同种异体子宫内膜异位症大鼠模型用于GnRH激动剂类药物的药效评价研究

目的用同种异体移植的方法构建大鼠子宫内膜异位症模型,并评价促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)激动剂GenSci006对实验大鼠子宫内膜异位症模型的影响。方法取供体SPF级雌性SD大鼠的子宫内膜移植于受体雌性大鼠的腹腔壁上,构建同种异体的子宫内膜异位症模型。3周后,测量异位内膜的长、宽、高,计算给药前异位内膜的体积V1。将进行假手术操作的大鼠设为假手术组,将造模大鼠随机分为模型组、曲普瑞林组(0.25mg/kg)、GenSci006-1组(0.125mg/kg)和GenSci006-2组(0.25mg/kg)共4组,每组大鼠16只。各组大鼠单次给予相应的药物,假手术组和模型组给予同等体积的溶剂。3周后,再次测量异位内膜,计算给药后异位内膜的体积V2和抑制率;通过比较脏器系数及病理切片的变化,判断GenSci006对大鼠子宫和卵巢组织的影响;ELISA法测定血清中雌二醇(estradiol,E_(2))、孕酮(progesterone,P_(4))、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizinghormone,LH)水平的变化;实时荧光定量PCR法测定下丘脑和垂体中GnRH受体(GnRHreceptor,GnRHR)mRNA的表达水平。蛋白质印迹法检测异位内膜组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)α、ERβ和孕激素受体(progesterone receptor,PR)蛋白的表达。结果给药3周后发现,与模型组相比,曲普瑞林组和GenSci006-2组大鼠的体重显著增加(P<0.05),而异位内膜的体积显著减小(P<0.05)。与假手术组相比,模型组子宫、卵巢脏器系数及子宫内膜厚度无明显变化(P>0.05);与模型组相比,曲普瑞林组和GenSci006-2组子宫脏器系数及子宫内膜厚度显著降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组血清中E_(2)、P_(4)、FSH、LH水平无明显变化(P>0.05);与模型组相比,曲普瑞林组、GenSci006-1组和GenSci006-2组大鼠的卵巢脏器系数和血清P4水平均显著降低(P<0.05),而GenSci006-1组大鼠的血清LH水平明显升高(P<0.05),但各组血清E_(2)和FSH水平并无显著变化(P>0.05)。与模型组相比,曲普瑞林组和GenSci006-2组大鼠垂体GnRHRmRNA表达水平显著下调(P<0.05);各组大鼠下丘脑组织中GnRHRmRNA表达及异位内膜组织中ERα、ERβ、PR蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。结论大鼠同种异体子宫内膜异位症模型适宜作为筛选和评价子宫内膜异位症治疗药物的动物模型,而且异位内膜体积、抑制率、子宫及卵巢脏器系数、血清E_(2)水平均可作为检测药物疗效的指标。

鳖甲煎丸对复合因素致大鼠脂肪性肝纤维化的治疗作用

目的:观察鳖甲煎丸对脂肪性肝纤维化大鼠的治疗作用。方法:SD大鼠60只随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.25 mg/kg)阳性组以及鳖甲煎丸0.75、1.5、3.0 g/kg组,每组10只。皮下注射40%CCl4花生油1 mL/kg,同时以高脂饲料混合酒精灌胃8 w造模。从造模第4周分别给予对应药液,连续用药5 w后解剖,计算肝、脾脏器系数;HE染色观察各组大鼠肝脏纤维化和脂肪变性程度;Elisa测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)水平和透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)含量;免疫组化检测肝组织基质金属蛋白酶(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的表达。结果:复合因素可成功诱导大鼠脂肪性肝纤维化模型。鳖甲煎丸3 g/kg可显著降低大鼠肝脏器系数(P<0.05);HE染色显示,鳖甲煎丸0.75、3 g/kg组大鼠肝脏纤维化和脂肪变性均出现不同程度改善;鳖甲煎丸3.0 g/kg可显著降低模型大鼠血清ALT、AST和HA、LN、COLⅠ、COLⅢ含量(P<0.05),并显著抑制肝组织TIMP-1的高表达(P<0.05)。结论:鳖甲煎丸对复合因素所诱导的大鼠脂肪性肝纤维化有良好的治疗作用。

