论:海参体腔液提取物能有效抑制南美白对虾蛋白质的降解,对虾靡自溶发挥一定抑制功效。