猫鼻气管炎病毒、杯状病毒、泛白细胞减少症病毒的分离及其形态学观察

根据病毒的理化特性 ,从猫三联活疫苗中分离出猫鼻气管炎、猫杯状和猫泛白细胞减少症病毒 ;筛选出每种病毒敏感的细胞 ,并将该 3种病毒分别在其中传代与扩增 ;通过电镜观察此 3种病毒的形态学特征及其在宿主细胞内增殖部位、分布情况等 ,并以此对猫 3种病毒进行了初步鉴定。

五种动物传代细胞系对裸鼠的致瘤性

目的 观察 5种动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤性 .方法 犬肾细胞系 (MDCK)、非洲绿猴肾传代细胞系(Vero)、猫肾细胞系 (F81 )、地鼠肾传代细胞系 (BHK2 1 )和恒河猴肾细胞系 (MA- 10 4)分别培养后 ,选择对数生长期的细胞进行消化、离心、计数后 ,制备细胞悬液 ,接种裸鼠 ,定期观察 ,通过病理组织形态学观察判定结节是否具有肿瘤的特性 .结果 Vero、F81 、MA- 10 4接种裸鼠后全部有肿块形成 ,经病理形态学检查 ,均为炎性组织 ,其致瘤率为零 .MDCK在 30代以内 ,致瘤率为零 ,第 30～ 6 6代致瘤率为 10 %～ 40 % ,BHK2 1 致瘤率为 10 0 % .结论 F81 ,Vero和 MA- 10 4属非致瘤性细胞系 ,MDCK属低致瘤性细胞系 ,但经冻融或超声波裂解后对裸鼠无致瘤性 ,BHK2 1 属致瘤性细胞系 ,其正常细胞经裂解后仍具有致瘤性 。

犬细小病毒弱毒株的分离及疫苗应用

目的 从犬四联弱毒样品中分离获得一株细小病毒(CPV)弱毒株 ,用于疫苗制备 .方法 根据犬副流感的血球吸附特性、细胞培养特性以及异种病毒抗血清阻断法分离病毒 .该病毒简称为 CPV- XN1 株 .并对犬细小病毒疫苗的免疫性和动物安全性进行了研究 .结果 病毒分离后其血凝效价(HA)值为 1∶ 10 2 4～ 1∶ 40 96或 10 7.0 TCID5 0 ;在电镜下可见较典型的犬细小病毒形态结构特征 ;免疫电镜下见到抗体分子已被吸附在病毒颗粒表面 ;病毒接种到健康幼犬后 15 d内未发现仔犬死亡 ;实验组犬均未出现临床症状 ;疫苗保存 6mo,其效价只降低一个滴度 .

动物病毒疫苗研制及其产品的电镜检测

应用电镜技术检查了某些原代和传代细胞 ,并且跟踪检查了疱疹病毒、痘病毒、腺病毒、细小病毒、冠病毒、RNA反录病毒、呼肠病毒、动脉炎病毒、小RNA病毒、弹状病毒、杯状病毒、黄病毒、双RNA病毒、正粘病毒、副粘病毒等某些成员的驯化、培育及筛选的目的毒。结果发现了部分培养细胞有支原体污染 ,有的还有细菌污染 ;同时在某些培养的原毒、基础种毒、生产种毒及其产品中也发现了一些病毒的污染和联苗中互相感染现象。如此证明了电镜技术能够及时发现问题 ,及时解决问题 ,使之科研少走弯路 。

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。

猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗研制与探索最佳冻干曲线的研究

生物制品进行冷冻干燥过程中 ,或多或少会损失一定的效价 ,可直接影响产品效力和免疫原性。本文为研制出高效价和保持期长的猪泛白细脆减少症弱毒冻干疫苗 ,为降低效价损失 ,选择出最佳冷冻干燥曲线 ,使冻干后的产品效价损失减少到最低水平。试验结果选用全程为17h的冻干曲线是科学的。

