妊高征患者亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态的检测

目的 探讨妊高征患者亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因C6 77T多态与血浆同型半胱氨酸 (Homo cysteine ,Hcy)、叶酸及维生素B12 水平的关系。方法 采用 (PCR -RFLPCPR -restrictionfragmentlengthpolymdor phism)法对 82例妊高征患者 (Hcy血症组和无Hcy血症组 )及 90例正常孕妇 (对照组 )进行MTHFR基因C6 77T等位基因检测 ,并同时测量孕妇血浆中的同型半胱氨酸、叶酸和维生素B12 水平。结果 妊高征组A(Hcy血症组 )纯合变异型T6 77/T6 77频率 (0 34)显著高于妊高征组B(无Hcy血症组 ) (0 11,P <0 0 1)和正常对照组 (0 13,P <0 0 1) ;各组中随 6 77T等位基因数量的增加 ,血浆Hcy水平也增加 ,但是对叶酸和维生素B12 水平没有明显影响。结论 MTH FR基因C6 77T多态可以导致妊高征孕妇血液中同型半胱氨水平升高 ,MTHFR基因C6

血管紧张素原基因启动子6G-A突变与先兆子痫关系的研究

为探讨血管紧张素原 (AGT)基因启动子 6G A突变与先兆子痫的关系 ,我们采用等位基因特异性PCR法对 5 8例先兆子痫孕妇和 90例正常孕妇进行了检测 ,结果 ,先兆子痫患者中 6A等位基因频率 (0 76 )明显高于对照组 (0 6 4) ,我们认为AGT基因启动子 6G A突变是先兆子痫发病的危险因素之一。

凝血因子V基因Leiden突变与严重先兆子痫的关系研究

为探讨凝血因子Ｖ基因Ｌｅｉｄｅｎ突变与孕妇严重先兆子痫的关系。方法：采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态分析对３５例严重先兆子痫孕妇及９０例正常对照组孕妇进行等位基因检测。结果：３５例严重先兆子痫患者中有３人，为Ｌｅｉｄｅｎ突变杂合子（８．６％），而正常对照组中的９０人中只有１人为Ｌｅｉｄｅｎ突变杂合子（１．１％），二组间差异显著，ｘ２＝４．８９，Ｐ＜０．０５。结论：因子Ｖ基因Ｌｅｉｄｅｎ突变携带者患严重先兆子痫的风险高于正常组。

土荆皮酸对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移及基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究土荆皮酸(PAB)对宫颈癌Hela细胞侵袭转移及基质金属蛋白酶表达的影响,探讨其作用机制。方法将人宫颈癌HeLa细胞分为空白对照组、DDP(3.125μg/ml)组、PAB20μmol/L、PAB10μmol/L、PAB5μmol/L组。采用Transwell侵袭系统观察PAB对宫颈癌细胞侵袭转移的影响,RT-PCR、Western blot法检测PAB对宫颈癌细胞MMP22、MMP29 mRNA及蛋白表达的影响。结果PAB20μmol/L组和PAB 10μmol/L组穿过滤膜的细胞数分别为15.60±2.45、20.14±2.48,显著低于空白对照组(46.50±4.70)和PAB5μmol/L组(42.44±5.80,P<0.05),但与DDP组(18.31±2.93)比较差异无统计学意义。MMP22 mRNA、蛋白表达量PAB20μmol/L组(分别为0.58±0.07、0.75±0.04)和PAB10μmol/L组(分别为0.71±0.07、1.26±0.04)均显著低于空白对照组(分别为0.88±0.06、1.88±0.12,P<0.05),但与DDP组(分别为0.60±0.05、0.73±0.04)比较差异无统计学意义。MMP29mRNA、蛋白表达量PAB20μmol/L组(分别为0.28±0.02、0.56±0.03)和PAB10μmol/L组(分别为0.35±0.02、0.97±0.03)均显著低于空白对照组(分别为0.64±0.02、1.56±0.03,P<0.05),但与DDP组(分别为0.22±0.02、0.52±0.03)比较差异无统计学意义。结论PAB能有效抑制宫颈癌的侵袭和转移,这可能与降低宫颈癌细胞运动能力,抑制MMP22、MMP29的表达有关。

