乳鼠心脏Sca-1^+干细胞定向分化的诱导研究

目的研究抗坏血酸(ascorbic acid,AA)即维生素C(vitamin C,Vc)、地塞米松(dexamethasone,DXMS)及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对Sca-1+干细胞分化为心肌细胞的定向诱导作用。方法急性分离并培养C57BL/6J乳鼠心脏来源的Sca-1+干细胞至第3代或第4代,培养基中分别加入抗坏血酸、地塞米松及EPO,以不同的诱导方案促使其分化,分组如下:空白对照组、DMSO对照组、Vc诱导组、DXMS诱导组、EPO诱导组、Vc及DXMS联合诱导组。干细胞在不同诱导剂作用下持续培养3周,期间利用光镜观察细胞形态改变;第3周时进行Nkx2.5和cTnI免疫荧光染色来判断干细胞的分化效率。结果光镜观察显示,Sca-1+干细胞在抗坏血酸、地塞米松及EPO的诱导下,均有不同程度向心肌细胞分化的形态学变化。免疫荧光染色结果显示,分化细胞中的心肌细胞特异性标记物cTnI及Nkx2.5的阳性率均低于50%,其中cTnI阳性率分别为:空白对照组(9.41±1.67)%、DMSO对照组(10.42±3.20)%、Vc诱导组(14.84±1.99)%、DXMS诱导组(10.68±2.27)%、EPO诱导组(8.64±2.98)%、Vc及DXMS联合诱导组(44.27±22.91)%。与空白对照组相比,仅联合诱导组cTnI表达水平明显上调[(9.41±1.67)%vs(44.27±22.91)%,P<0.05],其余各组与空白对照组相比差异均无统计学意义。Nkx2.5在各组的阳性率较低,Vc及DXMS联合诱导组仅为(0.05±0.02)%,其余各组阳性率均低于该水平。结论抗坏血酸、地塞米松及EPO在Sca-1+干细胞分化为心肌细胞的过程中有一定的诱导作用,其中,抗坏血酸和地塞米松联合诱导组可在较高水平上诱导Sca-1+干细胞分化为心肌细胞。