cDNA末端快速扩增技术(RACE)的优化与改良

cDNA末端的快速扩增(RACE)法是延伸已知部分外显子序列和克隆全长cDNA基因的主要方法之一.广泛用于许多已知功能基因片段的进一步延伸和全长cDNA的克隆.但由于其过程复杂、涉及多步连续的酶促过程,如反转录、TdT加尾、第二链合成、RACE PCR扩增及RACE产物克隆等,在实际应用中有许多问题和相当难度.主要针对RACE各步骤中存在的问题进行了分析,并对其优化和改良进行了综述.

决明异分支酸合酶基因的克隆及表达分析

异分支酸合酶(Isochorismate synthase,ICS)控制着分支酸到异分支酸衍生的各种产物的分配,据报道它是植物体内蒽醌类物质合成的限速酶.该文采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆其基因全长(SoICS);以荧光定量PCR(FQ-PCR)测定其在植株各部位的表达谱并考察其与蒽醌质量分数的关系.结果表明,SoICScDNA全长为2 103bp(GenBank Accession KF547925);有多个非典型的加尾信号;含一个总长为1 713bp的完整阅读框,编码570个氨基酸;SoICS含有AtICS1和AtICS2中与ICS催化活性相关的5个保守关键氨基酸残基;其N-端有48个氨基酸残基的推定前导序列;具有典型的保守分支酸结合结构域;有多个显著磷酸化位点;其蛋白质三维结构是一个紧凑型球状结构;系统分析显示,决明ICS与蓖麻、毛果杨和山杨的ICS关系较近.FQ-PCR分析表明,ICS基因在叶中表达水平最高,其次为茎、荚果皮、幼果和种子,在根和花中的表达量最低;总蒽醌、游离蒽醌和结合蒽醌质量分数的相关性达到极显著水平,但SoICS转录本表达量和蒽醌质量分数之间没有达到显著相关水平.

草石蚕扦插繁殖技术研究

[目的]为草石蚕的科学栽培提供依据。[方法]分别在5月20日和10月15日取草石蚕绿苗期的幼嫩枝条进行扦插育苗,观察幼苗生根和生长情况并计算成活率及繁殖系数,寻找其扦插繁殖的最佳环境条件。[结果]在春季,草石蚕的扦插苗在20d后即可生根,生根率达95%,生根后成活率为100%,而繁殖系数达到23.75。而秋季扦插苗的生根率只有10%左右,繁殖系数为2.5。春季扦插苗在整个生育过程中生长良好,能正常越冬,次年正常萌发。[结论]草石蚕的扦插繁殖以春季(5月20日左右)为宜。

胆碱和乙醇胺对稻苗生长的影响及生理机制

在稻苗培养液中添加胆碱或乙醇胺能参与稻苗磷脂的合成。磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)均约增加1倍,且PC 和PE 可相互转化。当培养液中胆碱或乙醇胺的浓度分别为9.0mM 和3.0mM 时,能提高超氧化物歧化酶(SOD)活性;降低丙二醛(MDA)含量及电导百分比,表明它们有保护质膜的作用。胆碱或乙醇胺能显著促进稻苗生长,提高单株叶干物重和苗基部1cm 处的长径。

创新研究生高级生物化学课程教学的实践探索

本文在详细分析了高校研究生"高级生物化学"课程的发展和建设过程后,结合作者多年的该课程的教学与实践,提出并分析了目前存在的问题,确定了课程的性质、地位和作用,提出了大纲修订、内容优选,课件制作以及教学法选择等思路和建议,并总结了作者自己在教学中取得的成果和经验。这对该课程的建设和发展具有重要的指导意义。