抗犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白(Ig)的精制试验与检测结果

随着国民经济的发展 ,我国养犬业也得到了大力发展 ,但犬细小病毒性肠炎 (血痢 )是犬群中最常见的传染病之一 ,其发病率和死亡率高达 5 0 %～ 10 0 % ,严重影响军犬、警犬、珍稀犬、名贵犬及家犬和肉犬的生命安全。目前仅采用疫苗预防该病 ,但因诸多原因 ,免疫接种失败时有发生 ,病犬仍然受到生命安全威胁。选用陕西关中富有的特产大型毛驴作为免疫动物 ,研制用于预防和治疗犬细小病毒性肠炎的有效药物 抗犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白 (Ig)生物制剂获得成功。按照农业部有关规定和要求 ,经在全国 31个省、市、区试用后 ,治疗病犬 10万余只 ,应急预防 5万余只 ,治愈率高达 92 %。

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为，第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。

应用免疫金电镜技术检测犬的两种副粘病毒免疫球蛋白

应用免疫金电镜技术检测犬瘟热病毒 (CDV)和犬副流感病毒 (CPIV )免疫球蛋白 (Ig)。结果证明驴所产生的Ig与CDV、CPIV具有较强的特异性反应。

应用电镜技术对狂犬病不同毒株的形态学研究

将狂犬病固定毒CTN株 (中国济南株 )、CVS株 (国际标准攻击毒株 )、ERA株 (兽用疫苗弱毒株 ) ,分别在小鼠脑组织增殖及ERA毒株在BHK2 1 传代细胞增殖 ,通过超薄切片和负染色制备样品 ,电镜观察。结果发现 ,在相同鼠脑组织中 ,CTN株病毒粒子比较难查找 ,而CVS株和ERA株较易被发现。另外 ,在不同毒株的脑组织和细胞培养物中还发现了大量的非典型粒子 ,诸如削了顶的粒子以及锥形、柱形等形态 ,同时还发现了胞浆包涵体。通过试验 ,我们认为 :( 1)典型病毒数量与免疫原性呈正相关。 ( 2 )在观察鼠脑组织中的病毒时 ,发现有神经髓鞘部位是难以找到病毒粒子的。 ( 3)狂犬病病毒粒子存在于宿主细胞浆内 。

抗犬细小病毒免疫球蛋白临床应用研究

用犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白注射液对382例临床诊断为犬细小病毒性肠炎病犬进行了治疗,结果治愈344只,治愈率为90.05%;早期治疗效果更好,小于3个月的幼犬治愈率为93.88%。对临床病例进行分析,进一步证明该产品对犬细小病毒病的治疗是有效的。

应用电镜技术和血凝试验检测犬细小病毒和犬腺病毒

电镜技术和血凝试验是检测犬细小病毒和犬腺病毒快速而简便的方法。本试验结果表明,两种方法检验结果大部分相符,但各具特色。电镜技术的优势在于能够直观地显示目标病毒的生长发育、粒子的完整性以及有无非目标病毒、细菌、支原体等污染情况,这对于动物病毒疫苗种毒质量的检测是十分重要的。

猕猴腹泻症“轮状病毒病”油剂灭活疫苗研制与免疫效果观察报告

供第四军医大学科研、教学、医疗用的实验用猕猴群中 ,分别有3只猕猴患腹泻 (带有红、白粪便 ) ,经治疗和抢救无效死亡。剖检发现肠粘膜呈浆液性脱落 ,肠壁散在性出血点。电镜负染与真染切片观察确诊为典型轮状病毒粒子时 ,拟作为制苗抗原 ,试制猕猴“轮状病毒病”油佐剂灭活疫苗 。

电镜技术检验犬四联弱毒苗种子毒及成品的外源病毒

我们用电子显微镜（电镜）技术，检验犬四联弱毒疫苗种子毒及其成品疫苗中的外源毒。经对每批种子毒细胞培养物及间隔一定批次成品疫苗抽样检查，其中在一批种子毒细胞培养物中发现了呼肠病毒污染，得到及时有效的处理。同时证明应用电镜技术检验外源病毒确是一种快速而有效的方法。

