EGF和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

目的构建能表达靶向EGF RmRNA和IGF-1 RmRNA的siRNA真核表达质粒。方法从GeneBank中搜索EGFR(NM 000875)和IGF-1 R(NM 201283)基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,并根据其序列构建真核表达质粒。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiPC。转染后分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h,以转染率高的时间点的鼻咽癌细胞做流式细胞仪检测转染率,并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达。结果质粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现:在转染48h达最高(55%～60%之间);流式细胞仪检测转染后48h的转染率为57.45%,共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光。结论本实验构建了靶向EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、表达短发夹RNA(shRNA)的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞并在其中表达,能下调鼻咽癌细胞EGFR和IGF-1 R的表达。

颅脑损伤患者家属心理健康状况的调查

目的:了解颅脑损伤患者家属的心理健康状况及其影响因素。方法:对80名颅脑损伤患者家属采用症状自评量表(SCL-90)、简易应对方式问卷(SCSQ)、艾森克个性问卷(EPQ)进行调查。结果:颅脑损伤患者家属SCL-90总分及各因子分均明显高于国内常模,80%(64/80)的患者家属心理健康状况不良,其异常的心理症状主要为强迫、敌对、抑郁和焦虑。积极应对方式、性格内外向(EPQ-E)与SCL-90呈显著负相关,消极应对方式、情绪稳定性(EPQ-N)与SCL-90呈显著正相关。结论:颅脑损伤患者家属存在不同程度的心理问题,并受多种因素影响,应予以心理干预。

不同p53功能状态的胶质瘤细胞株放射敏感性研究

目的探讨不同p53功能状态胶质瘤细胞的放射敏感性。方法采用射线照射野生型p53基因的U87和突变型P53的U251细胞株。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,成克隆实验测定细胞存活分数,采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数Do、Dq、N和α、β、SF2值。结果射线处理后U87细胞亚二倍体峰明显高于U251(P<0.05﹚,而U251细胞明显阻滞于G0/G1期;突变型p53基因的U251和野生型p53基因的U87细胞的Do值分别为1.0450、0.9652Gy;Dq值分别为1.8544、1.2524Gy;a值分别为0.13、0.525Gy-1;SF2值分别为0.722、0.241。野生型p53基因U87细胞Do、Dq和SF2值均减小,α值增大。结论野生型p53基因U87可以提高胶质瘤细胞的放射敏感性。

Bcl-xl和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

目的:构建能表达靶向Bcl-XL mRNA和IGF1RmRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GeneBank中搜索Bcl-XL(NM_138578)和IGF-1R(NM_000875)基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,根据其序列构建siRNA真核表达质粒:psiBcl-XL1和psiBcl-XL2以及psiIGF1R1和psiIGF1R2。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiHK。所构建的质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和SalI的酶切位点。质粒经酶切后,电泳鉴定酶切片段;基因测序分析质粒的碱基序列;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞。转染后培养48h,做流式细胞仪检测转染率并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达,通过RT-PCR检测各组质粒对其基因的干扰率。结果:质粒psiBcl-XL1、psiBcl-XL2、psiIGF1R1、psiIGF1R2和psiHK酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现:在转染48小时达最高(45%～50%之间);流式细胞仪检测转染后48小时的转染率为48.45%,并在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光;psiBcl-XL1、psiIGF-1R1、psiB-clXL2和psiIGF1R2干扰率分别是:22.1%、50%、70.6%、61.8%。结论:本实验构建了靶向Bcl-XLmRNA和IGF1R mRNA、表达短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid,shRNA)的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽咽癌细胞,psiBcl-XL2和psiIGF-1R2与psiBcl-XL1和psiIGF1R1相比,转染CNE2 48h后其对mRNA的干扰率相对较高。

氯胺酮对神经外科手术麻醉后痛觉缓解的有效性和安全性研究

目的探讨氯胺酮对神经外科手术麻醉后痛觉缓解的有效性及安全性。方法选择在我院神经外科开颅手术的63例脑肿瘤患者,随机分为观察组37例和对照组26例,对照组采用常规麻醉,观察组在缝皮时给予氯胺酮。记录患者术后麻醉恢复情况如苏醒时间、拔管时间;记录苏醒期的不良反应发生情况;采用Ramsay镇静程度分级对患者进行镇静程度评价;采用疼痛视觉模拟评分(VAS)对患者苏醒后疼痛水平进行评分。结果观察组苏醒时间为(54.7±23.1)min,对照组苏醒时间为(55.8±27.3)min,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组不良反应发生率(48.15%)与对照组(42.31%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组苏醒后15 min Ramsay分级(3.0±0.7)显著高于对照组(2.3±0.8)(P<0.05);观察组苏醒后15 min、1 h VAS评分明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小剂量氯胺酮可以明显缓解神经外科手术麻醉后的痛觉敏感,且不影响患者的拔管、苏醒时间,使用安全,值得临床推广。

