实验教学中醋酸纤维素薄膜电泳的条件优化

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白是生物化学实验课中的一项基础实验技术。目前,诸多医学院校基础医学及生物学专业均开设了此项实验。但是由于实验方法的不同,且实验过程中的影响因素较多,学生获得的实验结果也存在多种问题。经过多年实验教学探索,西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物系实验教学团队优化了醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白的实验方案,增强了实验教学内容的互动性,确保了实验结果的稳定性,使学生更好地掌握了水平电泳分离蛋白质的理论知识并获得了成功的实验验证。

大型仪器实验平台助力实验教学及未来发展

大型仪器实验平台在基础医学实验教学中扮演着至关重要的角色,为培养创新型医学人才提供了有力支持。随着高精度、高准确度的实验设备和先进的实验技术的引入,大型仪器实验平台提供了高质量的实验教学,从而帮助学生掌握前沿的医学及生物学知识和技能。同时,平台协同加强了师资队伍建设,实验室技术人员也进一步提升了专业技能,以确保设备的正常运行和实验教学的顺利开展。文章主要探讨了大型仪器实验教学平台在本科生实验教学中的意义、应用现状以及未来的发展方向,以期更好地提高本科实验教学的质量和效果,助力创新型医学现代化人才的培养。

利用TRIzol 试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA

目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间。在10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究。

组织胚胎学教学改革的设想

21世纪是以高新技术为主导的科学技术迅猛发展和激烈竞争的时代.传统的应试教育已严重制约了新时代对于具有高素质、创新能力的医学人才的需求.为了达到新的医学教育目标的要求,充分利用现代多媒体技术和网络资源,改革组织胚胎学传统的教学方法和手段,不仅可以改善教学效果,提高教学质量,而且可以开发学生的创造性潜能,培养学生的探索精神.

改革《生物化学与分子生物学》教学方法培养创新性医学人才

生物化学与分子生物学不但是促进整个生命科学发展的前沿学科，也是医学生的重要基础课。近代医学的发展要求高等医学院校培养的学生，必须具备扎实的生物化学与分子生物学理论知识、以及运用其技术解决医学实际问题的能力和科研创新能力。为此，我们通过夯实学生《生物化学与分子生物学》的基础理论知识、开展多层次的实践训练（基本实验、综合试验及开放性实验）、科学管理的开放性实验室等多种途径，不断提高教学水平，努力培养医学创新性人才。

深化分子生物学实践教学,提高医学生创新能力

为适应医学发展的需要，提高医学本科生的科研创新能力，生物化学与分子生物学教学实验中心开展了多层次的实践教学，包括基本实验、综合性实验和多层次的科研训练。经过两年实践，生物化学与分子生物学实践教学取得了良好的效果，不仅增强了医学本科生学习的兴趣，而且提高了实验操作能力、科研思维能力和创新能力。

组织胚胎学实习课教学的体会和改革设想

利用现代多媒体技术和网络资源,改革组织胚胎学传统的教学方法和手段,可以大大改善教学效果,提高教学质量,培养创新性的医学人才.

饮食中的蛋白质与肠道钙吸收的关系

饮食中的蛋白质对肠道钙吸收到底有无影响 ,一直是科研工作者研究的焦点 ,但由于研究者使用的实验设计、数据分析方法等的不同 ,有时会得出截然相反的实验结论。有的学者研究认为饮食蛋白对钙吸收没有影响 。

大鼠附睾上皮内ACP及NSE与过剩精子处理的关系初探

目的 研究大鼠附睾上皮细胞PAS阳性物质的性质 ,以及与溶酶体的酸性水解酶、附睾腔内过剩精子消化处理之间的关系 ,借以阐明附睾上皮处理过剩精子的机制。方法 用组织化学的方法显示PAS阳性物质、非特异性酯酶 (NSE)和酸性磷酸酶 (ACP)并研究其相互关系。结果 PAS阳性颗粒分布于PAS阳性细胞的核下区、核上区或充满整个胞质 ,也可见于附睾管腔内 ,尤其是附睾上皮近腔面 ,呈条带状 ;NSE、ACP阳性颗粒均位于胞质的核上方及附睾上皮的近腔面。结论 NSE、ACP与PAS的染色结果一致 ,说明附睾上皮除吞噬精子外 ,还可能分泌溶酶体酶进入附睾上皮的近腔面以初步处理精子 。

