信鸽产酸克雷伯菌GS-BY-GG的分离鉴定

目的 分离并鉴定鸽源产酸克雷伯菌,探究其生物学特性及致病性。方法 剖检甘肃某信鸽棚发病鸽,观察并采集病变组织,通过观察病菌形态、生化试验、16S rRNA PCR鉴定和序列分析实现对致病菌的分离鉴定,结合组织病理学观察、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行耐药性和致病性研究。结果 病鸽肝、肺、心等多器官出血,肝脏发黄且质地脆,肺脏发生化脓;从病鸽中成功分离到一株革兰氏阴性、短杆状菌株,麦康凯琼脂培养基上为粉红色光滑、湿润、圆形菌落,靛基质试验阳性;16S rRNA扩增序列与MN330093.1同源性达100.00%,表明病鸽感染产酸克雷伯菌,并命名为GS-BY-GG;产酸克雷伯菌GS-BY-GG对青霉素、氨苄西林和呋喃唑酮等10种药物耐药,对氟苯尼考、美罗培南和庆大霉素等5种药物敏感;组织病理学观察可见病鸽多器官出血,肝脏细胞排列不规则、多处可见棕黄色色素沉积,气管黏膜上皮广泛细胞坏死和脱落、黏膜层可见大量炎性细胞浸润;接种SPF雏鸡显示分离菌具有很强的致病性。结论 本研究成功分离了鸽源产酸克雷伯菌GS-BY-GG,研究结果为产酸克雷伯的临床诊断和防治提供数据支撑。

L929细胞无血清悬浮驯化及其在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株。将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法制备流产衣原体灭活疫苗。以25μL、50μL、100μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示,当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×10^(5)/mL时,培养72 h后细胞浓度可达到约7×10^(6)/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×10^(6)/mL,接菌量为5.5×10^(4) IFU/mL,加入脂质体2000的量为1.7μL/mL、放线菌酮浓度为0.4μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮培养细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50μL、100μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明,本试验成功驯化出1株L929悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50μL、100μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了技术支持。

催产素在牛黄体神经内分泌细胞中表达

为了明确牛卵巢黄体中是否存在神经内分泌细胞及其与催产素表达的关系,采用免疫组化链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶法及双重酶标记对4例发情周期牛黄体中神经元特异性烯醇化酶和催产素的分布关系进行了研究。结果显示:黄体各区均含神经元特异性烯醇化酶和催产素样免疫反应阳性细胞,细胞形态类似,均呈现不规则的圆形、卵圆形、三角形或多角形,细胞核位于中央或偏于一侧,部分细胞有突起。双阳性细胞的形态与分布与OT阳性细胞基本一致。对于NSE-OT双阳性细胞和OT阳性细胞数目进行检验表明,二者在数量上无统计学差异。结果提示黄体中OT主要在神经内分泌细胞中表达。

PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的免疫原性分析

本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5-E2。该重组病毒带有His6标签,且胞质区域(CTD)和跨膜区域(TM)均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM。对重组病毒进行Western blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋巴细胞增殖试验。Western blot分析结果表明,重组杆状病毒中表达了重组GP5和E2蛋白;激光共聚焦显微镜检测表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP5和E2蛋白;免疫金电子显微镜观察表明,重组GP5和E2蛋白展示在杆状病毒囊膜上;动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠后产生了抗PRRSV和抗CSFV的特异性抗体;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答。本试验成功构建表面展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和CSFV的混合感染奠定基础。

细胞自噬对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

本研究旨在了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)诱导的细胞自噬在病毒感染过程中所起的作用。用Oregon C24V株感染MDBK细胞,以Western blot、间接免疫荧光、透射电镜三种方法鉴定细胞自噬的产生;通过自噬抑制药物Wortmannin和自噬基因Beclin-1的RNAi干扰阻断自噬,探究自噬对BVDV复制的影响。结果显示,病毒感染可以引起LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化及p62的降解;转染GFP-LC3质粒的细胞,在病毒感染后出现增多的聚集颗粒;透射电镜能观察到细胞中出现大量的双层膜结构;此外,抑制细胞自噬或干扰Beclin-1的表达,细胞上清中病毒的滴度及病毒蛋白质的表达量都有所降低。BVDV感染早期可以诱导自噬的产生,且自噬对病毒的复制有利。