度他雄胺对大鼠附睾Claudin1和β-catenin表达的影响

目的：通过度他雄胺对大鼠附睾上皮连接关键蛋白Claudin1和β-catenin表达影响的研究,探讨度他雄胺抑制生育的可能分子机制,为男性不育治疗和男性避孕提供附睾靶点。方法：16只SD雄性大鼠（3月龄,250~300 g）,设度他雄胺40 mg/kg实验组和阴性对照组,每组8只,灌胃给药,1次/d,连续2周。给药结束后计算机辅助精子分析雄鼠精子活力及形态,计算交配雌鼠受孕率,ELISA法测定大鼠血清睾酮（T）和双氢睾酮（DHT）浓度,透射电镜分析附睾细胞紧密连接变化,RT-PCR分析实验组和对照组附睾上皮连接蛋白Claudin1和β-catenin基因表达变化;免疫组化和免疫印迹分析其蛋白表达变化。结果：度他雄胺可以显著抑制大鼠血清DHT浓度、精子活力和生育力,超微结构显示实验组附睾上皮细胞紧密连接出现空隙,附睾腔液体积增多。RT-PCR、免疫组化和免疫印迹显示度他雄胺可以显著下调Claudin1和β-catenin的表达。结论：度他雄胺可以显著抑制雄性大鼠生育,这可能与其降低大鼠血清DHT水平,进而抑制附睾上皮连接关键基因Claudin1和β-catenin表达和破坏附睾上皮紧密连接有关。

鬼臼毒素对大鼠附睾上皮细胞基因表达差异的影响

目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片段化后与芯片杂交,检测芯片并记录结果。结果鬼臼毒素组细胞与空白对照组相比,差异倍数在5倍以上的有137个基因,其中73个基因上调,64个基因下调;差异倍数在10倍以上的有40个,包括26个上调基因(U2SURP,DANJB7,ARHGAP15,TEMEM47,CCL3,MMP9,CSF3,IL23A,CXCL2,MMP13,CSF2,CXCL3,MMP10,CXCL5,SCIN,LOC500846,OLR540,PLA2G2A,CXC3CLL,IL1B,LOC363060,DCHS2,CCL20,RNASE10,LOC360228,TNF-A)和14个下调基因(RAB44,KRT5,ADAMTSL2,LOC685767,LOC688842,RGD1564513,POP1,KCNJ10,POLR3A,CNTROB,FAM109A,ORL578,COL1LA2,TAS2R71)。两组差异表达基因Pathway富集功能分析显示,显著上调基因主要涉及细胞因子受体间相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)、肿瘤坏死因子信号通路、NF-kappa B信号通路、趋化因子信号通路、凋亡通路及风湿性关节炎通路;显著下调基因主要涉及神经刺激性配体受体通路和嗅觉传到通路等。差异基因最集中的通路是细胞因子间相互作用及细胞凋亡。结论鬼臼毒素主要通过两条途径影响大鼠附睾上皮细胞生长,分别是诱导凋亡和引发炎症反应。