新颖栽培丹参材料的rDNA内外转录间隔区(ITS和ETS)分子标记鉴定

本研究对前期发现的2个新颖多年生大紫花单株(V-HNYZ-bV-1和W-SXXA-bV-1)和1个二年生白花丹参(Salvia miltiorrhiza)栽培居群(W-SCHY-W-1)材料,进行了基于其rDNA内、外转录间隔区(ITS和ETS)的分子标记鉴定。结果表明:W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1的ITS的GC含量均较高,W-SCHY-W-1的ITS和ETS的GC含量最低;新颖材料W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1的ITS序列变异率较高,均高于W-SCHY-W-1,而对于ETS序列,W-SXXA-bV-1和V-HNYZ-bV-1接近(7.1%~6.5%),但低于W-SCHY-W-1(8.2%);W-SXXA-bV-1与V-HNYZ-bV-1亲缘关系较近,W-SXXA-bV-1、V-HNYZ-bV-1和W-SCHY-W-1均与Q-DZH-V-4亲缘关系较远,V-HNYZ-V-1与Q-DZH-V-4亲缘关系很近。上述结果与栽培形态观察结果都高度一致表明:W-SXXA-V-1和V-HNYZ-V-1是康定或甘西鼠尾草,新颖单株材料W-SXXA-bV-1可能为W-SXXA-V-1的突变体,V-HNYZ-V-1和Q-DZH-V-4同为荔枝草,V-HNYZ-bV-1可能为混杂在V-HNYZ-V-1中的康定或西藏鼠尾草,与W-SXXA-bV-1非常相似。W-SCHY-W-1为粘毛鼠尾草。

水稻酯酶同工酶谱差异研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５种杂交稻及其亲本和１０种常规稻之间的酯酶同工酶谱研究表明，５种杂交稻种子均具９Ａ（Ｒ＿ｆ＝０，６１８）特征带，１０种常规稻绝大多数不具此带。杂交稻亲本表现较强的２Ａ（Ｒ＿ｆ＝０．６４３）和３Ａ（Ｒ＿ｆ＝０．５４３）酶带。萌发生长８～１８天的汕优６３稻苗具活性较强而稳定的１２Ａ（Ｒ＿ｆ＝０．５４３）酶带。萌发生长８～１８天的汕优６３稻苗具活性较强而稳定的１２Ａ（Ｒ＿ｆ＝０．３１２）特征带，此带在汕优２２中活性较弱，而岗优１２，岗优２２和Ⅱ优６３均无此带，这可能是汕优系列杂交稻与其它系列杂交稻的特征差异之一。

外源蔗糖促进蚕豆离体表皮上气孔开放的研究

在非光合条件下研究了外源蔗糖对经暗饥饿处理、超声波“分离”的离体蚕豆 (Viciafaba)下表皮上气孔的效应。结果发现 ,在相对较长的 2 4h无菌培养过程中 ,外加蔗糖能显著促进离体蚕豆下表皮上气孔的开放。在无气孔开放促进剂Fusicoccin (FC)存在的情况下 ,0 .1mol/L蔗糖在 0 .0 1mol/LMES-NaOH和MES -KOH(pH 6 .1 )中 ,分别增加开度 (宽度 )达 2 .0 μm和 2 .6 μm ;在 1 0 -6mol/LFC的存在下 ,0 .1mol/L蔗糖在MES -NaOH和MES-KOH中 ,分别增加开度达 5 .0 μm和 5 .5 μm ;不同浓度的蔗糖 (0 .0 0 5～ 0 .2mol/L)对气孔开度的试验表明 :其开度的增加值与外源蔗糖的浓度呈正相关 ,其最大开放时的浓度为 0 .1mol/L。同时还观察到 ,蔗糖可维持保卫细胞的活力和其中为数不多的叶绿体的完整性。

基于科研能力培养的高级生物化学研究生平台课教学

本文简述了研究生平台课"高级生物化学"的性质、地位和作用,总结了课堂教学中培养学员的科研能力、科研素质、科研思维及科学精神的一些实践探索成果。对将此课程建成研究生优质平台课程有着重要的意义和作用。对其他相关研究生课程建设也具有重要的指导意义。

