利用CRISPR/Cas9系统敲除ITGB6基因对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响

目的 探讨整合素β6(ITGB6)基因敲除后对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响。方法 通过CRISPR/Cas9技术构建ITGB6敲除的HT-29细胞(ITGB6-KO)作为敲除组,选择空白转染细胞作为对照组。通过Western blot法检测ITGB6表达,通过MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测敲除ITGB6基因对HT-29细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果 Western blot和DNA测序结果显示CRISPR/Cas9技术有效敲除ITGB6基因。MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验显示敲除ITGB6基因能够抑制HT-29细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力(P <0.01)。结论 CRISPR/Cas9技术能够有效建立敲除ITGB6基因的结肠癌HT-29细胞系,ITGB6敲除后HT-29细胞恶性生物学行为受到抑制,ITGB6基因有望成为结肠癌治疗的潜在靶点。

KIF14在肝内胆管癌中的表达及对胆管癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨KIF14在ICC中的表达情况及对胆管癌细胞生物学行为的影响。方法:通过qRT-PCR法检测ICC组织和癌旁组织中KIF14的mRNA表达水平;通过免疫组织化学染色方法检测ICC组织和癌旁组织中的KIF14的蛋白表达情况,并分析KIF14的表达与临床病理特征之间的关系;利用siRNA技术抑制QBC939细胞中KIF14的表达,并检测抑制效果;利用Western blotting实验检测抑制QBC939细胞内KIF14的表达对AKT信号通路的影响;分别利用MTT实验、Transwell实验检测抑制KIF14表达对胆管癌QBC939细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:qRT-PCR结果提示ICC组织中KIF14的mRNA表达水平明显高于癌旁组织;免疫组织化学染色结果提示ICC组织中KIF14表达水平高于癌旁组织,KIF14的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关;siRNA技术能有效抑制QBC939细胞中KIF14的mRNA表达和AKT磷酸化水平,MTT实验和Transwell实验表明抑制KIF14的表达可抑制QBC939细胞的增殖能力和侵袭能力。结论:KIF14在ICC组织中高表达,其高表达与不良临床病理特征相关;KIF14可通过AKT信号通路促进胆管癌细胞的增殖和侵袭。

整合素αvβ6缺失ERK2结合位点对SW480细胞基因表达的影响

目的:研究整合素αvβ6缺失细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)结合位点对结肠癌SW480细胞基因表达调控的影响。方法:构建稳定转染β6基因结构的结肠癌SW480细胞(SW480β6)和缺失ERK2结合位点的缺失突变型β6转染的SW480细胞(SW480β6Del.mutant),并通过Western blot实验检测整合素αvβ6、总ERK(t-ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)表达水平,通过Transwell实验检测整合素αvβ6缺失ERK2结合位点对SW480细胞侵袭能力的影响。通过RNA测序研究整合素αvβ6缺失ERK2结合位点对SW480细胞基因表达谱的影响,并对差异表达基因(DEGs)进行GO和KEGG功能富集分析。结果:SW480β6和SW480β6 Del.mutant细胞均高表达αvβ6,两者之间的t-ERK表达水平差异无统计学意义(P>0.05),SW480β6 Del.mutant细胞p-ERK2水平较SW480β6细胞明显降低,且侵袭能力也明显下降(P<0.05)。通过RNA测序,在SW480β6Del.mutant细胞中共筛选出2249个DEGs,包括上调基因936个,下调基因1313个,DEGs显著富集在癌症通路、PI3K-AKT通路、MAPK通路、细胞与细胞因子受体互作方面。结论:整合素αvβ6通过αvβ6-ERK2直接连接提高ERK2的磷酸化水平,激活MAPK信号通路,促进结肠癌细胞侵袭。缺失整合素αvβ6-ERK2直接连接后,DEGs除富集于MAPK通路外,还富集于多条在结肠癌中具有重要作用的通路,提示在结肠癌中各种信号通路具有互补作用,多靶点药物对结直肠癌是一种有前景的治疗方式。

肝内胆管癌中ANXA9的表达及其对细胞侵袭的影响

目的探讨肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,iCCA)中ANXA9的表达及对iCCA细胞侵袭和MMP-9表达的影响。方法采用qRT-PCR法检测12例iCCA组织及癌旁正常组织中ANXA9 mRNA水平,应用免疫组化法检测67例iCCA组织中ANXA9的表达。选取iCCA细胞株HuCCT1进行体外实验,通过siRNA沉默HuCCT1细胞中ANXA9的表达;应用Transwell实验及Western blot法检测ANXA9沉默对HuCCT1细胞侵袭能力和MMP-9表达的影响。结果iCCA组织中ANXA9的表达水平显著高于癌旁正常组织。免疫组化染色显示39例(58.2%)ANXA9呈阳性,28例(41.8%)ANXA9呈阴性。ANXA9的表达与iCCA淋巴结转移、TNM分期密切相关。细胞功能学实验结果显示,HuCCT1细胞转染针对ANXA9的siRNA后,ANXA9的表达水平下调;沉默ANXA9能够抑制HuCCT1细胞的侵袭能力和MMP-9的表达水平。结论ANXA9在iCCA组织中高表达,其可以通过调控MMP-9的表达促进iCCA细胞的侵袭,ANXA9可能是iCCA的潜在生物学标志物和分子靶点。