鬼臼毒素诱导离体大鼠附睾上皮细胞凋亡机制研究

目的探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin,PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态;RT-PCR技术研究TNF-αmRNA的变化;ELISA法检测鬼臼毒素对细胞培养上清液TNF-α水平的影响;Western blot法检测细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达水平。结果CCK-8结果显示,鬼臼毒素能明显抑制大鼠附睾上皮细胞增殖并诱导凋亡,并呈剂量及时间依赖性(P<0.05),24、48、72 h的半数抑制浓度(95%置信区间)分别为59.36(15.50~227.41)、0.37(0.080~1.70)、0.077(0.017~0.35)μmol·L^(-1);透射电镜下观察发现,鬼臼毒素引起附睾上皮细胞形态变圆,细胞核破碎,线粒体空泡化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,鬼臼毒素能升高TNF-αmRNA水平及细胞培养上清中TNF-α的含量;Western blot结果显示,鬼臼毒素能明显增加细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达。结论鬼臼毒素可通过线粒体调控的内源性通路和TNF受体介导的外源性通路,诱导大鼠附睾上皮细胞发生凋亡。

中药提取物治疗男性不育研究进展

男性不育症是男科常见病之一,近年来呈现不断上升趋势。目前,西医对男性不育症的治疗尚缺乏理想疗效,而中医药在治疗男性不育症方面发挥了一定的优势,获得了满意的疗效。本文就中药提取物治疗男性不育症作一综述:枸杞多糖可通过促进损伤细胞的增殖和上调生精细胞中SCF与c-kit表达来干预雷公藤多苷对生精细胞的损伤过程,从而保护雄性生殖功能。五味子多糖对环磷酰胺所致大鼠生精障碍具有明显的治疗作用,其可以使不育大鼠精子密度、精子活率升高,精子畸形率降低,血清FSH和LH水平降低,睾丸组织匀浆中T含量升高,差异均有统计学意义,且呈剂量依赖性,其机制可能与恢复下丘脑-垂体-性腺轴的调控功能有关。淫羊藿苷类成分和黄酮类成分都对男性不育症有疗效,其中淫羊藿苷对环磷酰胺诱导生精障碍的睾丸具有改善睾丸生精小管结构、减少生殖细胞凋亡、促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能。菟丝子黄酮能保护睾丸组织的曲精管、生精细胞、间质细胞,可以提高大鼠睾丸组织表皮生长因子(EGF)m RNA及蛋白表达,从而起到保护睾丸组织及生精功能的作用。

子宫内膜癌药物治疗研究进展

近年来,子宫内膜癌(EC)在世界范围内的发病率均有上升趋势。随着我国经济高速发展,人们生活习惯和饮食结构西化,肥胖人群增多,以及非正规激素替代治疗、多囊卵巢综合征、不孕和绝经延迟等高雌激素或长期雌激素刺激导致EC发病率明显上升,严重威胁女性健康。根据EC临床病理特征及其分子生物学特点,国际妇产科联合会(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)将其分为两型:其中Ⅰ型为雌激素依赖型,约占80%,该类患者的总体预后较好,10年生存率高达85%;Ⅱ型为非激素依赖型,预后相对较差。对于早期、高分化、雌激素依赖型的年轻(<40岁)且有生育需求的患者,以孕激素为主的保守治疗能够维持其生育功能,辅以助孕技术可获得一定的妊娠率。晚期EC对他莫昔芬联合甲羟孕酮的反应率达33%。而对于复发或转移EC,目前常用的有孕激素(反应率11%~56%),或他莫昔芬联合甲地孕酮、促性腺激素释放激素类似物(Gn RH-a,11%)、选择性雌激素受体调节剂(25%~31%)、芳香化酶抑制剂。随着对肿瘤分子机制和信号转导通路研究的深入,EC药物治疗的新策略转向靶向药物,但目前针对EC的靶向药物尚处于临床前研究阶段:m TOR的抑制剂依维莫司(everolimus)联合来曲唑的缓解率为32%;黄体生成激素释放激素(LH-RH)激动剂AEZS-108对LH-RH受体阳性的复发EC的Ⅲ期临床随机试验正在进行。另一项关于PARP的抑制剂BMN673针对复发EC的Ⅱ期临床试验也在进行中。结合靶向药物的高选择性和低毒性,临床应用前景乐观。