在非光合条件下外源蔗糖能促进蚕豆的气孔开放(英文)

:蚕豆植株经暗饥饿处理 40h后 ,取其下表皮 ,再用超声波“原位分离”下表皮上的保卫细胞对 ,然后在无菌、非光合条件下 ,用外源蔗糖处理蚕豆下表皮上的保卫细胞对 ,考察其对气孔开放的效应。结果发现 ,在 1d的无菌培养过程中 ,蔗糖显著促进了气孔的开放。 1 0 0mmol/L的蔗糖在 1 0mmol/L的MES NaOH/KOH (pH 6 .1 )缓冲液中 ,开度分别增加 2 .0 /2 .6 μm ;在 1 μmol/L的气孔开放促进剂fusicoccin (FC)的存在下 ,1 0 0mmol/L的蔗糖在MES NaOH/KOH (pH 6 .1 )缓冲液中分别增加开度 5 .0 /5 .5 μm。不同浓度 (5 2 0 0mmol/L)的蔗糖处理结果表明 :气孔开度的增加与蔗糖浓度呈一定的正相关 ,浓度为 1 0 0mmol/L的蔗糖处理表现出最大促进作用。同时还初步观察到 ,蔗糖可维持保卫细胞存活率和叶绿体的完整性。

蚕微卫星DNA体外自我扩增条件初步研究

采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP PRC)法 ,初步研究了家蚕、野桑蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增条件。质量浓度为 10 0mg/L的基因组DNA经 10 0℃变性 15min后 ,与等量相同浓度未变性的DNA混合作为模板 ,在 80 μL扩增体系 [含 0 2mmol/LdNTPs、5 0mmol/LKCl、10mmol/LTris HCl(pH 9 0 )、4mmol/LMgCl2 、1 2 5UTaqpolymerase]中加入 1μL此混合模板 ,在92℃、1min→ 5 5℃、2min→72℃、2min ,30～ 90次累积循环的扩增条件下 ,成功地得到了PCR产物。反应体系中 ,基因组DNA的适宜质量浓度为 1 2 5mg/L。GSP PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段回收后 ,在同样条件下 ,30～ 6 0个循环可得到同样大小范围的产物。GSP PCR产物经 6 %的变性测序胶电泳 ,得到典型的梯状带 ,表明为微卫星DNA。

Ⅱ优63及其亲本酯酶同工酶电泳分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析Ⅱ优63及其亲本Ⅱ-32A和Ⅱ-32B稻苗的酯酶同工酶表明:萌发生长10～18天的Ⅱ优63稻苗中具活性渐强的特征带17A(Rf=0.745),而其亲本均无此带。

蚊子全基因组中微卫星的丰度及其分布(英文)

微卫星是近年大力开发的一种遗传标记,为推进按蚊遗传学相关研究,对按蚊全基因组中由1～6个碱基重复单元组成的简单序列重复(微卫星) 进行了分析. 进而对其微卫星的丰度和分布进行了比较分析,也比较了染色体各个区域(外显子、内含子和基因间隔区) 之间的分布差异. 微卫星在按蚊基因组中的比例约占2.14%,其中X染色体拥有微卫星的密度最大. 对按蚊基因组中微卫星丰度而言,A碱基和C碱基重复在基因组中丰度相似,AC单元的丰度是AG单元的两倍多,然而AT和CG单元非常稀少;对于三四碱基而言,AGC,AAAC和AAAT单元最为丰富,ACG,ACT,AGG,CCG,ATGC,CCCG,ACTG,AACT,ACGT,AGAT,CCGG,ACCT和AGCT单元等均很稀少,而一些五碱基重复,在某条甚至某几条染色体中均未分布.除两碱基重复单元在2L的外显子区域丰度较高外,其他重复单元均在内含子和基因间隔区丰富. 进一步分析显示,微卫星在每条染色体两臂的丰度和分布存在着很多的相似性.

