刺五加皂苷对淀粉样前体蛋白APP酶解通路的影响

目的研究刺五加皂苷对APP(Amyloid Precursor Protein,APP)酶解通路的影响。方法 (2015.9-2016.5)用12.5mg/L、25mg/L、50mg/L刺五加皂苷处理胚鼠皮层神经元细胞,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测γ-分泌酶活性;另用脂质体2000转染构建APP695高表达CHO细胞系,用G418(500mg/L)进行筛选获得APP695-CHO稳转染细胞,用12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L刺五加皂苷处理稳转染细胞,48h后,ELISA法检测细胞培养上清中Aβ1-40含量,用Western-blot法检测细胞裂解液中APP-N端片段蛋白的表达。结果在胚鼠皮层神经元细胞与对照组相比,25 mg/L、50 mg/L的刺五加皂苷能够抑制内源性γ-内切酶的活性,而且随着浓度的升高,抑制作用增强;在APP695-CHO稳转染细胞中,Aβ1-40的分泌量增高,APP-N端片段的蛋白表达水平减少,不同剂量刺五加皂苷能缓解这些变化。结论刺五加皂苷能抑制内源性γ-内切酶减少Aβ1-40的生成,对APP酶解起到一定的影响,对阿尔茨海默病的发病及进展有一定的保护作用。

硒、锌对老年性痴呆模型小鼠APP酶解通路的保护作用及机制研究

目的研究硒、锌对老年性痴呆(Alzheimer’s,AD)模型小鼠酶解通路的保护作用及机制。方法选用健康雄性2月龄昆明种小鼠60只,随机分为正常对照组(NC)、AD模型组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+AD组、锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、脑复康[Piracetam,230 mg/(kg bw)]+AD共6组,每组10只。连续60d腹腔注射D-半乳糖[150 mg/(kg bw)],建立老年性痴呆模型,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中α、β、γ-分泌酶含量以及脑组织中Aβ1-40含量;Western-blot法检测脑组织中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化Tau(Ph-tau)蛋白水平。结果 ELISA法显示,与AD组比较,硒、锌可以增强α-分泌酶活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,且硒锌联合作用增强,脑组织中Aβ_(1-40)含量明显降低。Western-blot法检测显示,与NC组比较,AD模型组GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平升高,而硒、锌处理组和硒锌联合作用组,GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平明显降低。结论硒、锌通过增加内源性α-分泌酶的活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,减少Aβ_(1-40)的生成,降低GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平,可能对AD的发病及进展有一定预防保护作用。