男性节育药物的研发进展

男性节育药物目前主要有激素和非激素两大类。激素类男性节育药主要通过服用外源性的激素抑制精子的发生，包括雄激素、雄激素与孕激素联合应用、雄激素与GnRH类似物联合应用等。非激素类男性节育药主要有干扰支持细胞功能的Adjudin，Gamendazole，睾丸“溴”结构域特异性蛋白（BRDT）抑制剂JQ1，CDB4022，顶体酶抑制剂以及视黄酸抑制剂等。本文就近几年男性节育药的研究进展作以下综述。

枸杞多糖对低雄激素不育模型大鼠影响的药效观察和作用机制研究

目的通过观察枸杞多糖对低雄激素不育大鼠生殖损伤的改善作用,评价枸杞多糖治疗低雄激素雄性不育的药效和可能的作用机制。方法将雄性成年SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、枸杞多糖低剂量和高剂量组,其中造模给药方式为灌胃给予度他雄胺40 mg/kg,1次/d,连续28 d;在造模的第15天开始枸杞多糖干预灌胃给药,高低剂量组分别给予枸杞多糖80 mg/kg和40 mg/kg,模型对照组给予等量溶媒,1次/d,连续14 d。给药结束时检测睾丸附睾组织学、超微结构、精子活力、交配雌鼠受孕率、血清雄激素水平、附睾雄激素受体(AR)和核转录因子(NF-κB)蛋白表达。结果与模型对照组比较,枸杞多糖高剂量组精子活率和前向运动率显著升高(P<0.05);枸杞多糖低剂量组和高剂量组交配雌鼠受孕率分别为37.5%和62.5%,较模型对照组分别上升25%和50%;模型对照组附睾可见附睾上皮连接出现断裂,管内精子聚集;枸杞多糖低剂量组大鼠附睾上皮结构和精子排列有一定的恢复,高剂量组附睾上皮组织和精子基本恢复正常;枸杞多糖给药组血清双氢睾酮(DHT)水平较模型对照组显著升高(P<0.05,P<0.01);枸杞多糖给药组AR和NF-κB蛋白表达较模型对照组显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论枸杞多糖可以改善低雄激素附睾不育大鼠的生育能力,其作用机制可能与升高血清DHT水平、促进AR和NF-κB表达、发挥雄激素样活性有关。

坤泰胶囊对去势大鼠和幼兔子宫影响的实验研究

目的考察坤泰胶囊对去势大鼠和幼兔子宫的影响。方法手术法摘除大鼠卵巢,给予不同剂量坤泰胶囊后,观察大鼠子宫及内膜的厚度的变化。蛋白印迹法检测各组大鼠子宫组织中血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞增殖核抗原(Ki-67)的表达情况。幼兔连续给予苯甲酸雌二醇6 d后,给予坤泰胶囊,取子宫进行病理切片观察,分析坤泰胶囊对幼兔子宫内膜的影响。结果与模型组相比,中、高剂量的坤泰胶囊能够显著性降低大鼠的子宫脏器系数及内膜厚度(P<0.05),高剂量的坤泰胶囊能够降低Ki-67的表达(P<0.05),坤泰胶囊低、中剂量组的VEGF表达明显升高(P<0.05)。坤泰胶囊对子宫组织中PCNA的表达无显著性影响。坤泰胶囊低、中剂量组的幼兔子宫腺体增多,Mcphail指数升高。结论坤泰胶囊对去势大鼠无雌激素样的活性,但能促进幼兔内膜的转化,呈现出较弱的孕激素活性。

