辛伐他汀对大鼠糖尿病所致心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨辛伐他汀对糖尿病所致心肌损伤的保护作用及可能机制。方法:24只SD大鼠(180～220) g随机分为对照组(control组,n=8)和模型组(n=16),模型组给予链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型,然后随机将模型组分为糖尿病组(DM组,n=8)和糖尿病+辛伐他汀组(DM+S组,n=8),DM+S组给予辛伐他汀40 mg/(kg·d)灌胃四周,其余两组给予的等量生理盐水。实验结束后,取心脏,分光光度测定法测定大鼠心肌组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,HE染色观察大鼠心肌病理学改变,TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组织化学法测定大鼠p53的表达; Western blot检测心肌组织p53,p53-phospho-serine15,Bax,Bcl-2等蛋白的表达。结果:(1)与对照组比较,DM组大鼠心肌组织MDA含量显著升高(P<0.01),SOD活性明显下降(P<0.01),与DM组比较,DM+S组大鼠SOD活性显著增加(P<0.01),MDA含量显著下降(P<0.01)。(2)HE染色结果表明,与对照组比较,DM组大鼠心肌细胞排列紊乱,结构不清晰,有大量炎性细胞浸润;与DM组比较,DM+S组的心肌细胞结构明显改善。(3) TUNEL细胞凋亡检测结果表明,与control组相比,DM组心肌凋亡细胞阳性率显著增加(P<0.01),给予辛伐他汀后细胞凋亡明显减少(P<0.01);(4)免疫组织学检测结果显示,与对照组比较,DM组p53表达量显著增加,且p53在细胞质和细胞核中均有表达(P<0.01);与DM组比较,DM+S组p53表达量明显下降,p53在细胞质和核中均有表达,但核内表达量减少(P<0.01)。(5) Western blot检测结果表明,与对照组比较,DM组大鼠p53,p53-Phospho-Serine15,Bax表达量显著升高(P<0.01),Bcl-2表达量减少(P<0.01);与DM组比较,DM+S组p53(P<0.01),p53-Phospho-Serine15(P<0.01),Bax(P<0.05)表达量显著下降,Bcl-2(P<0.05)表达量显著增加。结论:辛伐他汀通过改善心肌结构异常、抑制氧化应激和心肌细胞凋亡对糖尿病导致的心肌损伤起到保护作用,其机制与p53介导的细胞凋亡通路相关蛋白的调控有关。

siPGK1在调控黑色素瘤细胞对Vemurafenib敏感性中的作用及其机制

目的:研究磷酸甘油酸酯激酶1(PGK1)对BRAFV600E突变型恶性黑色素瘤(MM)对Vemurafenib(Zelboraf)敏感性的影响及其机制。方法:采用分子生物学、细胞生物学、药理学相关实验方法(MTT、Western blot、FCM、Colongenic)探讨:(1)PGK1以及Vemurafenib对MM细胞的存活增殖能力的影响;(2)通过si PGK1基因增加Vemurafenib药敏感性的机制。结果:(1)沉默PGK1基因后再给以BRAFV600E选择性抑制剂Vemurfenib,MM细胞系的存活率明显下降,并呈一定的剂量依赖性;(2)si PGK1增加MM细胞对Vemurafenib的药物敏感性与激活凋亡信号通路有关。结论:si PGK1通过激活凋亡信号通路增加MM细胞对Vemurafenib的药物敏感性,从而抑制细胞的存活和增殖能力。

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制

目的:观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用并探讨其可能的分子机制。方法:24只SD大鼠随机分为正常对照(NC,n=8)组和糖尿病造模组(n=16)。糖尿病造模组大鼠采用55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,糖尿病模型大鼠随机分为糖尿病(DM)组和糖尿病+辛伐他汀(DM+Sim)组。DM+Sim组大鼠每天给予辛伐他汀40 mg/kg灌胃,1次/日,连续4周。采用组织病理学方法观察肾脏的形态学改变和间质纤维化;采用分子生物学方法检测肾脏组织中内质网应激、炎性因子的表达以及细胞凋亡。结果:(1)与NC组相比,DM组可见肾小球和肾小管间质有明显的病理学改变,胶原纤维明显红染,呈不均匀分布; DM+Sim组形态学以及纤维化有明显改善。(2) DM组大鼠肾组织GRP78、p-IRE1α、NF-κB p65、MCP-1表达均高于NC组(P<0.05),DM+Sim组GRP78、p-IRE1α、NF-κB p65、MCP-1表达较DM组均下降(P<0.05)。(3)TUNEL法检测,NC组肾小球及肾小管存在少量凋亡的细胞,DM组肾小球及肾小管存在大量凋亡的细胞(P <0.01);与DM组比较,DM+Sim组凋亡的细胞明显减少(P<0.01)。结论:给予糖尿病大鼠辛伐他汀后,肾脏形态学以及纤维化明显改善,细胞凋亡明显减少。其对糖尿病肾脏的保护作用与抑制内质网应激和NF-κB炎症信号通路及减少肾脏细胞的凋亡有关。