2型糖尿病并发周围血管病变的临床流行病学分析

目的通过对比分析2型糖尿病并发周围血管病变(DPVD)及未发生周围血管病变(非DPVD)病例的临床流行病学资料,明确2型糖尿患者伴发DPVD的相关危险因素,为其早期诊治和预防提供依据。方法收集157例40～70岁临床已诊断2型糖尿病患者的临床流行病学资料,依据周围血管病的诊断标准将其分为DPVD组和非DPVD组;以生化分析仪测定两组患者的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和超敏C反应蛋白(hsCRP);用多因素Logistic回归分析相关危险因素。结果与未发生周围血管病变病例相比,DPVD组患者病程较长,且高血压、周围神经病变及糖尿病眼病的并发率较高,生化分析显示DPVD组患者血清中hsCRP、TC/HDL-C水平升高,而HDL-C降低;经多因素Logistic回归分析发现,病程、hsCRP、HDL-C、TC/HDL-C为DPVD的独立危险因素。结论病程、血压增高、周围神经病、眼病、HDL-C减低及hsCRP增高与2型糖尿病患者并发周围血管病变相关,并且病程、HDL-C、hsCRP、TC/HDL-C是周围血管病变的独立危险因素。

2型糖尿病各并发症及影响因素的临床分析

目的探讨2型糖尿病各并发症间的相互关系及影响因素,以期为2型糖尿病病人并发症的早期诊治和预防提供依据。方法收集330例临床被诊断为2型糖尿病的病人信息及其血标本。对这330例病人的年龄、性别、体重指数及各项临床、生化指标进行统计学分析,观察出各并发症之间及并发症与其常规指标有无相关性。结果 330例2型糖尿病各并发症与性别、体重指数及血糖无关,年龄与个并发症密切相关,并且在所统计的5种并发症中,患病率都随年龄的增高而增加,且各年龄组的患病率差异存在统计学意义。60岁以上组的各并发症中,高血压为最高(47.5%),其次是周围血管病变(43.33%),第三是周围神经病变(40.83%)。脂代谢异常是周围血管病变风险因子。高血压与糖尿病肾病、周围神经病变、周围血管病变及眼病相关联。患周围血管病变的人群中高发周围神经病变(50.94%)。结论高龄是2型糖尿病并发症的风险因子。2型糖尿病高血压患者更易进一步导致其它糖尿病并发症,而患周围血管病变的人群中更易伴发周围神经病变。

丹参素通过激活Wnt/β-catenin通路促进大鼠原代成骨细胞的分化

目的探讨丹参素对原代培养大鼠成骨细胞分化的影响。方法用不同浓度的丹参素(0.1~10μmol·L^(-1))处理原代培养的大鼠成骨细胞,采用MTT实验检测丹参素对成骨细胞增殖的影响;运用Real-time PCR法检测Runx2和Osterix基因mRNA的表达;利用碱性磷酸酶染色检测细胞ALP的活性;利用茜素红染色检测细胞钙化结节的形成;通过Western Blotting检测细胞核内β-catenin的含量。结果丹参素对成骨细胞的增殖无明显作用,浓度为1~10μmol·L^(-1)的丹参素能够上调Runx2和Osterix基因mRNA的表达,增强ALP的活性,促进钙化结节的形成,增强β-catenin在细胞核内的表达。结论丹参素浓度为1~10μmol·L^(-1)能够促进成骨细胞的分化,且Wnt/β-catenin信号通路被发现参与其对成骨细胞分化过程的调控。

医学生专业文献检索及阅读分析能力调研与提升方法探讨

目的了解西安交通大学医学生文献检索及阅读分析能力的现状,分析原因,探索提升医学生专业文献检索及阅读分析能力的方法。方法采用调查问卷的方式,对西安交通大学2013级121名医学生和2014级320名医学生进行专业文献检索及阅读分析能力调研;针对调研发现的问题进行专题讲座及实践训练;对比分析接受培训与否对学生文献检索与阅读能力的影响。结果对专业数据库缺乏了解是造成医学生文献检索能力不足的主要原因;对专业文献结构不清楚是制约学生阅读理解文献的问题之一;参与专题讲座及实践培训后学生的文献检索及阅读能力明显高于未参加专题讲座及实践培训前(P<0.05)。结论医学生文献检索与阅读能力较低;针对性的专题讲座及实践培训能够提高学生的文献检索与阅读能力,值得推广。

