房水培养对牛角膜内皮细胞生长的影响

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经消毒过滤后取上清备用。从牛眼角膜组织分离牛CECs并用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液进行培养传代。分别在培养液中加入不同体积的房水，使房水终体积分数分别为2．5％、5．O％、10．O％、15．O％、20．O％，对照组不加房水，利用细胞计数试剂盒-8（CCK_8）比色法检测各组细胞在450nm处的吸光度（A。，。）值。流式细胞仪分析10．O％房水培养对CECs细胞周期的影响。待培养细胞融合成单层后，1ml塑料枪头尖端在培养皿底划痕并用含10％胎牛血清的DMEM培养液中加入10．O％房水培养24h，未加入房水的培养液作为对照组，检测细胞单层的愈合情况。将细胞以6xlO’个／ml密度接种到培养皿中，分别用含10．0％房水的培养液和无房水的培养液孵育5d，利用DAPI荧光染色技术分析细胞密度。结果培养的CECs呈六角形、铺路石样的扁平状。CCK-8比色法检测表明，各培养组细胞的A450值总体比较差异有统计学意义（F=4．051，P=0．007）；与对照组比较，各房水培养组细胞的A450值均明显高于对照组，以含10．0％房水培养组CECs的A450值最高，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞术分析表明，10．0％房水孵育24h后，处于S-G2期的细胞比例为（34．80±3．13）％，对照组为（23．06±1．13）％，差异有统计学意义（t=-5．729，P=0．005）。划痕愈合分析检测表明，10．0％房水组的细胞单层划痕面积为（0．116±0．019）mm2，对照组为（0．358±0．049）mm2，差异有统计学意义（t=13．842，P=0．000）。DAPI荧光染色结果显示，10．0％房水组的平均细胞密度为（1439±110）个／视野，大于对照组的（1162±45）个／视野，差异有统计学意义（t=-11．020，P=0．000）。结论房水作用于培养的牛CECs后可促进CECs的生长，10．0％房水对培养的CECs有促进角膜细胞增生的作用。

膈疝胸部X线征象与钡餐造影应用价值

目的探讨膈疝的胸部X线征象及钡餐造影应用价值,对胸部X线检查出现误诊漏诊病例进行原因分析。方法回顾分析22例患者经钡餐造影和部分手术证实为膈疝的胸部X线征象及钡餐造影表现。结果膈疝具有下列征象:①膈面异常:膈面轮廓不清,假膈面升高;②胸腔纵隔心影重叠区异常阴影:膈上囊状影或团块影(可含气、液平面),且与膈肌不易分开;胸腔宽大气液面;胸部侧位见心后食管走形区大小不一的囊状影或肿块影;下肺野心膈角区囊状影;胸骨后前肋膈角区团块影;单侧肺野蜂窝状透亮影;③胸腔阴影形态的可变性:不同时间、不同体位阴影的形态、密度及内容物可发生变化;④临近脏器异常:纵隔向健侧移位,腹腔脏器上移位;⑤钡餐造影发现钡剂进入胸腔阴影内。结论单纯胸部X线征象可以高度提示膈疝的诊断,钡餐造影对明确膈疝的诊断有重要诊断价值。

组织工程角膜内皮层移植的研究与应用

背景:组织工程角膜内皮可以克服角膜内皮移植的短缺并能够改善角膜内皮细胞的质量,其应用前景十分广阔。因此,寻找一种理想的重建角膜内皮方法是组织工程角膜研究领域的重要课题和研究热点。目的:总结并讨论组织工程角膜内皮重建的研究进展。方法:应用计算机检索PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)相关文章,检索时间为2000至2012年,检索词为"corneal endothelial cell,transplantation,tissue engineering",并限定文章语言种类为英语,然后再从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论:初检得到163篇文章,按主题相关性对文献进一步筛选,最终纳入44篇文章。目前构建单层角膜内皮层的研究较多,也取得了巨大的成绩,但是仍没有一种材料或重建方式可以完全符合临床应用的组织工程的人角膜内皮。每一种材料和方法都各有优缺点,克服这些缺点以及观察在体内的长期影响是今后的发展方向。

