miR-762对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究

目的:分析miR-762在子宫内膜癌(EC)患者癌组织中的表达水平及其对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究。方法:qRT-PCR检测54例EC癌组织和癌旁组织以及正常子宫内膜细胞ESC和EC细胞系中miR-762及腺瘤性结肠息肉2(APC2)mRNA表达水平。不同放射剂量处理Ishikawa细胞,qRT-PCR检测miR-762和APC2 mRNA表达水平。将Ishikawa细胞分为空白对照组(blank组)、Lv-NC组(感染miR-762 sponge阴性对照慢病毒),Lv-miR-762 SP组(感染miR-762 sponge慢病毒)、Lv-miR-762 SP+si-NC组和Lv-miR-762 SP+si-APC2组。qRT-PCR和Western blot检测miR-762和APC2表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-762和APC2的靶向关系。采用6 Gy射线照射各组Ishikawa细胞,克隆形成实验检测细胞放射敏感性;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax等蛋白表达水平。结果:在EC癌组织及细胞系中miR-762高表达,而APC2低表达。随着射线照射剂量的增加,Ishikawa细胞中miR-762表达水平逐渐升高(P<0.05),APC2 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05),呈剂量依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实,APC2是miR-762靶基因。抑制miR-762可明显下调miR-762表达水平,上调APC2表达水平,增强细胞放射敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并下调CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平,上调p21和Bax蛋白表达水平(P<0.05)。此外,干扰APC2基因可显著逆转抑制miR-762表达对Ishikawa细胞放射敏感性的促进作用。结论:miR-762在EC癌组织及细胞系中高表达,抑制其表达可通过上调APC2表达从而增强Ishikawa细胞的放射敏感性。

解整合素金属蛋白酶10通过介导Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)对子宫内膜癌(EC)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:收集84例EC患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测癌组织及其癌旁组织中ADAM10 mRNA表达水平。以人EC细胞株HEC-1B作为研究对象,采用ADAM10过表达慢病毒感染HEC-1B细胞,并联合Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939进行干预,再将细胞分为空白对照组(blank)、慢病毒阴性对照组(Lv-NC)、ADAM10过表达慢病毒组(Lv-ADAM10)和Lv-ADAM10+XAV939组。采用qRT-PCR检测感染后各组细胞中ADAM10 mRNA表达水平;划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法分析各组细胞中ADAM10及EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:EC患者癌组织中ADAM10 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。与blank组或Lv-NC组比较,Lv-ADAM10组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),同时细胞迁移和侵袭能力显著增强(均P<0.05)。与Lv-ADAM10组比较,LvADAM10+XAV939组细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且细胞迁移和侵袭能力明显降低(均P<0.05)。结论:ADAM10在EC组织中高表达,其过表达可促进HEC-1B细胞的EMT进程,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α通过调控跨膜受体蛋白1对子宫内膜癌病人中性粒细胞的影响

目的探究磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因通过调控跨膜受体蛋白1(Notch1)的表达对子宫内膜癌病人血中性粒细胞的影响。方法选择2020年3月至2021年9月在海南医学院第一附属医院接受治疗的50例子宫内膜癌病人(病例组)和50例健康女性(对照组)为分析对象。检测病例组和实验组血清中中性粒细胞(NE)、淋巴细胞(LY)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT),计算NLR指数(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数)。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测PIK3CA和Notch1的相对表达量。选取人原髓细胞白血病细胞/全反式维甲酸细胞(HL-60/ATRA细胞),在不同时间下进行培养,验证PIK3CA通过Notch1对NE的影响。结果病例组病人NE、LY、PLT指标以及NLR指数为(6.03±0.40)×10^(9)/L、(2.15±0.31)×10^(9)/L、(257.40±37.51)×10^(9)/L、(3.69±0.41)分别高于对照组的(5.13±0.50)×10^(9)/L、(1.68±0.16)×10^(9)/L、(202.10±23.39)×10^(9)/L、(2.44±0.39),病例组病人Hb水平为(138.72±13.79)g/L低于对照组Hb水平(149.52±10.65)g/L,说明子宫内膜癌病人炎症微环境异常。病例组PIK3CA和Notch1相对表达量为(3.351±0.496)、(3.467±0.440)高于对照组的(1.581±0.275)、(1.519±0.279)。HL-60/ATRA细胞培养实验验证了PIK3CA高表达促进Notch1高表达进而抑制NE的增殖。结论在NE中,Notch1表达量随着PIK3CA表达量升高而升高,NE细胞活力逐渐下降,初步证实了PIK3CA基因通过调控Notch1的表达对子宫内膜癌中NE产生影响。