祛膜颗粒在去势大鼠模型激素样活性的实验研究

目的初步研究祛膜颗粒在去势大鼠模型的激素样活性作用。方法制备去势大鼠动物模型,灌胃给予祛膜颗粒(5.5,11,22 g生药/kg)连续10 d后,观察各组大鼠阴道上皮角化细胞、子宫壁厚度、子宫水分摄取增加百分率的变化;采用化学发光法测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平;采用免疫组化法观察子宫雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的变化。结果祛膜颗粒能使去势大鼠阴道涂片出现角化细胞;祛膜颗粒(5.5,11 g生药/kg)子宫水分摄取增加百分率升高,其中祛膜颗粒(11 g生药/kg)明显升高(P<0.05);祛膜颗粒(5.5,11,22 g生药/kg)子宫壁厚度升高,其中祛膜颗粒(11 g生药/kg)明显升高(P<0.05)。祛膜颗粒(5.5和11 g生药/kg)能升高血清E2水平(P>0.05),祛膜颗粒(5.5,11和22 g生药/kg)能降低血清P水平(P>0.05);祛膜颗粒能增加子宫组织ER、PR的表达量。结论祛膜颗粒在一定剂量下可表现出较弱的雌激素样活性。

孕三烯酮胶囊多次给药在巴马小型猪体内的药代动力学研究

目的建立快速灵敏的HPLC-MS/MS法测定巴马小型猪血浆中孕三烯酮的浓度,并研究孕三烯酮胶囊在巴马小型猪体内的药代动力学特征。方法以巴马小型猪为实验动物,连续给药12周,每周给药2次,于给药后不同时间点采集血样。通过测定多次给药后小型猪血浆中孕三烯酮的浓度,计算其药代动力学参数。测定血浆样品以孕二烯酮为内标,经环己烷液液萃取后进行LC-MS/MS分析。质谱检测采用ESI正离子模式,选择检测离子反应对为m/z 309.2→241.1(孕三烯酮),m/z 311.2→109.1(孕二烯酮)。结果孕三烯酮在0.1~10 ng·m L-1浓度范围内线性良好(r=0.9999),定量下限为0.1 ng·m L-1。提取回收率均高于83.14%,日间、日内RSD均小于11.27%,专属性良好,在本实验涉及的条件下样品稳定。8只小型猪首次给药后Cmax为(2.85±0.96)μg·L-1,Tmax为(2.06±0.62)h,t1/2为(8.43±4.13)h,AUC(0-85)为(23.81±8.62)μg·L·h-1,AUC(0-∞)为(24.36±8.73)μg·L·h-1,MRT(0-85)为(8.40±2.44)h,MRT(0-∞)为(9.81±3.88)h;末次给药后Cmax为(2.70±0.55)μg·L-1,Tmax为(1.69±0.65)h,t1/2为(8.51±3.72)h,AUC-(0-85)为(17.71±4.89)μg·L·h1,AUC(0-∞)为(18.51±4.48)μg·L·h-1,MRT(0-85)为(8.54±3.50)h,MRT(0-∞)为(9.98±4.41)h。多次给予孕三烯酮胶囊后2 h血药浓度相差不大,且用药后无不良反应,安全性较高。结论该方法准确、快速、灵敏、专属性强,适用于动物实验及临床上测定血浆中孕三烯酮的浓度及其药代动力学研究。