miR-146a基因多态性与腔隙性脑梗死的关系

目的探讨miR-146a基因多态性与腔隙性脑梗死(LI)的关系。方法选择LI患者173例(观察组)和与其性别、年龄匹配的非心脑血管疾病体检者298例(对照组),采用SNaPshot法检测血miR-146a rs2910164和rs57095329位点的基因多态性,B型彩色多普勒超声仪检测颈动脉内膜中层厚度(CIMT)。结果观察组miR-146a rs2910164位点GG基因型频率为8.67%、CC+CG基因型频率为91.33%、G等位基因频率为33.24%,对照组分别为17.11%、82.89%、39.93%,P均<0.05。两组miR-146a rs57095329基因型和等位基因频率比较,P均>0.05。观察组70岁以下者miR-146a rs2910164位点G等位基因频率为28.57%,对照组为39.12%,P<0.05。观察组miR-146a rs2910164和rs57095329位点正常和突变基因型患者的CIMT比较,P均>0.05。结论 LI患者miR-146a基因rs2910164位点G等位基因频率降低,G等位基因可能是其发病的一种保护性因素。

土荆皮酸对人卵巢癌细胞端粒酶活性及有关基因的影响

目的探讨土荆皮酸(PAB)对人卵巢癌细胞株A 2780细胞端粒酶活性的影响及其机制,为开发新的治疗及预防卵巢癌的天然化合物提供基础。方法采用改良的端粒重复扩增(TRAP)-ELISA方法检测土荆皮酸对A 2780细胞端粒酶活性的影响。半定量RT-PCR方法检测PAB作用后A 2780细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)及c-myc原癌基因mRNA的表达水平。结果(1)PAB对A 2780细胞增殖珠抑制呈剂量依赖效应,IC50为5μmol.L-1;(2)端粒酶活性经过PAB处理后呈现明显的下降趋势,且具有时间-效应关系,培养48 h后,端粒酶活性受到显著抑制;(3)hTERT mRNAc、-myc mRNA表达量在5μmol.L-1PAB作用48 h后下降显著,较对照组分别下降了44.3%和53.4%(P<0.05)。结论土荆皮酸可通过下调hTERT基因转录抑制A 2780细胞的端粒酶活性,PAB很有可能是一种新的治疗并预防卵巢癌的天然化合物。

端粒酶活性检测在子宫颈癌早期诊断中的初步探索

观察端粒酶活性在子宫颈癌中的阳性率 ,探讨子宫颈癌发生过程中端粒酶被激活的关键点及其在子宫颈癌早期诊断及预后中的诊断价值。方法 :用以 PCR为基础的端粒重复序列扩增 (TRAP)法测定 6 2例正常宫颈标本、6 8例宫颈上皮内瘤样变 (CIN) ,2 9例浸润性鳞状细胞癌中的端粒酶活性。结果 :它在正常宫颈标本中发现 5例有端粒酶的活性表达 (8.1% ) ,在 6 8例 CIN中发现 2 7例有端粒酶活性 (39.7% ) ,在浸润性宫颈鳞癌中有 2 8例端粒酶活性表达 (96 .6 % ) ,正常组和 CIN组比较 ,差异显著 (P<0 .0 0 1) ,CIN 和 CIN 组比较 ,差异显著 (P<0 .0 1) ,宫颈浸润性鳞细胞癌和 CIN 比较 ,差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :端粒酶活性随宫颈上皮内瘤样变的加重而阳性率增高 ,端粒酶的激活是宫颈癌发生过程中的早期事件 ,检测端粒酶活性对早期诊断宫颈癌有一定意义。

