IgA肾病的治疗进展

IgA肾病是最常见的原发性肾小球疾病,由于其发病机制尚未明确,目前仍无特异性治疗药物.临床上的治疗目标是有效降低蛋白尿,控制血压和(或)高尿酸并减少肾组织进一步损伤,维持肾功能稳定.对反复发作的镜下血尿患者,扁桃体切除术作为治疗的一种手段;对单纯性血尿和病理改变较轻者,主要加强随访观察;对于有尿蛋白和(或)高血压的缓慢进展的IgA肾病,血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂可用于大部分病例,必要时可使用糖皮质激素,也可应用细胞毒性药物或吗替麦考酚酯等免疫抑制剂进行治疗;病情进展较快的高危患者,可用糖皮质激素冲击治疗,或使用细胞毒药物或免疫抑制剂等强化治疗.

运用saRNA激活p21基因表达上调对肺癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的:探讨利用针对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21WAF1/CIP1(p21)的基因启动子的saR-NA(dsp21-322)特异激活p21基因的表达对肺癌细胞生长及耐药的影响。方法:化学合成针对p21启动子区的saRNA,将其转染非小细胞型肺癌细胞系A549,利用RT-PCR技术及Western blotting技术检测细胞中p21表达情况,进而观察p21表达改变后细胞凋亡情况及对顺铂药物敏感性的影响。结果:在转染dsp21-322的A549肺癌细胞中,p21的mRNA和蛋白的表达均有所上调。p21表达的上调可引起A549细胞生长的的明显抑制并可增强其对顺铂的化疗敏感性。结论:p21基因在肺癌药物耐药性的过程中发挥了作用,为应用saRNA上调抑癌基因治疗肿瘤提供了新的思路。

转化生长因子β1和上皮细胞间充质转分化在糖尿病肾脏疾病中的作用

在美国糖尿病。肾脏疾病（diabetic kidney disease，DKD）的发病率在近十年内升高近2倍，有近50％的患者走向终末期肾脏疾病（end stage renal disease，ESRD）。DKD已经成为导致患者肾脏代替治疗的常见肾脏病之一。高血糖引起的结构损伤包括基底膜肥厚、肾小管萎缩及肾间质纤维化，这些改变导致了肾小球滤过率增加、蛋白尿、高血压及肾功能的减退。在组织学上，

韦格纳肉芽肿病例1例报告

患者：男，48岁，2010年3月中旬因发热、纳差就诊于西安市某医院。相关检查：血常规正常；血沉22mm／h；尿常规蛋白（±），潜血2＋；肝肾功能正常；抗中性粒细胞胞浆抗体核周型（P-ANCA）（-），胞浆型（C-ANCA）（＋），蛋白酶3（PR3）为31．03U／ml；胸部CT示右肺炎症。诊断考虑血管炎，给予泼尼松、等治疗，体温未下降。3月下旬，患者就诊于西安市某医院。相关检查：血沉100mm／h；胸部CT示右肺下叶炎症改变，双侧胸腔积液；肾功能正常；支气管镜检查考虑肺癌可能；肺穿刺病理：右下肺肉芽肿性炎，提示结核。

提高尿毒症维持性血液透析患者生活质量初探

血液透析是尿毒症患者重要的肾脏替代疗法,在血液透析时医护人员全面系统的健康教育,家庭社会充分理解和支持,患者积极参与社会活动是提高患者生活质量的有效途径。

前列腺素E_1对糖尿病肾病患者肾动脉血流动力学的影响

目的:了解前列腺素E1(PGE1)对糖尿病肾病(DN)患者肾动脉血流动力学的影响.方法:利用彩色多普勒观察95例DN患者经PGE1治疗前后的肾动脉血流动力学的变化.结果:DN患者肾动脉血流动力学的各项参数,特别是肾动脉内径、时间速度积分、阻力指数变化显著(P<0.01);PGE1治疗后,其各项参数均有明显的变化(P<0.05);同时BUN,Cr水平由治疗前的(10.1±5.4)mmol/L,(194±51)μmol/L降至(7.9±6.0)mmol/L,(99±35)μmol/L,尿量由(948±128)mL/d增至(1242±373)mL/d,均有明显的改善(P<0.05).结论:DN时多伴有凝血、纤溶障碍所导致的肾动脉血流动力学的变化,应用PGE1治疗有益于延缓肾功能的恶化.

