猪PILRA基因克隆及变异剪接体鉴定

Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体（Paired immunoglobulin-like type 2 receptors,PILRs）是免疫球蛋白超家族成员之一,包括α和β两个亚型。PILRα在机体抵抗病原体入侵的免疫反应中发挥着重要作用,但目前尚未见关于猪PILRα的报道。为了分析其在猪抗病育种中的作用,本文克隆了猪PILRα编码基因（PILRA）并鉴定变异剪接体,利用实时荧光定量PCR方法构建其组织表达谱和诱导表达谱。结果表明,成功克隆了猪PILRA基因的3个变异剪接体V1~V3（Gen Bank登录号：KJ143679~81）,预测的蛋白质多肽链分别长271 aa、254 aa和283 aa,且都具有免疫球蛋白结构域。各变异剪接体均在脾脏中表达量最高,肝脏、肺脏次之,在心脏、肾脏、胃、肌肉、淋巴、大肠、小肠和膀胱等组织中表达量较低或检测不到。Poly（I：C）能显著诱导变异剪接体V1的表达,但几乎不影响V2、V3的表达。研究结果为进一步揭示PILRA在猪抗病育种中的作用提供了基础。

猪PILRB基因的克隆及多态性分析

Ⅱ型配对免疫球蛋白样受体(Paired immunoglobulin-like type 2 receptors,PILRs)是近年发现的免疫球蛋白超家族成员之一,含有两个亚型,PILRα和PILRβ。在机体天然免疫反应中发挥重要作用,目前猪PILRB基因基因组序列尚未得到克隆、测序。研究利用PCR方法克隆猪PILRB基因部分基因组序列并分析该区域多态性。结果表明,获得猪PILRB基因序列长1 127 bp,包含完整外显子1、内含子1、外显子2、内含子2、外显子3和部分内含子3。猪PILRB基因内含子1和内含子2为研究首次克隆,全长分别为9和314 bp。在该区域共检测到15个SNPs,其中6个为中度多态位点,共形成5种单倍体型,ACACCG为优势单倍体型。研究结果为进一步揭示这些SNPs对PILRβ功能的影响及其在猪抗病育种中的作用提供基础。

猪miRNA-101真核表达载体的构建及定点突变

miRNA通过在转录后水平调控靶基因的表达,在机体的生命活动中发挥着重要作用。成熟miRNA 5’端第2~8个核苷酸对其识别、结合靶基因至关重要。笔者的前期研究发现,猪miRNA-101成熟序列5’第5个核苷酸存在着C/A突变。为了研究该突变对miRNA-101功能的影响,试验以pc DNA3.1＋为载体骨架,构建了猪miRNA-101基因野生型真核表达载体,并利用重叠延伸PCR法进行定点突变。结果表明：试验成功获得了miRNA-101成熟序列5’端第5个核苷酸突变为A的真核表达载体。