内毒素肝损伤过程中枯否细胞NF-κB和AP-1活性变化及其生物学意义

为探讨内毒素肝损伤过程中 ,枯否细胞 (Kupffercells,KCs)内主要转录因子Nuclearfactor kappaB(NF κB)、Activatorprotein 1 (AP 1 )活性的动态变化规律 ,采用健康昆明种小鼠 ,随机分组如下 :Lipopolysaccharide(LPS)尾静脉注射 3h的量效关系 :正常对照组和低 ( 1mg kg)、中 ( 5mg kg)、高 ( 1 0mg kg) 3个内毒素剂量组 ;注射 5mg kgLPS的时效关系 :正常对照、0 .5、1、3、5、8h组 .Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)法检测KCs中NF κB、AP 1活性 .结果发现 ,内毒素肝损伤过程中 ,KCs中NF κB、AP 1在不同时效和量效均不同程度活化 .提示 ,二者的活化与炎症反应的调控机制紧密相关 。

美国引进向日葵种子含油量和脂肪酸组成比较分析

以天津检验检疫局引进的24种美国向日葵种子为原料,其中食用型和油用型种子各12种,测定了24种向日葵种子的含油量,并用气相色谱法测定了向日葵种子油脂肪酸组成及相对含量。结果表明：24种向日葵种子含油量介于33.26%~47.24%之间;向日葵种子油脂肪酸组成为棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸,油酸和亚油酸的相对含量较高,油酸相对含量介于16.07%~91.30%之间,亚油酸相对含量介于2.33%~71.45%之间,不饱和脂肪酸相对含量介于87.43%~93.63%之间;分析发现,油用型向日葵种子油的油酸含量相对较高,食用型向日葵种子油的亚油酸含量相对较高。

野生植物—火棘果营养成分

火棘(Pyracantha reom)属蔷薇科多年生灌木,其成熟果实呈扁园球形,色泽鲜艳,香气浓郁,酸甜微涩,风味独特,可食用或药用。果实的皮肉为可食用部分,与种子的重量比约为3.9∶1;粗蛋白质含量4.19％,氨基酸种类齐全,有VB_1,VB_2,VPP,VC,VE和胡萝卜素等多种维生素,且含量颇高;脂肪酸品质优良;矿质元素丰富;可溶性糖高达10～13％;还含有适量的淀粉、果胶等营养成分。它以其营养成分种类齐全,含量丰富,比例协调之优势,比苹果、猕猴桃更具特色。火棘果具有很高的营养保健价值,可作为酿制各种营养保健饮料(酒)或食品的优质原料,具有广阔的开发利用前景。

油用与食用向日葵籽形态及主成分差异辨析

本文比较分析了食用和油用葵籽实和籽仁的大小、蛋白质含量、油脂含量、脂肪酸组成以及碳水化合物含量.结果表明:食葵籽实和籽仁均较大,种皮多为灰底白纹;油葵籽实和籽仁均较小,籽实饱满充实,种皮多为黑色;食葵籽仁蛋白含量平均为19%,油葵籽仁蛋白含量平均为15%,食葵籽仁蛋白含量大都高于油葵;食葵籽仁含油量在30.0%~42.4%之间,油葵籽仁含油量在30%~47.3%之间;葵籽油主要含棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸;其油酸和亚油酸较高,约占90%,70%食葵籽的亚油酸含量丰富,达到60%以上,58%油葵籽油酸含量较高,达80%以上;食葵籽仁淀粉含量约14%,油葵籽仁淀粉含量13%左右.食葵和油葵籽虽在某些主成分上有差异,但其划分主要是按其种皮形态、籽粒大小以及嗑食方便性.