缺氧调控报告载体的构建与鉴定

目的:构建能用来检测缺氧应答启动子转录调控作用的萤火虫荧光素酶报告载体.方法:合成缺氧应答元件(HRE)的寡核苷酸序列及其突变对照,克隆入pCIneo,构建HRE/CMV重组载体.然后采用PCR方法将HRE/CMV启动子定向亚克隆入pGL3Basic.结果:酶切和测序鉴定分析,所克隆的基因产物酶切结果与预期值一致,序列无碱基的突变.结论:成功构建了缺氧应答启动子的荧光素酶报告载体,为进一步研究其缺氧调控作用提供了条件.

TGF-β R Ⅱ真核表达载体及其RNA干扰质粒的构建及鉴定

目的构建含有TGF-βⅡ型受体(TGF-β R Ⅱ)的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,并观察RNA干扰对TGF-β R Ⅱ表达的抑制作用。方法PCR方法扩增TGF-β R Ⅱ的cDNA序列,将全长的TGF-β R ⅡcDNA插入pcD-NA3.1中,构建TGF-β R Ⅱ的真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ,并检测其在293T细胞中的表达。根据TGF-β R Ⅱ的基因序列,设计针对TGF-β R Ⅱ的干扰RNA,构建针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ。脂质体介导质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ和pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ共转染293T细胞,Western blot法检测RNA干扰质粒的生物活性。结果真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ和RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ经酶切鉴定构建正确,测序结果显示未发生基因突变。间接免疫荧光检测pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ转染的293T细胞,可见绿色荧光。针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-β R Ⅱ的表达。结论已成功构建了TGF-β R Ⅱ的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,为进一步研究针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用奠定了基础。

慢性肾衰血透患者TTV检测及其与细胞免疫功能的关系

目的 观察慢性肾衰 (CRF)血液透析 (HD)患者中 ,输血传播病毒 (TTV)的感染与患者细胞免疫功能的关系。方法 应用巢式逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,双抗体夹心ELISA法及流式细胞仪 ,分别检测了 90例CRF血透患者和 12 8例对照组血清TTV DNA ,可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)和外周血T淋巴细胞亚群。并随机选择对其中1株TTV的部分基因序列进行测定 ,分析TTV与细胞免疫功能、输血次数、HD时间和肝功能的关系。结果 ⑴ 90例CRF血透患者中 ,TTV DNA阳性率为 46 6 7% ,明显高于正常对照组 (P <0 0 0 1) ,与日本报道的TTV DNA序列(AB0 0 8394)相应片段的同源性为 98 5 %。⑵CRF血透患者血清中 ,sIL 2R水平明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;CD3+,CD4+和CD4+/CD8+T细胞比例明显降低 (P <0 0 1)。⑶TTV DNA阳性率与sIL 2R、输血次数及HD时间呈显著的正相关 (r =0 486 ,P <0 0 1;r =0 .5 86 ,P <0 0 0 1;r =0 492 ,P <0 0 1) ,与CD+,CD4+和CD4+/CD8+T细胞比例呈负相关 (r = 0 476 ,P <0 0 1;r = 0 483,P <0 0 1;r= 0 496 ,P <0 0 1) ,而与年龄、性别及手术史均无显著的差别和相关性。结论 CRF血透患者有严重的TTV感染 ;

