p16^INK4a蛋白在宫颈疾病中的表达特点及其与HPV感染的关系

目的研究伴有高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)感染及无hr-HPV感染的宫颈癌(cervical cancer,CC)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义,探讨宫颈癌及癌前病变中p16INK4a蛋白表达与HPV感染的相关性。方法应用免疫组化方法检测126例宫颈疾病(CC40例,CIN67例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,其中,hr-HPV(+)宫颈疾病89例(CC32例,CIN48例和宫颈炎9例),hr-HPV(-)宫颈疾病37例(CC8例,CIN19例和宫颈炎10例),进行半定量分析及统计学检验。结果40例CC中,p16INK4a全部阳性表达;48例hr-HPV(+)和19例hr-HPV(-)CIN中,p16INK4a阳性表达分别为39例和12例;9例hr-HPV(+)和10例hr-HPV(-)宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达均为4例。hr-HPV(+)或hr-HPV(-)宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中p16INK4a蛋白表达水平均依次升高。CC和CIN中p16INK4a蛋白表达与hr-HPV感染相互间无显著相关性(P>0.05)。结论细胞周期抑制蛋白p16INK4a在CC及癌前病变中过表达,且与hr-HPV感染无关,提示p16INK4a蛋白在宫颈癌的发生、发展中所起的作用和作用机制可能与其在其他恶性肿瘤中不同。检测p16INK4a蛋白表达有助于CC的早期诊断。

非小细胞肺癌p14^(ARF) p16^(INK4a)蛋白共表达及其临床意义

目的:探讨p14ARF、p16INK4a蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达、意义及相关关系。方法:采用免疫组织化学SP方法对103例NSCLC组织中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达进行检测。结果:103例NSCLC组织中p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性率分别为70.87%和43.69%,差异有显著性(P<0.01)。其中35例p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性,共阴性率达33.98%(35/103),鳞癌中共阴性率明显高于其它组织类型(P<0.01)。p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性相互间无显著相关性(P>0.05)。临床Ⅲ+Ⅳ期病例两种蛋白表达阴性率明显高于临床Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。结论:NSCLC组织p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性具有明显的组织学类型特异性,两种蛋白阴性表达是各自独立的事件。

375例宫颈病变患者高危型人乳头瘤病毒感染的研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（high—risk Human papillomavirus，hr-HPV）感染与宫颈病变的关系。方法选择2005年1月～2006年6月间在本科住院患者375例，采用第2代杂交捕获试验（HC-Ⅱ）进行hr-HPV DNA的检测，手术切除或阴道镜下定位活检，以病理学结果为确诊标准。结果hr-HPV检测阳性169例，阳性率45．07％，各种病理类型的宫颈病变中hr-HPV感染率分别为：慢性宫颈炎14．67％（55／229）；宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）50．00％（18／36），包括CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ；宫颈癌（uterine cervix cancer，UCC）87．27％（96／110），包括宫颈鳞癌和宫颈腺癌。随着宫颈病变严重程度的增加，hr-HPV的感染率也增高，它们之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论hr-HPV感染与宫颈病变严重程度密切相关；HC-Ⅱ检测hr-HPV有助于UCC及癌前病变的早期筛查和诊断。

小细胞肺癌p14^(ARF)、p16^(INK4a)蛋白表达及其临床意义

目的 研究p14 ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌 (smallcelllungcancer ,SCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P方法检测 2 4例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达。结果 2 4例标本中 ,15例p14 ARF蛋白表达阴性( 62 .5 0 %) ,4例p16INK4a蛋白表达阴性 ( 16.67%) ,3例p14 ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性 ( 12 .5 0 %)。p14 ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 SCLC中p14 ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件 ,可能与SCLC的发生有关 ,其中p14 ARF表达阴性占主要地位。

细胞周期抑制蛋白p16^(INK4a)在宫颈病变中的异常表达

[目的]探讨宫颈癌(UCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义。[方法]应用免疫组化方法检测126例宫颈病变(UCC50例、CIN57例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,进行半定量分析及统计学检验。[结果]50例UCC中,p16INK4a全部阳性表达;57例CIN中,p16INK4a阳性表达41例,阳性表达率为71.93%,其中CINⅠ,CINⅡ,CINⅢp16INK4a阳性表达率分别为36.84%(7/19)、81.82%(18/22)、100.00%(16/16),且三者间差异有显著性(P<0.05)。19例宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达8例,阳性表达率为42.11%。p16INK4a蛋白在宫颈炎、CIN和UCC组织中表达水平依次升高,且差异有显著性(P<0.05)。[结论]UCC及癌前病变中p16INK4a阳性表达明显高于良性病变。p16INK4a在UCC及癌前病变中过表达,提示其在UCC发生、发展中起重要作用。