去整合素金属蛋白酶10基因启动子区多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系

目的观察腔隙性脑梗死患者去整合素金属蛋白酶(ADAM)10基因启动子区多态性变化,分析此多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系。方法研究对象为173例腔隙性脑梗死患者(梗死组)和297例非脑血管病体检者(对照组),采用Snapshot分型技术检测ADAM10基因启动子区rs653765和rs514049位点多态性,采用B型彩色多普勒超声仪测量颈动脉内膜中层厚度(CIMT);比较两组位点多态性及其与梗死组性别、年龄、CIMT的关系。结果梗死组ADAM10基因rs653765位点CC基因型频率显著低于对照组(P=0.008 0)、隐性模型CT+TT基因型频率显著高于对照组(OR=0.54,95%CI为0.36~0.81,P=0.002 9),T等位基因频率显著高于对照组(OR=1.95,95%CI为1.37~2.79,P=0.000 2);两组ADAM10基因rs514049位点的基因型频率和等位基因频率无显著差异(P>0.05)。携带ADAM10基因rs653765位点T等位基因的男性发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.51,95%CI为1.00~2.28,P=0.048),而≥70岁人群中携带CT基因型或T等位基因者发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.69,95%CI为1.00~2.85,P=0.046);ADAM10基因rs653765和rs514049位点的多态性与腔隙性脑梗死患者CIMT无明显相关。结论 ADAM10基因rs653765位点T等位基因可能与腔隙性脑梗死的发病有关。

母亲的MTHFR基因多态性位点与NTD发生的关系

为了探讨母亲的亚甲基四氢叶酸还原酶基因Ｃ６７７Ｔ突变和神经管缺陷发生的关系，我们采用ＰＣＲＲＦＬＰ技术对２７ 位生过ＮＴＤ患儿的母亲和２４ 位生过正常孩子的母亲的等位基因进行了检测。结果发现正常对照母亲组中ＶＶ 基因型的频率为１２－５％ ，而生过ＮＴＤ患儿母亲组中ＶＶ 基因型的频率为３３－３％ ，携带ＶＶ 基因型的母亲生ＮＴＤ患儿的危险性比非ＶＶ 基因型的母亲提高３ 倍。因此，我们认为在ＮＴＤ 发生和母亲的ＭＴＨＦＲ的ＭＴＨＦＲＣ６７７Ｔ突变有一定的关联。

Caspase 3在PAB诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用

目的研究Caspase3在土荆皮酸诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法使用不同浓度的PAB处理He-La细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用Western Blot方法检测HeLa细胞经PAB作用前后Bcl-2和Caspase3蛋白的表达变化。结果经PAB作用后,HeLa细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞伴随细胞凋亡,随药物浓度增加Bcl-2蛋白表达逐渐下降,Caspase3蛋白表达上调,Caspase3活化百分率增高。结论PAB能通过调节Bcl-2蛋白的表达激活Caspase3,从而诱导HeLa细胞发生凋亡。

应用基因芯片技术检测Aβ_(1-40)诱导痴呆大鼠脑皮质差异基因的表达

目的:比较Aβ处理前后大鼠额叶皮质的基因表达谱差异,探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性的分子机制。方法:应用含有4200条大鼠基因的cDNA表达谱芯片对Aβ1-40诱导后的大鼠额叶皮质进行基因表达谱分析。结果:芯片杂交结果分析显示,Aβ1-40诱导组和生理盐水对照组额叶皮质间的差异表达基因共46个,包括上调基因18个,下调基因28个。Go Miner软件对差别表达基因生物学功能的分类结果显示这些基因主要与细胞信号传导、细胞增殖与生长、免疫反应、细胞粘附、离子通道和能量代谢等功能有关。结论:Aβ通过多种途径和机制触发和诱导了神经元的变性,我们的结果为进一步阐明阿尔茨海默病的分子机理提供了一些新的线索。