连续重复给予含左炔诺孕酮紧急避孕药对雌性大鼠生育力及其子代健康的影响

目的探讨连续重复给予含左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)紧急避孕药(emergency contraception pills,ECPs)对雌性大鼠生育力及其F1代仔鼠健康的影响。方法成年SPF级雌性大鼠于每个动情周期连续给予3次LNG-ECPs,分别给予3个(P-3)、6个(P-6)和12个(P-12)动情周期。雌性大鼠每个给药时程下,采用Excel产生随机数按体质量分层随机分为2组,分别为LNG-ECPs组和溶媒对照组,分别灌胃给予0.12 mg/kg LNG-ECPs和等体积溶媒。各组于末次给药后4 h分别取1/2动物(12~18只)进行解剖(6~9只)和交配(6~9只);剩余1/2动物(12~18只)于停药恢复3个动情周期后再分别进行解剖(6~9只)和交配(6~9只),计算脏器系数。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测雌性大鼠血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(lutenizing hormone,LH)、雌激素、孕激素、睾酮、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)以及游离甲状腺激素3(free thyroid hormone,fT3)的水平。雌性大鼠卵巢组织切片苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后进行卵泡计数。记录LNG-ECPs给药结束和停药恢复期雌性大鼠妊娠率及窝仔数,测定F1代仔鼠生长指数以及主动和被动运动能力等指标。取P-12大鼠卵巢组织进行转录组学测序,建立LNG-ECPs致卵巢差异表达基因谱,分析LNG-ECPs致卵巢损伤的差异基因,并进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。结果①连续给予3个和6个动情周期后,LNG-ECPs组雌鼠的血清激素水平和生育力与溶媒对照组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);F1代仔鼠生长指数和行为学结果与溶媒对照组仔鼠相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。②连续给予12个动情周期后,与溶媒对照组相比,LNG-ECPs组大鼠血清中FSH[(0.21±0.17)U/L]、LH[(0.27±0.08)U/L]和孕激素[(0.68±0.23)μg/L]水平显著低于溶媒对照组[(1.00±0.82)U/L,P=0.043;(1.00±0.50)U/L,P=0.006;(1.00±0.20)μg/L,P=0.027],雌二醇[(2.24±1.03)μg/L]和睾酮[(1.25±0.25)μg/L]水平明显高于溶媒对照组[(1.00±0.35)μg/L,P=0.019;(1.00±0.07)μg/L,P=0.044];卵巢中原始卵泡数量(4.88±2.36)显著少于溶媒对照组(16.13±9.36,P=0.005),闭锁卵泡数量(24.38±5.01)显著高于溶媒对照组(19.13±2.30,P=0.018);LNG-ECPs组中F1代仔鼠负重游泳时间[(157.13±32.29)s]明显低于溶媒对照组[(198.06±40.01)s,P=0.003]。停药恢复3个动情周期后,LNG-ECPs可造成大鼠血清中FSH[(2.48±1.18)U/L]、LH[(1.60±0.41)U/L]、睾酮[(1.37±0.23)μg/L]及FSH/LH值(1.61±0.41)显著高于溶媒对照组[(1.00±0.67)U/L,P=0.024;(1.00±0.27)U/L,P=0.014;(1.00±0.18)μg/L,P=0.011;1.00±0.49,P=0.042],且雌激素水平[(0.49±0.15)μg/L]和AMH水平[(0.79±0.15)μg/L]显著低于溶媒对照组[(1.00±0.37)μg/L,P=0.011;(1.00±0.10)μg/L,P=0.016],同时,大鼠卵巢中原始卵泡数量(6.25±5.06)仍显著少于溶媒对照组(12.00±5.56,P=0.048);F1代仔鼠在旷场中的运动总距离[(89.85±36.98)m]以及负重游泳时长[(112.00±29.52)s]均显著低于溶媒对照组[(147.55±23.13)m,P<0.001;(137.69±25.85)s,P=0.014]。③转录组测序结果表明,与溶媒对照组相比,LNG-ECPs组雌性大鼠卵巢组织中存在Cd5、Cxcr1、Lexm、Fga、Mybphl和Gstm5等显著差异表达的基因,参与萜类骨架生物合成、卵巢类固醇生成和皮质醇的合成与分泌等类固醇激素合成相关过程,还涉及碳代谢、丁酸甲酯代谢和半胱氨酸等物质代谢过程,以及细胞因子-细胞因子受体相互作用、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等免疫调节过程。结论在雌性大鼠中,短期重复(<12个周期)给予LNG-ECPs对雌鼠生育力及其F1代仔鼠生长发育和行为学未见明显影响;而长期重复(12个周期)给予LNG-ECPs会导致卵巢功能损伤,并会对F1代仔鼠的健康产生负面影响,停药恢复3个动情周期后仍未见明显改善。