慢性肾衰患者外源性PGE_1与血浆内皮素及降钙素基因相关肽的关系

目的 观察外源性前列腺素 E1 (PGE1 )对慢性肾衰(CRF)患者血浆内皮素 (ET)及降钙素基因相关肽 (CGRP)水平的影响 .方法 利用放射免疫分析法测定 90例 CRF患者经 PGE1 治疗后的血浆 ET及 CGRP水平的变化并分析其相互关系 .结果 CRF患者血浆 ET的水平较对照组明显升高(P<0 .0 1) ,血浆 CGRP的水平较对照组明显降低 (P<0 .0 1) .ET与肾功能参数 (BU N,Cr)呈明显的正相关 (r=0 .5 8,P<0 .0 1;r=0 .6 2 ,P<0 .0 1) ,与尿量呈明显的负相关 (r= - 0 .6 0 ,P<0 .0 1) .PGE1 治疗后 ,ET和 CGRP水平均有所好转 (P<0 .0 5 ) ,同时肾功能参数 (BUN,Cr)和尿量亦有改善(P<0 .0 5 ) .结论 CRF多伴有血浆 ET及 CGRP水平的变化 ,应用 PGE1

开发缺氧调控载体用于肾性贫血的基因治疗

目的:开发具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于肾性贫血的逆转和治疗。方法:合成源于各种缺氧应答基因的缺氧应答元件(HRE)寡核苷酸序列,与CMV启动子连接组合,测定荧光素酶的相对活性以确定缺氧转录活性。结果:在各种缺氧调控载体中,由鼠PGK(mPGK)基因的HRE序列和CMV启动子组合成的缺氧应答启动子显示出14.6倍的高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMVI.E启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论:3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于肾性贫血等一系列疾病实现目的基因的精确调控表达可能非常有用。

慢性肾脏病患者动态血压参数及血压变异的特点分析

目的 分析慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者动态血压参数与肾小球滤过率（GFR）及尿蛋白定量的相关性,并探讨血压变异性参数特点.方法 收集首次治疗的伴有高血压及蛋白尿的CKD患者70例.测量肾功能、24 h尿蛋白定量等生化检测结果,采用动态血压监测仪监测24 h血压并记录参数.根据GFR将患者分为CKD1~2期组和CKD3~5期组.根据24 h尿蛋白定量分为以下3组：Ⅰ组＜1.0 g,Ⅱ组1.0～3.5 g,Ⅲ组＞3.5 g.比较各组动态血压参数,并探讨监测结果与肾功能及蛋白尿的关系.结果 随着患者肾功能恶化,24 h收缩压、舒张压、脉压差、白昼收缩压、夜间收缩压等指标明显升高（P＜0.05）,且与GFR成负相关,白昼收缩压是GFR下降的独立危险因素.Ⅲ组的白昼舒张压（92.94±15.32）mm Hg明显高于Ⅰ组的（85.25±8.64）mm Hg（P＜0.05）.白昼舒张压与蛋白尿水平呈正相关（r=0.257,P=0.032）.所有患者舒张压变异性均明显高于收缩压变异性（P＜0.05）.结论 本研究样本中收缩压与肾功能恶化明显相关,白昼收缩压和舒张压分别与GFR下降及蛋白尿有关,舒张压变异性应受到更多重视.

Raf-1磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)融合蛋白的表达及其对细胞内磷脂酸的示踪作用

目的构建示踪细胞内磷脂酸的工具。方法人Raf-1基因磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)能特异性结合磷脂酸,通过PCR和酶切Raf-1-PABD序列,并连接至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的载体,测序鉴定正确后,细胞转染pc DNA3.0-mito PLD-HA质粒表达线粒体磷脂酶D(mito PLD)产生大量磷脂酸,同时以Raf-1-PABD-EGFP融合蛋白结合产生的磷脂酸以示踪细胞内磷脂酸的量以及细胞内磷脂酸的改变。结果重组工具载体p EGFP-C1-Raf-1-PABD(磷脂酸结合蛋白)构建并成功表达,可示踪线粒体融合过程中磷脂酸的改变。结论成功构建了示踪细胞内磷脂酸水平的p EGFP-C1-Raf-1-PABD的载体,将其转染NIH3T3细胞进行表达,可用于细胞内线粒体中磷脂酸的示踪。

HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定

目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。

高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。