四种传代细胞株软琼脂抛锚能力观察

目的 观察传代细胞在软琼脂中生长情况 .方法 将4种细胞与软琼脂混合均匀 ,铺于平皿中 ,置 37℃ ,5 0～ 10 0m L·L- 1 CO2 环境中培养 .观察细胞集落形成情况 .结果 本实验室的五株非洲绿猴肾细胞 Vero- XAYU ,Vero- XAYE,Vero- XAH,Vero- XAJN和 Vero- XAM,三株猫肾细胞 F81 -XAJU,F81 - XAM和 F81 - XAK不呈现致瘤性独立抛锚生长 ;犬肾细胞 MDCK- XAYE,MDCK- XAYU,MDCK- XAJN,MD-CK- XAJA和 MDCK- XAM五株则呈现较低的致瘤性独立抛锚生长 ;两株金黄地鼠肾细胞 BHK2 1 - XAYU和 BHK2 1 - XAM及两株非洲绿猴肾细胞 Vero- XAYU和 Vero-

犬瘟热病毒流行株的驯化与鉴定

目的 驯化并鉴定犬瘟热病毒疫苗候选毒株 .方法 犬瘟热流行毒株经鸡胚绒毛尿囊膜→ MA10 4→ Vero→ MDCK→ MA10 4上依次连续传 112代 ,传代过程中进行蚀斑克隆、扩增以及每代 TCID5 0 效价测定 .驯化获得 1株弱毒株 (简称CDV- XN1 1 2 ) ,然后进行电镜观察及抗原性、遗传稳定性、神经毒力等试验 .结果 分离到的犬瘟热流行毒株 ,驯化到 90代时失去对犬的致病性 ,TOID5 0 效价达 10 - 5 .5 · m L- 1 ,电镜负染观察可见此毒株具有较典型的犬瘟热形态结构 ;免疫电镜观察发现 CDV- XN1 1 2 的兔抗 Ig G与国际标准毒株 Onder stepoot病毒粒子有清晰可见的桥连支架 .其病毒的中和抗体效价(SN)达 5 12 .CDV- XN1 1 2 和 SH- CDV以及 onder stepoot- CDV等 3种毒株之间均有程度不同的交叉中和现象 .在 MA10 4细胞传代过程中未发现返祖现象 .结论 CDV- XN1 1 2

四种动物传代细胞染色体遗传变异率分析

目的 分析制苗用传代细胞染色体的变异稳定性 ,以判定其质量 .方法 采用直接法制取传代细胞染色体标本 ,用常规 Giemsa染色 ,10 0 0倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目 ,求出染色体变异率 (% ) ,并进行核型分析 .结果 F81为亚二倍体细胞系 ,染色体众数为 30 ;Vero是超二倍体细胞系 ,染色体众数为 73～ 75 ;MDCK属于亚四倍体细胞系 ,染色体众数为 12 5～ 135 .BHK2 1 为亚二倍体或亚四倍体细胞系 ,亚二倍体众数为 42 ,亚四倍体细胞众数为 72～ 74.四种细胞系的染色体畸变率为 0 %～ 6 % ,均较低 .结论 四种传代细胞遗传学特性相对稳定 ,各代次间无本质差异 。

驴抗犬细小病毒IgG的研制

用关中驴制备抗犬细小病毒 (CPV)免疫球蛋白 ,预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物 ,通过免疫驴 ,用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体 (IgG) ,经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG ,免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物 ;血凝抑制试验 (HI)≥1∶512(IgG浓缩浓度为60mg/mL) ;可保护犬免受CPV攻击 ;室温保存半年 ,4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV -IgG。

四种动物传代细胞染色体遗传变异率分析

本文的目的分析制苗用传代细胞染色体的变异稳定性 ,以判定其质量。方法采用直接法制取传代细胞染色体标本 ,用常规Giemsa染色 ,10 0 0倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目 ,求出染色体变异率( %) ,并进行核型分析。结果 F81为亚二倍体细胞系 ,染色体众数为 30 ;Vero是超二倍体细胞系 ,染色体众数为 73～ 75 ;MDCK属于亚四倍体细胞系 ,染色体众数为 12 5～135。BHK2 1为亚二倍体或亚四倍体细胞系 ,亚二倍体众数为 42 ,亚四倍体细胞众数为 72～ 74。四种细胞系的染色体畸变率为 0 %～6 %,均较低。结论是四种传代细胞遗传学特性相对稳定 ,各代次之间无本质差异 。