坤泰胶囊对大鼠实验性子宫异位内膜生长及其妊娠结局的影响

目的:研究坤泰胶囊(KTC)对SD大鼠实验性子宫异位内膜生长及其妊娠结局的影响。方法:手术法建立SD大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型。将造模成功的SD大鼠分为模型对照组、阳性对照组(每只给予醋酸亮丙瑞林0.1 mg皮下注射,共1次),KTC低剂量组(每只按0.24 g/kg体质量灌胃,qd×21 d)、KTC高剂量组(每只按0.60 g/kg体质量灌胃,qd×21 d),每组14只。给药21 d后,每组解剖8只,比较给药前、后异位内膜体积变化;Western blotting法测定异位内膜caspase-8、caspase-3和caspase-9蛋白表达。每组剩余6只与雄鼠交配,妊娠12 d后,解剖观察受孕情况,并对胎盘、胎仔称量。动情周期正常的SD大鼠14只作为空白对照。结果:与模型对照组相比,KTC低、高剂量组体质量无统计学差异(P>0.05);KTC低、高剂量组异位内膜抑制率分别为(40.25±35.18)%和(65.52±15.82)%;KTC低、高剂量组异位内膜中caspase-8、caspase-9和活化caspase-3明显升高(P<0.05);KTC低剂量组的大鼠胎仔数量呈增加趋势。结论:KTC通过升高caspase-8、caspase-9和活化caspase-3蛋白含量,促进异位内膜的凋亡;KTC低剂量组EMs大鼠受孕率呈现出升高的趋势。

新型青蒿素衍生物SM1052抗人子宫内膜癌RL95-2肿瘤活性研究

目的:研究一种新型青蒿素二聚体衍生物SM1052的体外、动物体内抗肿瘤活性及其作用机制。方法:采用体外培养的人子宫内膜癌(RL95-2)细胞株,以CCK-8法测定SM1052对RL95-2细胞增殖的影响;体内实验采用人子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤模型观察SM1052对RL95-2的生长抑制作用;流式细胞检定法(FCM)测定细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测SM1052对RL95-2细胞早期凋亡率的影响;Western blotting测定Bcl-2,Bax蛋白表达变化。结果:SM1052能显著抑制RL95-2细胞增殖,50μmol·L-1细胞存活率为(13.83±0.43)%;SM1052(10 mg·kg-1)对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用;SM1052(50μmol·L-1)能诱导细胞引发G2/M期阻滞;能诱导细胞发生凋亡,且以早期凋亡为主;能显著上调Bax、下调Bcl-2蛋白的表达。结论:SM1052在体外、动物体内具有较高的抗人子宫内膜癌(RL95-2)的活性,其作用机制可能通过诱导细胞周期阻滞和调节凋亡蛋白Bcl-2,Bax表达水平相关。

宁泌泰胶囊对间质性膀胱炎大鼠炎性因子表达和激素水平的影响

目的:观察宁泌泰胶囊对雌性大鼠间质性膀胱炎的改善作用,结合组织炎性因子表达和血清激素水平的变化,探讨宁泌泰治疗间质性膀胱炎的作用和可能的机制。方法:将40只成年雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组、宁泌泰低剂量组和宁泌泰高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余3组大鼠均采用硫酸鱼精蛋白膀胱灌注的方法进行间质性膀胱炎造模,于造模第16天起,宁泌泰低剂量组和高剂量组分别给予0.4 g·kg^(-1)·d^(-1)和1.0 g·kg^(-1)·d^(-1)宁泌泰悬液,模型组给予等量溶媒灌胃,连续14 d。对空白对照组不作干预。干预结束后观察各组大鼠膀胱壁形态学和炎性变化;电镜超微结构观察肥大细胞数量及脱颗粒变化;ELISA方法检测血清雌二醇(E_2)和孕酮(P)水平和局部膀胱组织IL-1α、IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠膀胱壁增厚粗糙、不均一,血管变粗,并有少许炎性液体渗出,颜色变暗;宁泌泰高剂量和低剂量组较模型组膀胱壁均有不同程度恢复,且呈剂量依赖性。组织学和超微结构显示,宁泌泰高剂量和低剂量组较模型组炎性和肥大细胞数量减少,同时肥大细胞脱颗粒化亦相应减弱;宁泌泰高剂量组较模型组血清E_2水平明显下降(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组膀胱组织的IL-6和TNF-α水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,宁泌泰高剂量组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均明显下降(P<0.05,P<0.01),宁泌泰低剂量组TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结论:宁泌泰胶囊对雌性大鼠间质性膀胱炎有明显改善作用,其作用机制可能与下调膀胱组织炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和血清E_2水平有关。