弥散性神经内分泌细胞标志物在妊娠期山羊黄体细胞中的共存

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺（5-HT）、神经特异性烯醇化酶（NSE）和突触素（SYP）4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期（50～70d）奶山羊卵巢，常规方法制备石蜡切片，采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察，对4种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。【结果】S-100蛋白与SYP共存于同一黄体细胞中，表达呈强阳性，阳性细胞主要分布在黄体周边，占总阳性细胞的56．57％。S-100蛋白与5-HT、5HT与SYP、NSE与SYP、5-HT与NSE、S-100蛋白与NSE共存的细胞呈弱阳性，分别占总阳性细胞的18．42％，15．67％，4．31％，4．30％和0．73％，均匀分布于整个黄体中。【结论】S-100蛋白、5HT、NSE和SYP在山羊黄体细胞中有两两共存现象。

5-HT与NSE和SYN在牛周期黄体细胞中的共存

【目的】探讨弥散性神经内分泌细胞标记物在牛黄体细胞中的共存现象,以期为黄体细胞的内分泌研究提供理论依据。【方法】采集黄牛黄体,常规方法制备石蜡切片,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法,结合免疫组化双标记法染色后,镜检拍照,研究牛周期性黄体细胞中5-HT与NSE和SYN的共存情况。【结果】黄体组织中含有这3种标记物的单标记和5-HT与其他两者的双标记免疫反应阳性细胞,其主要以散在形式分布于黄体中,细胞形态多呈圆形、椭圆形和梭形,阳性细胞平均数由多至少依次为:5-HT、NSE、SYN/5-HT、SYN和NSE/5-HT;在黄体细胞以外的卵巢细胞中未观察到这3种物质的存在。【结论】牛黄体组织中存在5-HT、NSE、SYN 3种标记物和SYN/5-HT、NSE/5-HT双标记免疫反应阳性细胞,提示黄体组织在发生的同时也存在着部分细胞的神经内分泌分化。

分枝杆菌分型三重PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在建立一种快速鉴定分枝杆菌的三重PCR方法,并比较分析其在临床检测中的可靠性。根据已发表的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌rv3036c基因,结核分枝杆菌rv1970f基因(RD7)和牛分枝杆菌pncA基因的序列,改造并设计合成了3对特异性扩增引物,建立了一种能对分枝杆菌样品进行初步鉴定的三重PCR方法。结果显示该方法可针对rv3036c、rv1970f和pncA基因分别扩增出大小为500、125和249bp的目的片段,能特异性检测出结核分枝杆菌(500和125bp两条带)和牛分枝杆菌(500和249bp两条带),并可将结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与其他分枝杆菌加以区分。本方法的检测灵敏度为50pg/μL模板基因组DNA。对86株抗酸染色阳性菌进行三重PCR鉴定,鉴定结果与细菌16SrDNA和ITS序列测定结果一致,检测准确度为100%,优于生长特征和生化试验鉴定。

牦牛衣原体灭活疫苗免疫试验研究

为了解牦牛衣原体灭活疫苗在牦牛免疫后的抗体消长规律,本试验在青海省两个示范县贵南和海晏分别选择2个规模养殖户,筛选成年牦牛120头(40头未孕牛、80头怀孕牛)、犊牛各40头进行免疫试验。试验牛群于免疫后第7天、21、30、60、90、120、150、180、210、240、270、300、330天采血后分离血清,采用间接血凝试验检测免疫后抗体效价。结果表明:免疫后第21天的抗体效价成年牛高于1:256,犊牛高于1:1024;免疫后90d内,抗体水平处于上升状态。免疫后第4~8个月抗体水平保持平稳时,第8个月,抗体水平开始下降,但仍成年牛和犊牛抗体滴度仍保持在1:256的效价。由此可见,该疫苗免疫牦牛后免疫抗体产生早、效价高、持续期长,效果明显,对牦牛衣原体病可达到预防的效果。