内毒素肝损伤过程中NF--kB和AP--1活性变化及其对IL--6表达的调控

目的:探讨内毒素肝损伤过程中,Kupffer细胞(KC)内主要转录因子核因子-kB(nuclear factor-kappa B,NF-kB)、活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)活性的变化规律及其在炎细胞因子IL-6表达中的调控作用。方法:健康昆明种小鼠随机分组如下:LPS尾静脉注射3h的量效关系:正常对照组和低(1mg/kg)、中(5mg/kg)、高(10mg/kg)三个内毒素剂量组;注射5mg/kg LPS的时效关系:正常对照、0.5h、1h、3h、5h、8h组;吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)干预组(3h):正常对照、5mg/kg LPS、200mg/kg PDTC、200mg/kg PDTC +5mg/kg LPS.EMSA法检测KC中NF-kB、AP-1活性,ELISA法检测肝组织中IL-6的表达水平。结果:内毒素肝损伤过程中KC中NF-kB活性与LPS处理3h的量效关系为:1mg/kg LPS组即可观察到NF-kB活性,5mg/kg LPS组达峰值,10mg/kgLPS组仍可维持高活化状态;用5mg/kg LPS处理后的时效关系为:0.5h即可检测到NF-kB活性,3h活性明显增强,并可持续到至少8h;PDTC对NF-kB活性有明显抑制作用。内毒素肝损伤过程中KC中AP-1活性与LPS处理3h的量效关系为:1mg/kg LPS组即可检测到AP-1活性,5mg/kg LPS组活性与1mg/kg LPS组相比稍有减弱,10mg/kg LPS组又明显增强,三剂量组AP-1活性与对照组相比均显著增强;用5mg/kg LPS处理后的时效关系为:0.5h即可检测到AP-1活性,1h达峰值,3h减弱后,5h增强,8h又有所减弱,表现出明显的波动现象,但各时相点AP-1活性均显著强于对照;PDTC对AP-1活性有明显促进作用。内毒素肝损伤过程中,内毒素的不同剂量和作用的不同时间肝组织内IL-6水平均表现为先升高后降低的变化趋势,且各处理组均明显高于正常对照;PDTC能明显抑制IL-6的释放。相关分析显示IL-6水平的变化与NF-kB活性变化呈显著正相关,与AP-1活性变化则无明显相关性。结论:内毒素肝损伤过程中,KC中NF-kB、AP-1均不同程度活化,但NF-kB对IL-5的表达可能具有一定的调控作用,而AP-1可能并不参与IL-6表达的调控。

荔枝采后生理与保鲜关系研究

研究了采后荔枝内源乙烯的动态变化规律与其果实的呼吸生理的关系和果皮褐变与果皮水分输导的关系。结果表明,荔枝果实内源乙烯合成的旺盛阶段在采后初期,峰值达0.195μl/kg·h,与呼吸强度的变化趋势一致;乙烯相对稳定释放时产量在0.04～0.09μl/kg·h之间。试验后期果实小部分褐变斑块产生,乙烯释放量微有上升,可能与其生理趋向衰竭有关。观察到果皮局部水分缺失难以从邻近获得补充,表明荔枝果皮的水分输导性较差,失水不平衡对果皮组织影响极大,果皮褐斑产生的最初原因可能是生理性的,而非病源性的,荔枝果实的采后保鲜首先应着重解决生理问题、其次才是病理问题。

核糖核酸酶研究进展

核糖核酸酶是一类广泛存在于动植物体内的核酸水解酶。其作为一种模型蛋白被普遍用于分子生物学研究 ,主要生理功能是控制细胞内RNA的种类与数量分布 ,除参与核糖核酸转录后的剪切、修饰和降解等过程外 ,还与某些植物的自交不亲和性、器官发生、宿主的防御机制、控制肿瘤血管生成、杀灭肿瘤细胞及抑制病毒 (包括HIV 1)的复制等有关。介绍了有关核糖核酸酶的结构特点、功能研究、结构改造、作用机理及抑制剂的研究进展。