Nrf2基因rs35652124C/T多态性与伴热性惊厥史的难治性颞叶癫痫的相关性研究

目的：探讨核因子E2相关因子2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2）基因rs35652124C/T突变和伴热性惊厥史的难治性颞叶癫痫（febrile seizure refractory temporal lobe epilepsy ，FRTLE）的相关性。方法通过病例对照研究，收集18例汉族FRTLE患者、166例汉族非同时兼热性惊厥史及难治性的颞叶癫痫（非FR？TLE）患者及183例汉族非癫痫患者。使用SNaPshot方法检测患者外周血Nrf2基因rs35652124C/T多态性。结果有热性惊厥（febrile seizure，FS）史的患者占难治性颞叶癫痫（refractory temporal lobe epilepsy, RTLE）的25%，明显高于非RTLE的12.5%（OR：2.3，95%CI：1.07~5.05，P=0.029）。FRTLE组分别与非FRTLE组及非癫痫对照组比较，rs35652124 CC、CT、TT基因型及C、T等位基因间的差异无统计学意义。结论FS可能是RTLE的危险因素，而rs35652124 C/T突变与FRTLE无关。

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的:探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响。方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性。结果:在34例卵巢癌组织中,端粒酶阳性者30例。在16例端粒酶活性低于2 U者中,15例化疗有效,仅1例出现复发,无死亡。在14例端粒酶活性高于2 U者中,化疗有效9例,进展与复发或死亡5例。结论:随着端粒酶活性的增高,卵巢癌对化疗的敏感性下降,复发率增加。

梅毒螺旋体TpN15抗原基因的扩增、克隆及表达

目的 用基因工程技术表达梅毒螺旋体TpN15重组抗原 ,为进一步研制梅毒预防性疫苗和诊断试剂盒打下基础。方法 采用PCR技术扩增梅毒螺旋体TpN15基因 ,然后克隆到原核表达载体pET2 8b中表达TpN15重组抗原蛋白。结果 成功的构建了pET2 8b -TpN15重组表达载体 ,重组的TpN15蛋白在大肠杆菌BL2 1中得到稳定表达。结论 梅毒螺旋体TpN15基因在大肠杆菌中的成功表达为建立梅毒血清学诊断的新方法奠定了基础。

CLN3基因在卵巢癌和子宫内膜癌中过表达的研究

目的 研究CLN3基因在卵巢癌和子宫内膜癌中的表达水平变化。方法 采用半定量RT-PCR方法和Western Blot方法检测卵巢癌和子宫内膜癌组织中CLN3基因表达水平变化。结果 发现CLN3在所有的卵巢癌和子宫内膜癌组织中 有不同程度的表达水平升高现象。结论CLN3基因表达水平升高可能与卵巢癌和子宫内膜癌的发生有关。

端粒酶活性检测在滋养细胞肿瘤早期诊断中的探讨

目的 :观察端粒酶活性在滋养细胞肿瘤中的阳性率 ,探讨其在滋养细胞肿瘤早期诊断中的价值。方法 :用端粒重复扩增 -聚合酶链反应 (PCR+ TRAP)法测定 3 1例绒毛膜癌标本、 3 7例侵蚀性葡萄胎中的端粒酶活性。结果在 3 1例绒癌标本中发现 3 1例有端粒酶的活性表达 (10 0 % ) ,在 3 7例侵蚀性葡萄胎中发现 3 5例有端粒酶活性 (95% ) ,在 62例正常对照标本中发现有 2例端粒酶的活性表达 (3 % ) ,滋养细胞肿瘤组和正常对照组比较 ,差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :端粒酶活化是滋养细胞肿瘤中的普遍现象 。

CLN3基因在卵巢癌中过表达的研究

目的:研究CLN3基因在卵巢癌中的表达水平变化。方法:采用半定量RT-PCR方法和Westernblot方法检测卵巢癌及正常卵巢组织中CLN3基因表达水平变化。结果:通过半定量RT-PCR和Westernblot分析,发现CLN3在所有的卵巢癌组织中有不同程度的表达水平升高现象。结论:CLN3基因表达水平与卵巢癌的发生有关。