探讨胸骨旁裂孔疝影像检查技术的临床应用

目的分析胸骨旁裂孔疝的影像学特征,并对其影像检查技术进行探讨。方法本组8例胸骨旁裂孔疝,7例摄胸部正侧位片,4例做钡餐,6例做胸部CT。结果 7例胸部正侧位片均提示可能性诊断,4例钡餐清楚显示胃或结肠疝入胸腔,5例胸部CT显示消化道空腔脏器和/或大网膜疝入胸腔。结论胸骨旁裂孔疝的疝内容物为消化道空腔脏器运用钡餐检查为最佳选择;当疝内容物为大网膜及实质脏器运用CT检查为最佳选择。

重视四肢隐匿性骨折特殊体位投照技术的临床应用

四肢骨折是急诊医学中最为常见的创伤性疾病,目前尽管CT、MRI已较为普及,在骨关节外伤的检查应用也越来越广泛,但是在尚不具备这些大型设备的基层医院,还是主要依靠传统X线摄影进行检查与诊断,且传统X线摄影仍为骨关节外伤首选检查方法。在常规投照位置检查后未发现异常或发现可疑异常征象时,应根据临床症状与体征进一步加摄特殊体位或专用摄影位置予以明确。现根据16例患者临床应用经验,结合典型病例,报告如下。

胸骨旁裂孔疝3例报告

胸骨旁裂孔疝又称胸骨旁疝或胸骨后疝，属于先天性裂孔疝，本病在胸部正位片可见右膈上或右心膈角处呈密度增高阴影，由于疝入内容物不同，往往有不同X线征象。

原子力显微镜观察角膜内皮细胞诱导后诱导多能干细胞的形态学变化

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

2002-2006年日照市性病门诊就诊者资料分析

目的掌握日照市性传播疾病的流行状态，为制定有效的防治对策提供科学依据。方法对2002-2006年，到日照市皮肤病防治所性病门诊就诊者的资料进行分析。结果2002-2006年合计登记就诊者4716例，各年分别为566例、784例、1199例、1117例、1050例；男性占68．09％，女性占31．91％；20～29岁占41．39％，30～39岁占32、85％；工人占33．51％，无业者占20．00％，干部占19．49％。诊断为性病的2972例，占63。02％。其中，非淋菌性尿道炎占40．78％，尖锐湿疣占24．87％，梅毒占18．00％，淋病占16．32％，软下疳占0．03％。结论性病门诊就诊者主要是男性青壮年，性病病人主要是非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、梅毒和淋病。

基于转录组测序分析转化生长因子-β1诱导肾纤维化机制

目的:探究转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾纤维化的机制。方法:将TGF-β1处理和未处理的肾成纤维细胞NRK-49F进行转录组测序,采用DESeq2分析测序结果,以错误发现率低于0.05且log2FC绝对值大于1为标准筛选差异表达的基因,并对差异表达的基因进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。进一步筛选差异表达基因中编码转录因子的基因,并利用单侧输尿管梗阻诱导的小鼠肾纤维化模型和高通量基因表达数据库GSE104954数据集对这些基因在肾纤维化过程中的表达进行验证。结果:TGF-β1处理6、12和24 h后,分别有552、1209和1028个差异表达基因。GO分析表明,这些差异表达基因在发育、细胞死亡和细胞迁移过程中显著富集。KEGG分析显示,在TGF-β1诱导早期(TGF-β1处理6 h)主要表现为Hippo、TGF-β、Wnt信号通路的变化,而在TGF-β1诱导晚期(TGF-β1处理24 h)主要表现为细胞外基质受体相互作用、局灶黏附和黏附分子连接等相关通路的改变。在TGF-β1处理6 h时291个上调的差异表达基因中,Snai1、Irf8、Bhlhe40、Junb、Arid5a、Vdr、Lef1、Ahr、Foxo1、Myc、Tcf7、Foxc2、Glis1等13个基因编码转录因子。在细胞模型中验证发现,TGF-β1可以诱导其中9个编码转录因子基因(Snai1、Irf8、Bhlhe40、Junb、Arid5a、Vdr、Lef1、Myc、Tcf7)的表达,其余4个基因的表达水平在TGF-β1处理后无显著变化。在动物模型验证中发现,Snai1、Irf8、Bhlhe40、Junb、Arid5a、Myc和Tcf7显著上调,而Vdr显著下调,Lef1无显著变化。在GSE104954数据集中验证发现,IRF8在糖尿病肾病患者和IgA肾病患者的肾小管间质中显著高表达,MYC在糖尿病肾病患者中高表达,而其他7个基因的表达产物与对照组相似。结论:TGF-β1诱导肾成纤维细胞基因差异表达,Irf8和Myc可能是慢性肾脏病和肾纤维化的潜在靶点。

CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

肾盂输尿管连接部梗阻的影像学分析

目的：探讨肾孟输尿管连接部梗阻（PUJO）病因分析、X线、CT表现，提高影像检查对先天性PUJO的病因诊断的准确性。方法：采用排泄性静脉尿路造影（IVU），CT检查及其他相关检查诊断PUJO11例。结果：均能够显示梗阻的连接部形态特征及尿路积水情况。经手术治疗确认病理。结论：尿路造乡结合CT扫描是诊断PUJO常用且有效手段，对定性诊断及鉴别诊断具有重要意义。

P27^(Kip1)在乳腺癌中的表达及其意义

目的 研究乳腺癌组织的P2 7Kip1表达与乳腺癌生物学行为的关系及对患者预后的影响。方法 采用免疫组织化学方法 ,检测 5 1例乳腺浸润性导管癌组织P2 7Kip1表达水平 ,并对其与乳腺癌临床病理特征和术后生存时间的关系进行统计学分析。结果 本组 5 1例中 ,P2 7Kip1高表达者 18例 ,占 35 .3% ;低表达者 33例 ,占 6 4 .7%。P2 7Kip1表达水平与肿块大小、腋淋巴结有无转移、TNM分期、组织学分级、复发和转移及c erbB 2表达有关 ;单因素生存分析显示P2 7Kip1高表达组术后 5年生存率高于低表达组 ;Cox比例风险模型多因素分析提示P2 7Kip1表达水平是乳腺癌的独立预后指标。结论 P2 7Kip1表达水平与乳腺癌的发生、发展、预后密切相关 。

海南省临高和琼海县两种钩虫虫种比例的调查

1988年11月—1989年7月分别在海南省临高和琼海两县收集当地城镇居民和农民、渔民新鲜粪便,取粪样用试管滤纸法培养钩虫幼虫,经5—7d分离钩虫幼虫,鉴定虫种。共调查2137例,其中钩虫感染者1041例,其感染率为48.7％。

急性坏死性筋膜炎8例报告

急性坏死性筋膜炎,是一种临床上极为少见的坏死性外科感染,国内有文献可查者仅24例。1924年Meleney报道β-溶血性链球菌引起皮肤坏疽的病例,此后不少作者均有类似报道,但命名相当混乱,包括坏疽性丹毒、医院坏疽、急性皮肤坏疽等。

计量检测工作质量优化

计量检测作为测量工作的核心内容,并且也是作为一种相对复杂的社会经济活动,同时也和技术水平以及管理能力有着密不可分的关系。由于在计量检测内容的工作当中,会存在很多的影响因素,同时也会影响到检测的质量。主要分析影响计量检测的重要因素,并且提出如何对其进行优化的方式。

化工企业中的标准计量技术及管理

对于化工企业来说,化工企业的生产与经营离不开能源和资源的支持,因此为了能够进一步提高企业生产效率,降低能耗,加强企业的市场竞争能力,则必须要应用相应的计量技术,强化计量管理,对此,针对化工企业中标准计量技术及其管理进行分析,以期能够完善企业内部管理,提高企业生产效率,仅供参考。

节能降耗理念下化工能源计量仪表的应用及改造策略

为了提升化工企业自身的管理效率以及效果,需要保证能源计量工作的科学性以及准确性。文章提出在节能降耗理念下,化工企业需要重视对能源计量仪表的切实维护与更新,从而为企业自身的良好、持续发展提供可靠保障。

引流在胆囊切除术中的应用

目的:确定胆囊切除术中放置引流的重要性。方法:观察278例单纯胆囊切除术后引流液的量、性质及术后并发症。结果:51例24h最大引流量超过300mL,4例为胆汁性,引流量1000～2000mL,1例血性液约为500mL;术后并症5.4％,其中3例切口感染均发生在原切口引流,另戳孔引流无1例切口感染;瘘道形成4例,肺部感染2例。结论:术后放置引流有备无患,另戳孔胶管引流,早期拔管,术后鼓励患者咳嗽排痰可减少术后并发症。

论现金流量表相关信息的运用及财务分析

现金流量表是现代企业对外提供的三大主要会计报表之一。但由于该表的历史不长,人们对它的理论认识还不够系统,对其所提供相关信息的应用研究也很有限,影响了该表的编制质量和效率,限制了该表作用的发挥。鉴于此,对现金流量表信息应用进行研究,通过指标化现金流量信息使其便于决策者进行相关财务分析。