干扰素β启动子刺激因子1基因多态性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者聚乙二醇干扰素α治疗应答的关系

目的：探讨干扰素β启动子刺激因子（IPS）-1基因多态性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）α治疗应答的关系。方法收集2008年1月-2012年12月在上海瑞金医院感染科就诊的212例接受PEG-IFN单药治疗48周的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者，采集其外周血，提取基因组DNA，并应用时间飞行质谱技术（MassARRAY）检测IPS-1基因的10个Tag-SNP位点多态性。运用卡方检验对2组等位基因频率和基因型分布情况进行分析，应用非条件性二元Logistic回归分析方法分析SNP位点、单体型与PEG-IFN疗效的关系。结果212例患者中，应答率为34．9％（74例），其中HBV基因C型117例， B型95例。研究发现有4个SNP位点（rs2326369、rs2464、rs6515831、rs16989000）的基因型分布在2组之间差异有统计学意义（P＜0．05）。在多因素分析中，校正了性别、年龄、HBV 基因型、家族史、基线HBV DNA水平及基线ALT水平后，发现3个SNP位点（rs2326369、rs6515831、rs2464）与PEG-IFN 应答独立相关。其中（1）rs2326369 CC 型与NR相关（OR＝0．51，95％CI：0．28～0.92，P＝0．026）；（2）rs6515831 TT型与R相关（OR＝2．08，95％CI：1．12～3．86，P＝0．020）；（3）rs2464 CC型与R相关（OR＝2.33，95％CI：1．24～4．37，P＝0．009）。此外，还发现了2个单体域（block），block1：rs16989000-rs6515831；block2：rs7272495-rs16989022-rs2464。多因素分析发现Block2中的单体型AAC 型与R显著相关（OR＝2．05，95％CI：1．09～3．87，P＝0．026）。结论 IPS-1基因多态性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者对PEG-IFN治疗的应答密切相关。对于接受PEG-IFN治疗的慢性乙型肝炎患者，检测IPS-1基因型可能有一定的疗效预测价值。

细胞角蛋白18在慢性肝病诊断中的价值

在慢性肝脏疾病中，凋亡是肝脏细胞死亡的主要形式。细胞角蛋白18（cytokeratint8，CK18，KRT18）是肝脏内主要的中间丝蛋白，并且多项研究表明，外周血中凋亡蛋白酶分解后的CK18片段的含量与肝细胞的凋亡水平相关，提示CK18片段可以作为无创诊断慢性肝脏疾病或者慢性肝脏疾病分期的生物学标志物。本文综述了CK18的生物学意义，进一步总结了近年来在慢性肝脏疾病中关于CK18及其分解片段的临床研究，并对其今后的研究前景作一展望。

IPS-1 SNP在调控HBV感染后干扰素应答机制的研究

目的探讨干扰素β启动子刺激因子1(IPS-1)不同单核苷酸多态性(SNP)基因型对HBV感染后干扰素应答作用机制。方法利用IPS-1野生型和rs17857295、rs7262903、rs7269320三种SNP基因型慢病毒表达载体,转染目的细胞HepG2、HepG2.2.15细胞,qPCR检测HBV感染和IPS-1不同SNP基因型对目的基因表达情况的影响,检测细胞转染后IFN-βmRNA表达水平,探讨IPS-1不同SNP基因型对HBV感染后细胞干扰素应答的机制。结果 IPS-1rs17857295和rs7262903两种SNP基因型转染HepG2.2.15细胞后,IPS-1基因表达水平显著低于野生型转染组(451.77比712.53,498.71比712.53,P<0.01);但IFN-βmRNA表达水平显著高于野生型转染组(分别为5.33比0.98和3.59比0.98,P<0.01);rs7269320 SNP基因型过表达后,IPS-1基因表达水平显著低于野生型转染组(290.63比712.53,P<0.01),但IFN-βmRNA表达水平无明显变化(0.74比0.98)。另外,rs17859295基因型分别转染HepG2和HepG2.2.15细胞后,后者IFN-βmRNA表达水平显著高于前者(5.33比2.25,P<0.01)。结论 IPS-1 rs17857295和rs7262903两种SNP基因型HBV感染者,尤其rs17857295 SNP基因型,清除病毒的能力可能强于野生型的感染者;而IPS-1野生型和rs7269320 SNP基因型HBV感染者可能更易形成病毒感染的慢性化。

乙酰化酶基因 RNA 干扰文库的构建及其对 HepG2．2．15细胞的感染

目的：构建人类基因组中16个组蛋白乙酰化酶的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体文库，为进一步探索表观遗传学基因在 HBV 调控中的作用机制提供有利工具。方法根据 shRNA 引物设计原则，针对每个基因选择8对确保干扰效率的 shRNA 序列（A～H），将引物退火后连接至 shRNA空慢病毒载体上转化，PCR 法验证菌落克隆，确认阳性克隆；对质量合格的质粒再进行单切酶验证。分别将同一基因的4个 shRNA 慢病毒质粒混合，分别包装病毒。293T 细胞转染48 h 和72 h 后收集病毒粗液，感染 HepG2．2．15细胞。感染72 h 后用荧光显微镜观察并评估荧光细胞比例。结果针对16个乙酰化酶基因，构建128个慢病毒载体 RNA 干扰（RNAi）文库，72 h 后慢病毒感染 HepG2．2．15细胞的效率＞80％。结论成功构建16个组蛋白乙酰化酶的 shRNA 慢病毒载体，从而为研究人组蛋白乙酰化酶对 HBV 复制的影响奠定了坚实的基础。