男性节育药物的研发进展

男性节育药物主要有激素和非激素两大类。激素类男性节育药主要通过服用外源性的激素抑制精子的发生,包括雄激素、雄激素与孕激素联合应用、雄激素与GnRH类似物联合应用等。非激素类男性节育药种类较多且处于不同的研发阶段。首先是干扰支持细胞功能的Adjudin,Gamendazole,CDB4022;其次为睾丸"溴"结构域特异性蛋白(BRDT)抑制剂JQ1;最后是顶体酶抑制剂KF-950及棉酚,以及视黄酸抑制剂等。本文就近几年男性节育药的研究进展作一综述。

孕三烯酮胶囊多次给药在巴马小型猪体内的药代动力学研究

目的:建立快速灵敏的HPLC-MS/MS法测定巴马小型猪血浆中孕三烯酮的浓度,并研究孕三烯酮胶囊在巴马小型猪体内的药代动力学特征。方法:以巴马小型猪为实验动物,连续给药12周,每周给药2次,于给药后不同时间点采集血样。通过测定多次给药后小型猪血浆中孕三烯酮的浓度,计算其药代动力学参数。测定血浆样品以孕二烯酮为内标,经环己烷液液萃取后进行LC-MS/MS分析。色谱柱:Agilent ZORBAX Extend-C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm);流动相:水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;流速:0.40 m L·min^(-1);进样量:20μL;柱温:35℃。质谱检测采用ESI正离子模式,扫描方式为多重反应监测(MRM)模式,选择检测离子反应对为m/z 309.2→241.1(孕三烯酮),m/z 311.2→109.1(孕二烯酮)。结果:孕三烯酮在0.1~10 ng·mL^(-1)浓度范围内线性良好(r=0.999 9),定量下限为0.1 ng·mL^(-1)。提取回收率均高于83.1%,日间、日内RSD均小于11.3%,专属性良好,在本实验涉及的条件下样品稳定。8只小型猪首次给药后C_(max)为(2.85±0.96)μg·L^(-1),T_(max)为(2.06±0.62)h,t_(1/2)为(8.43±4.13)h,AUC_(0-85)为(23.81±8.62)μg·L·h^(-1),AUC_(0-∞)为(24.36±8.73)μg·L·h^(-1),MRT_(0-85)为(8.40±2.44)h,MRT_(0-∞)为(9.81±3.88)h;末次给药后C_(max)为(2.70±0.55)μg·L^(-1),T_(max)为(1.69±0.65)h,t_(1/2)为(8.51±3.72)h,AUC_(0-85)为(17.71±4.89)μg·L·h^(-1),AUC_(0-∞)为(18.51±4.48)μg·L·h^(-1),MRT_(0-85)为(8.54±3.50)h,MRT_(0-∞)为(9.98±4.41)h。结论:该方法准确、快速、灵敏,专属性强,适用于动物实验及临床上测定血浆中孕三烯酮的浓度及其药代动力学研究。多次给予孕三烯酮胶囊后2 h血药浓度相差不大,且用药后无不良反应,安全性较高。