牦牛衣原体灭活疫苗(GN6株)的保存期试验研究

将20150710批牦牛衣原体病灭活疫苗(GN6株)置4℃冰箱分别保存12个月,20140720苗置4℃冰箱保存24个月,2批苗其外观没有发生改变;免疫后30d时,20150710批苗免疫的个体,产生免疫抗体的滴度虽然不高,但群体免疫抗体阳性可达72.2%,保存24个月的20140720批苗免疫的牦牛,只有少数个体可以产生较高滴度的抗体,绝大多数个体产生抗体滴度低,群体免疫抗体阳性率只达6.54%。由此结果说明:将牦牛衣原体病灭活疫苗(GN6株),置4℃冰箱保存的保存期定为12个月比较切实可行。

鹿茸口服液对小鼠免疫功能的影响

研究鹿茸口服液(Pilose Antler Oral Liquid,PAOL)对小鼠免疫功能的影响。用环磷酰胺复制免疫抑制小鼠模型,100只昆明种小白鼠随机分成10组,分别为生理盐水对照组、免疫抑制对照组、免疫抑制小鼠4个灌胃剂量组(0.4 mL/d、0.2 mL/d、0.1 mL/d、0.05 mL/d)以及正常小鼠4个灌胃剂量组(0.4 mL/d、0.2mL/d、0.1 mL/d、0.05 mL/d);测定脾脏重量和腹腔巨噬细胞吞噬功能,比色法测定血清溶血素(HC50),MTT法检测植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)分别诱导的脾脏T、B淋巴细胞转化功能。结果表明,鹿茸口服液0.05 mL可显著增加正常小鼠溶血素水平,其溶血素值达256.067(P<0.01),其中鹿茸口服液0.4 mL、0.2 mL、0.1 mL三个剂量组能够显著提高免疫抑制小鼠溶血素抗体水平(P<0.01);鹿茸口服液0.4 mL、0.1 mL、0.05 mL三个剂量组对正常小鼠T淋巴细胞转化都有较强的促进作用(P<0.01),鹿茸口服液0.1mL剂量组能够显著提高免疫抑制小鼠T淋巴细胞转化功能(P<0.01),0.4 mL剂量鹿茸口服液在促进免疫抑制小鼠B淋巴细胞转化上也体现出明显的效果(P<0.05);其次灌服鹿茸口服液能够增加正常小鼠脾指数,但腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力相对于对照组没有提高。试验证实,鹿茸口服液能够提高正常小鼠和免疫抑制小鼠机体的免疫功能。

牛疱疹病毒Ⅰ型诱导MDBK细胞凋亡的初步研究

【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞活性检测、细胞核形态观察、DNA ladder检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3活性检测等方法,对BHV-Ⅰ感染的MDBK细胞进行凋亡指标检测。【结果】接毒后24h,MDBK细胞即出现明显的细胞病变。活性检测表明,感染BHV-Ⅰ的细胞活性降低,并且呈病毒感染量和感染时间的依赖性。感染细胞出现核固缩,并呈新月形变化。DNA电泳结果和流式细胞术检测结果均表明,感染BHV-Ⅰ的细胞DNA出现规律的片段化,细胞凋亡比例随感染时间延长而增加,细胞内Caspase-3活性逐渐升高。【结论】BHV-Ⅰ能够诱导MDBK细胞凋亡,并且在诱导细胞凋亡过程中有Caspase-3参与。

企业文化建设之我见

企业文化,作为管理理论中的新概念,是美国学者在本世纪八十年代初首先提出来的。目前,对企业文化的概念有许多不同的理解。其中主要的两种看法是:一种认为企业文化是个综合文化体,包括了企业的两个文明建设;另一种认为,企业文化只是企业的文化娱乐活动。以上两种看法,把企业文化的外延定得太广或太窄,都是不够适宜的。我认为,企业文化是一门研究企业群体意识的发生和发展规律的科学,是一种新的管理思想和管理方式,是一定社会条件下的企业在长期的生产经营中所形成的形态及相应载体的总和。它的主体是具有本企业特色的价值观念、道德规范、文化氛围等观念形态,通过一定的组织机构、规章制度、各种活动等载体表现和发挥作用。中共十四大将"搞好企业文化建设"列入了政治报告,标志着企业文化建设的春天已经到来。如何建设具有本企业特色的企业文化?我认为必须明确以下三个关系。