细胞周期调控基因INK4a-ARF与肿瘤

INK4a ARF基因功能的失活与该基因位点的缺失、点突变和 5′ CpG岛异常甲基化密切相关。由于INK4a ARF基因编码的抑癌蛋白 p16 INK4a、p14 ARF分别对cyclinD CDK4 pRb E2F和MDM2 p5 3通路具有关键性调控功能 ,提示其将成为肿瘤基因治疗的重要靶点。

细胞周期专职调控基因INK4a-ARF与妇科肿瘤

INK4a-ARF基因是新近发现的抑癌基因,包含两个重叠基因:INK4a和ARF,编码产物p16INK4a和p14ARF蛋白,分别对cyclinD-CDK4-pRb-E2F和MDM2-p53通路具有关键性调控功能,且在大部分恶性肿瘤中缺失表达,其功能失活的机制主要包括该基因的缺失、突变和甲基化。但在妇科肿瘤如宫颈癌及外阴癌中p16INK4a和p14ARF蛋白过表达,提示INK4a-ARF基因在妇科肿瘤发生发展中所起的作用可能与其在其他肿瘤中所起的作用不同,将成为妇科肿瘤检测与预后判断的标志性基因之一。就INK4a-ARF基因与妇科肿瘤关系的研究进展综述。

改良一步法制备人外周血白细胞线粒体DNA

目的 建立从少量外周血中提取白细胞线粒体DNA(mtDNA)的快速、简便方法。方法 5 8份抗凝血静置后取白细胞层 ,采用碱变性法裂解细胞 ,酚 氯仿 异戊醇抽提 ,RNA酶消化后再抽提及沉淀 ,PCR扩增产物电泳鉴定。结果 获得的mtDNA样品不存在蛋白质等污染 ,用特异性mtDNAPCR引物从 5 8例核酸样品中均能扩增出 15 2 8bp的mtDNA基因片段。结论 改良一步法是一种省时、经济、实用、重复性好。

多种试管婴儿技术与妊娠期高血压的相关性研究

目的探讨不同试管婴儿技术对妊娠期高血压疾病的影响及相关性。方法选取本院2013年6月至2015年6月收治的经试管婴儿技术受孕且终止妊娠的不孕患者600例。按照受精方式的不同分为常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization,IVF）组（342例）,卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）组（258例）,按照胚胎转移周期的不同分为新鲜周期进行胚胎移植（简称Fresh）组（407例）,冷冻周期胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer,FT）组（193例）。分析不同组患者不孕不育的原因,并分析不同试管婴儿技术对妊娠期高血压疾病的影响。结果所有患者中,管性致不孕的患者有335例,子宫内膜异位患者有75例,排卵障碍有41例,夫精异常患者有136例,其他原因7例,不明原因6例。各组中管性因素导致不孕不育的比例最大,分别为IVF组66.7%,ICSI组41.5%,Fresh组52.1%,FT组63.7%。IVF组患者妊娠期高血压的发病率（2.3%）低于ICSI组（5.8%）,差异具有显著性（χ~2=4.8167,P=0.0282）;IVF组患者子痫前期的发病率（4.97%）低于ICSI组（5.04%）,但差异无显著性（χ~2=0.0014,P=0.9698）。Fresh组妊娠期高血压的发病率（3.93%）与FT组（3.63%）接近,差异无显著性（χ~2=0.0329,P=0.8561）;Fresh组子痫前期的发病率（4.91%）低于FT组（5.18%）,差异无显著性（χ~2=0.0197,P=0.8884）。结论 ICSI受精技术有增加妊娠期高血压疾病的风险,而胚胎进行移植前是否进行冻融与妊娠期高血压无关。

