基于小型化Cas蛋白的CRISPR/Gal4BD-Cas供体适配基因编辑系统研究

在哺乳动物细胞中,利用同源引导修复(homology-directed repair,HDR)机制的基因编辑策略能够实现精准的点编辑和敲入,但是HDR的低效性严重制约了该策略在精准医疗和分子设计育种中的应用。鉴于HDR机制所需的供体DNA模板不能自主募集到基因组双链断裂(double-stranded break,DSB)处,本课题组提出了供体适配系统(donor adapting system,DAS)的概念并开发出CRISPR/SpCas9-Gal4BD供体适配基因编辑系统。由于SpCas9蛋白分子较大,与Gal4BD适配器结合不利于表达、病毒载体包装及活体递送等过程,因此本研究进一步采用两种小型化Cas蛋白——路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)源SlugCas9变体SlugCas9-HF与氨基酸球菌(Acidaminococcus sp.)源AsCas12a,开发了新型的CRISPR/Gal4BD-SlugCas9和CRISPR/Gal4BD-AsCas12a供体适配基因编辑系统。通过SSA活性报告实验初步证明了Gal4BD与SlugCas9、AsCas12a N-端融合对其打靶活性影响较小。通过HDR效率报告实验进行功能验证并优化供体设计方案,结果表明:对于CRISPR/Gal4BD-AsCas12a DAS,适配器结合序列(binding sequence,BS)与供体5′-端融合(BS-dsDNA)效果较好;对于CRISPR/Gal4BD-SlugCas9 DAS,则BS与供体3′-端融合(dsDNA-BS)较佳。最终,利用CRISPR/Gal4BD-SlugCas9 DAS对HEK293T细胞中的EMX1、NUDT5、AAVS1三个基因位点分别实现了24%、37%、31%的精准编辑,相比对照组得到了显著提高。本研究为供体适配基因编辑系统的进一步优化提供了参考和借鉴,为后续动物分子设计育种应用研究提供了新的基因编辑工具。

校园集体舞教学与学生成长

集体舞是融音乐、舞蹈、体操于一体的集体舞表演,是进行美学教育和艺术教育最直观、最形象的手段和形式。集体舞走进校园,并广泛地在学校普及,使得学生更加活泼可爱,更加生机勃勃。自从学校组织、实施校园集体舞,学生的自信心明显得到增加,集体活动参与意识更加强烈。

爱能感化、包容和激励

在教学过程中,教师需要用学生的视角去观察,用学生的兴趣去探寻,用学生的情感去热爱,善于跟学生交朋友,了解学生的心灵,这样总会找到教育学生的好办法。爱是一种美好的情感,在爱的环境中成长的学生会充满爱心,而这种爱心会使他的一生都过得快乐,不管是贫穷还是富有。