病毒感染与细胞因子风暴

细胞因子风暴是一种由多种原因引起的,细胞因子不可控制的分泌引起免疫细胞破坏正常组织的现象,COVID-19爆发期间,研究者发现患者出现危重病情甚至死亡并不是病毒本身引起的,而是细胞因子风暴的发生导致患者出现呼吸窘迫、全身性炎症反应等症状引起的。在COVID-19爆发前,研究者就发现流感病毒会导致患者死亡的原因就是患者机体出现细胞因子风暴。本文对细胞因子风暴的产生机制、关键的细胞因子及免疫在病毒清除和机体损伤的平衡作用进行综述,旨在为病毒感染的诊断及治疗提供帮助。

PROTAC技术在免疫相关疾病中的研究进展

目前针对免疫相关疾病,尤其是免疫紊乱导致的自身免疫病以及变态反应性疾病,临床上的主要手段是利用甾体类和非甾体类以及其他免疫抑制剂进行治疗,没有针对疾病靶点的特异性治疗手段,同时由于免疫功能的缺乏,导致感染、肿瘤等副作用,其威胁程度甚至高于原发性疾病。近年来,由于多种免疫相关疾病发病机制和关键蛋白靶点的发现以及蛋白质降解靶向嵌合体(PROTAC)技术的逐步完善,越来越多的PROTAC药物被应用于免疫相关疾病的领域。本文聚焦免疫相关疾病的PROTAC药物,对其分子结构、降解效率及治疗效果进行总结概括,以期为免疫相关疾病的临床治疗及PROTAC的进一步发展提供一定的研究思路和参考。

鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株的构建及其相关功能研究

目的构建鼻疽诺卡菌IFM10152哺乳动物侵袭基因4A(mammalian cell entry 4A,mce4A)缺失株,并分析该基因在鼻疽诺卡菌感染宿主细胞中发挥的作用。方法采用无抗生素标记的框内缺失法构建鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,通过PCR及测序的方法进行验证。进行体外生长实验、用THP-1(人白血病单核细胞系)作为体外模型进行巨噬细胞杀菌试验以及用HeLa(宫颈癌上皮细胞系)细胞进行体外黏附侵袭试验来分析mce4A基因在鼻疽诺卡菌与宿主细胞相互作用中发挥的功能。结果成功构建无抗生素标记的mce4A基因框内缺失株,命名为△mce4A;缺失株与野生株生长速度无明显差异。通过实验证明,mce4A基因敲除后,鼻疽诺卡菌抵抗巨噬细胞杀伤能力明显减弱,且鼻疽诺卡菌的黏附侵袭能力也明显减低。结论成功构建了鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,mce4A基因在鼻疽诺卡菌黏附侵袭宿主细胞及巨噬细胞内存活过程中可能发挥了重要作用。

鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的通过鉴别鼻疽诺卡菌菌体蛋白中具有免疫原性的蛋白,为筛选鼻疽诺卡菌特异诊断抗原提供线索。方法提取鼻疽诺卡菌菌体蛋白进行双向电泳,结合免疫印迹法筛选与抗鼻疽诺卡菌兔血清发生免疫反应的蛋白点。结果在鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫杂交膜上,共发现9个具有抗原活性的蛋白,其中8个可在考马斯蓝染色胶上找到匹配点,通过介质辅助激光解吸电离飞行时间质谱成功鉴定8个蛋白,全部定位于胞内。结论本研究成功建立鼻疽诺卡菌免疫蛋白质组学方法,在鼻疽诺卡菌菌体蛋白中发现新的具有免疫原性的蛋白,可作为鼻疽诺卡菌特异性诊断候选抗原,用于诊断试剂的研究。

高糖高脂对鼻疽诺卡菌作用于RAW264.7巨噬细胞的影响

目的在体外培养巨噬细胞RAW264.7的基础上以高糖高脂刺激，检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用后的免疫指标，探讨高糖高脂对巨噬细胞免疫功能的影响。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞，分为5组，对照组为常规培养，实验组分为4组：高糖组以50 mmol/L葡萄糖培养，高脂1组以10 mg/L溶血卵磷脂培养，高脂2组以25 mg/L溶血卵磷脂培养，高脂高糖组以50 mmol/L葡萄糖＋25 mg/L溶血卵磷脂培养。检测不同条件培养6、12、24、36 h后各组巨噬细胞的细胞活性。5组巨噬细胞分别用以上条件培养24 h后与鼻疽诺卡菌作用，动态追踪检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用1、2、3、4、5、6 h后的吞噬率，及作用1、3、6 h后诺卡菌对不同细胞组的细胞毒性大小和细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量。结果高糖高脂培养使巨噬细胞活性降低，培养24 h后各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。高糖高脂的刺激降低了巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力，高糖组、高脂2组在1、2 h，高脂1组在1、2、3 h，高糖高脂组在1、2、3、4 h处对鼻疽诺卡菌的吞噬率低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组比较，鼻疽诺卡菌对各实验组的细胞毒性减低（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组相比，高脂1组、高脂2组、高糖高脂组在作用3 h后IL-10的分泌量低于对照组（P〈0.05）；高糖组、高脂1组在作用1 h后TNF的分泌量低于对照组（P〈0.05）。结论高糖高脂培养可降低巨噬细胞的活性，降低巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力，并影响鼻疽诺卡菌对巨噬细胞的毒性作用以及巨噬细胞细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量。