立体定向微创术联合活血利水醒脑中药治疗脑桥出血疗效观察

目的探讨立体定向微创术联合活血利水醒脑中药治疗脑桥出血的临床疗效。方法回顾性分析36例脑桥出血患者的临床资料,按治疗方式的不同分为2组各18例。对照组西医常规保守治疗,观察组立体定向微创置管、引流术+活血利水醒脑中药+西医常规治疗。观察对比指标包括清醒时间及清醒率、格拉斯哥预后评分(GOS)及病死率、并发症发生率。结果观察组18例手术均获成功,无手术死亡病例,术后因肺部感染死亡2例,存活16例,病死率11.11%;对照组18例患者中存活1例,随访3个月后死亡,其他病例均于发病后14d内死亡,平均死亡时间12.25d,病死率100%。观察组的GOS评分、清醒时间及清醒率优于对照组,且并发症发生率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论采用立体定向微创术联合活血利水醒脑中药治疗脑桥出血疗效显著,值得临床推广。

IDH1/2基因突变诱导胶质瘤细胞恶变的研究现状

低级别胶质瘤患者通过目前的医疗手段可以明显延长生存期,甚至达到＂治愈＂的效果,但绝大多数仍摆脱不了瘤细胞向更高恶性度发展的噩运。有些患者甚至没有低度恶性的前驱病灶即迅速恶化为胶质母细胞瘤。这些都说明,人类还没有从根本上认识肿瘤在发生以及向恶性发展的过程中,瘤细胞内发生的分子事件以及这些事件之后的“连锁反应”给细胞的生物学特性所造成的后果。我们就最近新发现的异柠檬酸脱氢酶（IDHl／IDH2）基因在胶质瘤发生发展中的作用机制，以及该机制在瘤细胞恶变过程中是否起主要作用，作一综述。

Hedgehog信号通路相关基因在人脑胶质瘤干细胞和胶质瘤组织中的表达及其意义

目的探讨Hedgehog信号通路相关基因在人脑胶质瘤干细胞及脑肿瘤组织中的表达及其意义。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测U251和D341恶性脑胶质瘤干细胞中SHH、Ptch、Smo mRNA及23例脑胶质瘤组织中SHH和Smo mRNA的表达。结果 SHH mRNA在U251细胞和胶质瘤组织中的表达分别显著高于其在D341细胞和瘤周组织中表达(P<0.05);Ptch mRNA、Smo mRNA在两个细胞系细胞中的表达及Smo mRNA在胶质瘤组织和瘤周组织中的表达无显著性差异(P>0.05)。结论本结果提示,Hedgehog信号通路的异常启动参与了脑胶质瘤的病理发生、发展过程。

颅脑损伤患者脑细胞间液代谢物含量的变化及其临床意义

目的探讨颅脑损伤患者脑细胞间液中葡萄糖(Glu)、乳酸(Lac)、丙酮酸(Pyru)、甘油(Gly)、一氧化氮(NO)含量的变化及其临床意义。方法将微透析导管分别插入患者病灶半暗带区、相对正常脑组织区和腹部皮下组织收集微透析液,用生化分析仪测定Glu、Lac、Pyru、Gly、NO的变化,并计算Lac与Glu(L/G)及Lac与Pyru(L/P)之比值。结果病灶半暗带区脑组织中Glu、Pyru、Gly的含量及L/G、L/P比值与相对正常脑组织中的相应值无显著性差异(P>0.05),Glu的含量和L/P比值均明显低于腹腔皮下组织的相应值(P<0.01),Lac和NO浓度则明显高于正常脑组织和腹部皮下组织(P<0.01)。结论微透析技术提供了一种实时监测颅脑损伤患者脑细胞间液生化指标的手段。患者脑组织间液中的生化指标和NO的含量变化可能与其预后密切相关。

高压氧治疗开颅术后并发脑梗死的体会

近10年来我院用药物同时加用高压氧治疗开颅术后并发的脑梗死患者60例，疗效满意。