牦牛衣原体灭活疫苗田间应用及效果检测

在海晏和贵南县筛选衣原体感染阴性牦牛600头,并应用牦牛衣原体灭活疫苗进行免疫。免疫后随机采集第30天牦牛血清230份(海晏120份,贵南110份),采用间接血凝试验检测其免疫抗体。结果显示:牦牛免疫后,未出现不良反应;海晏县和贵南县抗体阳性率分别为96.7%和95.5%。这表明注射该疫苗对牦牛具有安全性,抗体合格率高,免疫效果确实。

基于Android和网页解析的教务系统设计与实现

介绍了基于Android系统开发的教务系统。该系统可帮助厦门大学嘉庚学院教师Android用户便捷访问教务系统和校园资源。在Eclipse开发环境下,使用Http通信协议、开源jsoup解析、json解析和SQLite数据库等开发技术完成系统开发,系统主要功能包括查询课程表、查询课程班信息、查看考试安排、查看今日课程、查看天气、查看开课通知单、查询学生评教、查看学院新闻和摇一摇点名等。

流产衣原体检测技术与分型方法研究进展

流产衣原体(Chlamydia abortus)广泛分布于世界各地,能感染猪、牛、羊等多种家畜,引起孕畜流产,是危害畜牧业最严重的衣原体病原。针对流产衣原体抗体检测的血清学方法如间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等在兽医临床检测中广泛使用。以聚合酶链反应(PCR)为代表的病原分子生物学检测技术敏感性和特异性高,有效地弥补了血清学方法的不足。在流行病学研究中,进一步对流行菌株的分型分析在阐释流产衣原体遗传进化、毒力演变和跨物种传播以及疫情预警和疫苗研制等方面具有重要意义。论文就当前国内外广泛应用的流产衣原体检测技术和分型方法进行综述,可为我国动物衣原体病的诊断和防控提供参考。

军民鱼水情——茂名市创建全国双拥模范城活动纪实

拥军优属、拥政爱民,是我党我军和全国人民在长期革命斗争和建设实践中形成的优良传统,是我们的一个政治优势。在省委、省政府和省军区的领导下,茂名市委、市政府和军分区重视全民国防教育,认真抓好双拥工作,无论是内容还是形式都有了新的发展,整体水平有了很大的提高。在茂名11400多平方公里的热土上,540万军民同呼吸、共命运、心连心。1992年,茂名市被省委、省政府、省军区联合命名为双拥模范城,为茂名增添了光彩。茂名市委、市政府和军分区认识到:军政军民团结,是我们国家长治久安、社会主义事业兴旺发达的重要标志。所以,把双拥工作作为一项重要任务来抓。市成立了由党、政、军领导挂帅的双拥工作领导小组,驻军各单位也成立了拥政爱民领导小组。军地双方一致强调,各级党政领导班子要做到双拥工作"五列入"、"五统一",驻地部队做到"五主动"。

流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

目的建立荧光定量PCR(qPCR)对流产衣原体的检测方法。在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法。方法根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量。结果以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×10~2 copies/μL^1×10~6 copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%。灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量。结论本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法。

都兰县骆驼布鲁氏菌病、衣原体病检测

应用布鲁氏菌(Brucella)虎红平板凝集试验和衣原体IHA试验,对青海省都兰县某骆驼养殖场的47份骆驼血清进行了布鲁氏菌和衣原体病的特异性检测,5份全血样品进行了PCR检测。结果表明,检出布鲁氏菌阳性血清1份,阳性率1.4%,衣原体血清检测全部阴性;布鲁氏菌PCR检测结果全部为阴性,有1份衣原体PCR检测为阳性。说明该骆驼养殖场已经存在布鲁氏菌病和衣原体病,应该引起相关部门的重视并采取相应的措施。

羊流产衣原体的分离鉴定及间接免疫荧光法检测

对收集的疑似衣原体感染的羊流产胎儿样本接种鸡胚卵黄囊进行分离培养,通过PCR-RFLP(限制性片段长度多态性分析)方法鉴定为流产衣原体。将收集到的流产衣原体阳性样本接种Hela229细胞,应用基于流产衣原体MOMP单克隆抗体的间接免疫荧光法,在Hela229细胞浆内可见呈绿色荧光的衣原体包涵体,进一步在病原学水平上确定发生在甘肃省肃南县羊流产的病原为流产衣原体。