核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择

目的探讨不同抗原修复法对DA.1U大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。方法应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。结果DA.1U大鼠肝组织内核受体LXR-α、LXR-β、PPAR-γ和FXR经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。结论在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外的诱导分化及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性.方法:利用密度为1.073kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞,体外培养与扩增MSCs;取生长良好的第3代细胞,用成骨细胞分化培养液培养21d,Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶(AKP)组化染色;分别以浓度为5,10和15μmol/L的Brdu溶液标记MSCs,孵育12,24,48,72和96h后免疫组化检测Brdu,确定最佳标记量和最佳标记时间.结果:诱导分化第21日,AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性.10μmol/LBrdu标记MSCs的效果最好,随着孵育时间的延长,Brdu标记率逐渐增高,标记72h后标记率在90%以上.结论:MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞,用Brdu标记MSCs的最佳浓度为10μmol/L,最佳时间是72h.

miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达

目的明确TOLL样受体2(TLR2)与micro RNA144(mi R-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的mi R-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-q PCR检测mi R-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏c DNA为模板,PCR获取目的片段(即含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区);用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmir GLO报告基因载体和含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR;并用mi R-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确mi R-144与TLR2 m RNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L mi R-144 mimics后,NR8383细胞中mi R-144表达显著升高,而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降;而100 nmol/L mi R-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L mi R-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 mi R-144通过靶向结合TLR2 m RNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。

生物学本科生必须练就的分子生物学实验基本功

分子生物学实验技能是现代生物学专业人才培养质量的重要衡量指标。为了切实提高学生的分子生物学实验技能,文章以充分调动学生学习主体作用为出发点,指出熟练使用常规仪器设备、正确配制溶液、透彻理解实验原理与实际应用价值、仔细观察与分析、正确判读分析实验结果等能力,是现代生命科学和医学生物学专业本科生必须具备的分子生物学实验基本功,更是发掘创新型人才、培养高层次人才的根基。

胎儿软骨细胞体外培养过程中生长及代谢的变化

目的探讨体外培养的软骨细胞形态及Ⅰ、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达变化,为组织工程软骨种子细胞选择合适的回植时机。方法取体外培养的第1-5代胎儿软骨细胞,观察细胞形态和细胞增殖率;用爱茜蓝(alcianblue)法检测软骨细胞聚集蛋白聚糖中糖胺聚糖含量;分别用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应检测Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖在蛋白和mRNA水平的表达。结果体外培养的胎儿软骨细胞从第3代起逐渐向成纤维样细胞转换;各代软骨细胞糖胺聚糖的含量随传代次数的增加而逐渐降低,第3代后处于较低水平;第2代以前Ⅱ型胶原表达较强,Ⅰ型胶原表达较弱,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱,Ⅰ型胶原表达逐渐增强;而聚集蛋白聚糖在第3代以前表达较高,从第4代后明显下降。结论人胎儿软骨细胞体外培养过程中,第2代软骨细胞从形态和功能上最接近体内状况,可作为软骨组织工程的种子细胞。

序贯治疗对获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症的临床疗效分析

目的分析序贯治疗对获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症(ADVKCF)的临床疗效.方法选择获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症患者44例,随机分为对照组及观察组,分别有21例、23例.分别采用常规治疗及序贯治疗,对治疗后凝血常规、凝血因子、凝血酶原前体蛋白(PIVKA-Ⅱ)进行检测.结果观察组及对照组治疗后PT、INR、APTT、FⅡ、FⅦ、FⅨ、FX较治疗前有改善,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗后PT、INR、APTT、FⅡ、FⅦ、FX较对照组有改善,差异有统计学意义(P<0.05).2组治疗后PIVKA-Ⅱ较治疗前有升高,差异有统计学意义(P<0.05),观察组患者接受维生素K4治疗后3周T2时较对照组有升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论大剂量维生素K序贯疗法可有效治疗ADVKCF,对PIVKA-II及凝血常规、凝血因子进行监测有助于明确患者的病情变化.

氢过氧化物及谷胱甘肽过氧化物酶在肿瘤发生过程中的作用

癌症细胞能产生高量的活性氧(ROS)且逃避凋亡,氢过氧化物在较低水平时能支持癌症细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成,但在较高的水平时诱导细胞凋亡。谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidases,GPxs)通过调节氢过氧化物水平从而实现致癌和抗癌双重效果、使其在肿瘤发生过程中的作用变得更为复杂;不同亚型的GPxs在肿瘤发生过程的作用也不尽相同。