103例非小细胞肺癌p16^(INK4a)蛋白表达及其临床意义

目的 研究p16 INK4a蛋白在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P方法检测10 3例NSCLC癌组织标本中 p16 INK4a蛋白表达 ,同时以 2 0例肺部炎症病变组织做对照。结果 10 3例标本中 ,p16 INK4a阳性表达5 8例 ,阴性表达 4 5例 ,表达阴性率为 4 3.6 9% ,其中鳞癌、腺癌、肺泡癌中p16 INK4a表达阴性率分别为 5 8.82 % (2 0 / 34)、39.39%(13/ 33)、33.33% (12 / 36 ) ,且鳞癌与肺泡癌之间p16 INK4a表达阴性率差异有显著意义 (P <0 .0 1)。临床Ⅲ +Ⅳ期病例p16 INK4a蛋白表达阴性率为 6 0 .71% ,明显高于临床Ⅰ +Ⅱ期病例 (35 .14 % ) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 p16 INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌中常见 ,提示p16 INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌的发生、发展中起重要作用 ,它有可能成为预测肺癌患者病程进展的指标之一。

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性组。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:(p14+p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P<0.01)。(p14+p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P>0.05)。INK4a和ARF基因异常甲基化相互之间无显著相关性(P>0.05)。结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件。

HPV16 E6E7与C3d3融合基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建可作为DNA疫苗的包含人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6E7与C3d3融合基因真核表达质粒,并在体外进行表达和鉴定。方法采用PCR技术扩增HPV16 E6E7片段,将该片段插入到pMDT-18载体中后,亚克隆至真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL和pSG.SS.YL,构建E6E7与C3d3融合基因及E6E7表达质粒pSG.SS.E6E7.C3d3.YL和pSG.SS.E6E7.YL。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定后,将重组质粒pSG.SS.E6E7.C3d3.YL、pSG.SS.E6E7.YL转染COS-7细胞,用Western blot及免疫细胞化学技术检测其表达。结果经酶切、DNA测序及转染真核细胞后表达产物的鉴定结果显示,重组质粒构建成功。结论构建的质粒可在真核细胞内正确表达,为其作为DNA疫苗诱导免疫效应的动物实验打下了基础。

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a/ARF基因是重要的细胞周期调控基因,其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a/ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中,研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3p16INK4a和pcDNA3p14ARF同时导入A549细胞系中,确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a/ARF基因后的细胞G0/G1期比例为59.9%,与未转染(51.2%)及空质粒转染(50.3%)细胞相比差异显著(P值分别为0.043和0.025),同时S期和G2/M期的比例下降;转染后细胞克隆形成率为63%,未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85%和87%(P值均<0.01),凋亡指数明显增加,转染INK4a/ARF基因后的细胞凋亡率为8.0%,另两种细胞均为2.7%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a/ARF基因导入A549细胞,并可以抑制A549细胞的生长,促进凋亡作用的增强,为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。

细胞周期抑制蛋白p14^(ARF)在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 研究细胞周期抑制蛋白p14 ARF在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P方法检测 10 3例NSCLC癌组织标本中p14 ARF蛋白表达 ,同时以 2 0例肺部炎症病变组织作对照。结果 10 3例NSCLC标本中 ,p14 ARF阳性表达 3 0例 ,阴性表达 73例 ,表达阴性率为 70 .87%。不同类型NSCLC中p14 ARF表达不同 :鳞癌中p14 ARF表达阴性率较高 (88.2 4% ) ,肺泡癌中较低 (5 2 .78% ) ,腺癌介于两者之间 (72 .73 % ) ,各组织类型之间的差异有非常显著的意义 (P <0 .0 1)。临床Ⅲ +Ⅳ期病例p14 ARF蛋白表达阴性率为 78.5 7% ,明显高于临床Ⅰ +Ⅱ期 (5 4.0 5 % ) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;男性患者癌组织中p14 ARF阴性率 81.94% (5 9/72 )明显高于女性 45 .16% (14 /3 1) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 NSCLC组织p14 ARF蛋白表达异常具有明显的组织学类型特异性 ;p14 ARF蛋白表达异常在NSCLC发生、发展中起重要作用 ,有可能同时成为预测病程进展的指标之一。

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响

目的 研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法 利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A5 4 9细胞系中 ,确定其编码的蛋白p16 INK4a和p14 ARF稳定表达 ;在设立空白组和空质粒转染组的情况下 ,用 5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物 (阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇 )作用于转染前后的细胞 ,利用MTT法测定各种不同药物的 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ,并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数。结果 转染INK4a/ARF基因后 ,A5 4 9细胞对阿霉素和顺铂的IC50 值显著降低 (P <0 0 5 ) ,而拓朴替康、诺维本和紫杉醇的IC50 值无明显变化 (P >0 0 5 ) ;阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他 3种药物。结论 恢复p16 INK4a和p14 ARF蛋白的表达可改变A5 4 9细胞对部分化疗药物的敏感性。