SR 59230A对心衰大鼠心脏MicroRNAs表达的影响

目的:观察β3肾上腺素受体(β3-AR)对心衰大鼠心脏MicroRNAs表达的影响及可能的作用机制。方法:大鼠冠脉左前降支结扎造成心衰模型,假手术大鼠只穿线不结扎。造模成功大鼠再随机分为:心衰组(CHF control group)和心衰+SR 59230A组(CHF+SR group);假手术大鼠也随机分为假手术组(Sham group)和假手术+SR 59230A组(Sham+SR group)。Sham+SR组和CHF+SR组每天两次腹腔注射SR(85 mmol/L,1 ml),连续注射7周。结果:(1)mi Script miRNA PCR Arrays显示,在体阻断β3-AR后,假手术组与心衰组有18种MicroRNAs共同表达下调;经文献比对,与NF-κB相关的MicroRNAs有6种,分别为miR-125b-5p,miR-143-3p,miR-145-5p,miR-26a-5p,miR-30a-5p和miR-320-5p。(2)大鼠心脏组织切片观察到NF-κB在心衰大鼠心肌细胞核与细胞质中均有分布,而p53在心肌细胞质分布较多,NF-κB和p53表达明显高于假手术组(P<0.05)。阻断β3-AR后,心衰组心脏NF-κB和p53表达显著减少(P<0.05),而假手术组NF-κB和p53表达略增加(P<0.05)。(3)Western blot结果发现心衰大鼠NF-κB p65表达高于假手术组(P<0.05),给予β3-AR阻断剂后,心衰组心脏NF-κB p65和p53-PhosphoSerine 15表达均下降(P<0.05),而假手术组心脏阻断β3-AR后,NF-κB、p53和p53-Phospho-Serine 15表达均增加(P<0.05)。结论:阻断β3肾上腺素受体有利于缓解心衰大鼠心脏的损伤;β3-AR可引起MicroRNAs表达变化且与NF-κB信号通路有关。

辛伐他汀对糖尿病大鼠心脏炎症反应的干预作用及可能机制研究

目的探讨辛伐他汀对糖尿病大鼠心脏组织炎症反应的干预作用及可能机制。方法将24只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和糖尿病+辛伐他汀组(DM+S),每组各8只。DM组和DM+S组予STZ腹腔注射建立糖尿病模型,造模72h后连续3d从大鼠尾静脉采血检测血糖。DM+S组予辛伐他汀灌胃4周,其他两组予等量生理盐水直至实验结束。实验结束后,抽取各组腹主动脉血检测TC和TG含量;随后取心脏,苦味酸天狼星红(Sirius Red)染色观察心脏组织炎症纤维化,免疫组织化学法测定大鼠核转录因子κB(NF-κB)p65和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达;Western blot检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和NF-κB p65蛋白的表达。结果血糖结果显示,造模前各组血糖比较,差异无统计学意义,STZ造模后,DM组和DM+S组血糖升高,且基本保持稳定。与NC组比较,DM组血浆TC和TG含量升高(P<0.01);予辛伐他汀后,DM+S组TC和TG较DM组降低(P<0.05或P<0.01)。苦味酸天狼星红染色结果显示,与NC组比较,DM组心肌组织胶原成分增多,且排列紊乱,心肌间质纤维化明显(P<0.01);DM+S组心肌纤维化程度较DM组减轻,心肌胶原沉着明显减少(P<0.01)。免疫组织化学检测结果显示,各组NF-κB p65,MCP-1均有表达,DM组NF-κB p65在细胞核表达量增加(P<0.01),MCP-1在细胞质表达量增加(P<0.01);DM+S组NF-κB p65和MCP-1表达量下降(P<0.01)。Western blot检测结果表明,DM组心脏组织GRP78和NF-κB p65蛋白表达均高于NC组(P<0.01),DM+S组GRP78和NF-κB p65蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01)。结论糖尿病大鼠予辛伐他汀后,心肌纤维排列紊乱及炎症浸润明显改善,纤维化减少。辛伐他汀对糖尿病心脏损伤的保护作用通过抑制内质网应激和炎症反应来实现,与抑制NF-κB炎症信号通路有关。

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响研究

目的观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏氧化应激和凋亡蛋白表达的影响,并探讨其可能的抗凋亡分子机制。方法 24只SD大鼠随机分为正常对照组(NC,n=8)、糖尿病组(DM,n=8)和辛伐他汀治疗组(DM+Sim,n=8)。腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型。每天记录1次体重,每3d测1次血糖,在辛伐他汀治疗第1周末和第4周末分别检测24h尿蛋白含量。实验结束后,抽取腹主动脉血,检测TC和TG,并取出双侧肾脏,检测肾脏组织丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)水平及蛋白nephrin、p53、p-p53、Bax和Bcl-2的表达。结果与NC组比较,DM组和DM+Sim组体重增长缓慢,而血糖迅速升高;DM组和DM+Sim组体重和血糖比较,差异无统计学意义。辛伐他汀治疗第1周末时,与NC组比较,DM组24h尿蛋白增加(P<0.01);辛伐他汀治疗第4周末时,DM组和DM+Sim组24h尿蛋白均增加,与NC组比较,DM组24h尿蛋白增加,而DM+Sim组较DM组24h尿蛋白下降(P<0.05)。与NC组比较,DM组TC、TG和MDA水平及p53、p-p53和Bax表达升高(P<0.01),而SOD活性以及nephrin、Bcl-2表达降低(P<0.01);与DM组比较,DM+Sim组TC、TG和MDA水平及p53、p-p53和Bax表达降低(P<0.05或P<0.01),而SOD活性及nephrin、Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论辛伐他汀可通过抑制氧化应激,进而抑制促凋亡蛋白和上调抗凋亡蛋白的表达来保护糖尿病大鼠的肾脏。