非小细胞肺癌PC-9细胞厄洛替尼耐药潜在机制的RNA测序分析

目的:通过RNA测序分析比较亲本PC-9细胞和厄洛替尼获得性耐药PC-9细胞(PC-9/ER)表达谱的差异,揭示非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药的潜在机制。方法:采用间歇诱导方法,建立PC-9/ER耐药细胞株,通过MTT实验绘制厄洛替尼药物浓度-细胞存活率曲线。通过RNA测序分析PC-9/ER细胞的差异表达基因并进行GO和KEGG功能富集分析;通过qRT-PCR进一步筛选可能参与EGFR-TKI耐药的潜在基因或可能的靶点。结果:厄洛替尼对PC-9/ER细胞增殖的抑制率显著低于PC-9细胞的抑制率,PC-9/ER细胞的耐药指数为41.92。与PC-9细胞相比,RNA测序PC-9/ER细胞筛选出1028个差异表达基因,其中720个基因表达上调,308个基因表达下调,而且差异表达基因显著富集在PI3K-AKT通路和癌症通路。qRT-PCR验证差异表达基因的转录水平与测序结果基本一致。结论:ST6GALNAC3、CYP1A1、PAPPA2、INHBE和ACSS3等基因可能参与EGFR-TKI的耐药过程,针对PC-9/ER细胞差异表达基因的后续实验可能为将来改善NSCLC的靶向治疗进一步提供实验和理论依据。

TMIGD1在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的检测TMIGD1在结肠癌及其相应的癌旁正常结肠上皮组织中的表达情况及过表达TMIGD1对结肠癌细胞生物学行为的影响,并探讨潜在分子机制。方法通过生物信息学数据库和免疫组织化学染色检测TMIGD1在结肠癌与癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与不同临床病理因素之间的关系。对结肠癌细胞系SW480通过慢病毒包装系统使其稳定过表达TMIGD1,采用MTT、平板克隆形成实验、细胞周期试剂盒检测TMIGD1对结肠癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响,并通过Western blot检测细胞周期关键蛋白的表达。采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,并检测EMT相关蛋白的表达和细胞粘附情况。结果生物信息学分析和免疫组织化学染色结果均提示TMIGD1在结肠癌组织中低表达(P<0.05),TMIGD1的阴性表达与结肠癌的淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。MTT实验、平板克隆形成实验、细胞周期检测结果表明过表达TMIGD1能够抑制结肠癌细胞SW480的增殖和克隆形成过程,提高G0/G1期的细胞数目,并且抑制Cyclin D1的表达,同时促进p21表达(P<0.05)。TMIGD1对EMT蛋白没有影响,但稳定过表达TMIGD1后结肠癌细胞的迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05),而粘附能力明显增强。结论TMIGD1在结肠癌中低表达,过表达TMIGD1能够抑制结肠癌细胞的增殖和迁移侵袭。

生态微生物学:全新的细菌理论

研究人类肠道的微生物学家可以从研究地球内部的专家那里学习到什么?吉莲·班菲尔德说:"科学研究需要多领域合作"。如果你看着酸矿废水池表面来想象第一个有机体的诞生,这与想象微生物在一个新生儿无菌的胃肠道里出现是一样的。

海洋公民

国际海洋生物普查计划已历时10年，由来自几十个国家的几千名科学家共同协作，进行了成百上千次的海洋研究，付出了巨大的努力对全球海洋生物进行编目。

TGF-β信号通路在肿瘤侵袭转移中的作用

TGF-β信号通路是一个重要的细胞内信号转导通路,能够通过影响肿瘤微环境、增强肿瘤迁移运动能力和抑制免疫细胞功能来促进肿瘤细胞的侵袭转移。TGF-β信号通路与肿瘤发展之间密切的联系使得TGF-β信号转导通路成为治疗肿瘤的新靶点。本文通过查阅近年来相关文献,概括TGF-β在肿瘤侵袭转移中所起作用的研究进展,并在此基础上对新型抗TGF-β药物治疗进行了展望。