p14^(ARF)和p16^(INK4a)蛋白共表达状态对非小细胞肺癌术后放化疗及生存的影响

目的 探讨p14 ARF蛋白和p16 INK4a蛋白共表达状态对非小细胞肺癌 (NSCLC)术后放化疗及生存的影响。方法 选择经免疫组化SP法检测出的p14 ARF和p16 INK4a蛋白共表达阴性的NSCLC患者 35例 ,共表达阳性患者 2 0例 ,比较两组的临床病理特征并随访其术后放化疗情况和生存时间。结果 两组患者年龄、肿瘤分期、分化程度、术后复发转移及术后放化疗差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,而性别、吸烟指数、组织学类型差异显著 (P <0 0 1) ;共表达阴性组患者术后 2、3年及总生存率较阳性组显著降低 (P <0 0 5 )。结论 p14 ARF和p16 INK4a蛋白共表达状态是影响NSCLC病人放化疗及远期生存的因素之一。

咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护

背景:咖啡酸苯乙酯可抑制大鼠脑损伤后的脂质过氧化和脑损伤,但是在帕金森细胞模型中,5-脂氧酶和白三烯的变化规律,以及咖啡酸苯乙酯是否通过抑制鱼藤酮诱导的5-脂氧酶和白三烯变化而发挥对帕金森样损伤的保护作用,仍有待进一步研究。目的:探讨咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护作用,同时观察5-脂氧酶是否参与帕金森细胞模型的损伤。方法:(1)取生长状态良好的PC12细胞,分5组培养,分别以0,0.01,0.1,1,10μmol/L鱼藤酮干预,24,48 h后,观察细胞形态及活性变化,选择最佳诱导帕金森细胞模型的鱼藤酮浓度;24 h后,Western法检测5-脂氧酶表达,ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量;(2)取生长状态良好的PC12细胞,分6组培养,以正常培养的细胞为空白对照,其余5分别加入0,0.01,0.1,1,10μmol/L咖啡酸苯乙酯预处理30 min,之后加入1μmol/L鱼藤酮,24 h后,检测细胞活性,ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量。结果与结论:(1)0.1-10μmol/L鱼藤酮可诱导PC12细胞损伤,1μmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞形态和细胞存活率变化适度明显,所以选择该条件作为鱼藤酮诱导PC12细胞帕金森样损伤的细胞模型;(2)鱼藤酮呈浓度依赖性增加5-脂氧酶的表达与半胱氨酰白三烯的生成释放;(3)1-10μmol/L咖啡酸苯乙酯可降低鱼藤酮诱导的PC12细胞半胱氨酰白三烯生成释放量增加,呈浓度依赖性抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞存活率降低;(4)结果表明,5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤作用,咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤有明显保护作用。

p16^(INK4a)和p14^(ARF)蛋白在宫颈癌和肺癌中的差异表达

[目的]研究宫颈癌和肺癌中p16INK4a和p14ARF蛋白表达水平的差异及意义。[方法]应用免疫组化方法检测50例宫颈癌和127例肺癌组织中p16INK4a和p14ARF蛋白表达。[结果]50例宫颈癌中,p16INK4a和p14ARF蛋白全部阳性表达;127例肺癌中,p16INK4a和p14ARF蛋白阳性表达率分别为61.42%和30.79%;宫颈癌和肺癌中p16INK4a和p14ARF蛋白表达差异均有显著性(P<0.01)。[结论]p16INK4a和p14ARF蛋白在宫颈癌中过表达,而在肺癌中缺失表达。提示p16INK4a和p14ARF蛋白在宫颈癌和肺癌的发生发展中所起的作用和作用机制可能不同。

HPV16E7基因沉默对宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响

[目的]探讨脂质体转染HPV16E7 siRNA对人宫颈癌CaSki细胞增殖的影响。[方法]人工合成抑制HPV16E7基因的siRNA片段,通过脂质体转染到CaSki细胞内,显微镜下观察其形态学变化;流式细胞术检测各组细胞周期变化;RT-PCR检测HPV16E7 mRNA的表达;Western blot检测HPV16E7蛋白表达。[结果]转染siRNA后的CaSki细胞,细胞增殖受到显著抑制,HPV16E7 mRNA表达显著下降,HPV16E7蛋白水平显著下降。[结论]应用RNA干扰靶向抑制HPV16E7基因可以显著抑制CaSki细胞增殖。