Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别

构建了昆虫病原线虫共生菌XenorhabdusnematophilusBP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到 2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度 ,根据已发表的共生菌毒素基因序列资料设计了 7对引物对这两个克隆进行PCR扩增并对扩增产物进行测序和分析。从毒力较强的cos83中 ,7对引物均扩增出与目标片段大小一致的产物 ,而从cos76中只有 5对扩增到目标片段。测序结果显示 ,cos76的 5个PCR扩增产物与cos83的对应扩增产物DAN序列同源性为 10 0 %。以cos83的 7个PCR扩增产物所编码氨基酸序列进行BLAST分析 ,它们与X .nematophilusPMF12 96和PhotorhabdusluminencencW14毒素相应区间的平均同源性分别为 94%和 5 8% ,说明cos83毒素是共生菌口服毒素家族的一员但与同类的其它毒素有一定的差异 ,值得对其杀虫谱 ,作用机理等进行进一步的研究。

苏云金芽孢杆菌B-Pr-88菌株中cry2Ab4基因的表达和杀虫活性研究

以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的70.7kD蛋白,氨基酸同源性与已公布的cry2Ab基因同源性均为99.8%,经Bt基因国际命名委员会正式命名为cry2Ab4。根据cry2Ab4基因开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,PCR扩增获得cry2Ab4完整ORF,与大肠杆菌表达载体pET-21b连接,构建了重组表达质粒pET-2Ab4,质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实该基因表达了60kD的蛋白,生物测定表明,Cry2Ab4对棉铃虫和大豆食心虫具有高毒力,同时对小菜蛾和二化螟有一定的杀虫活性,而对亚洲玉米螟和甜菜夜蛾没有杀虫活性。

稀土贮氢合金 RE(NiCoMnAl)_5 的相结构与电容量关系

研究了ＡＢ５型稀土贮氢合金ＲＥ（ＮｉＣｏＭｎＡｌ）５在Ａ侧组分改变下的相结构与电化学性能之间的关系。结果表明：在Ａ侧Ｎｄ（或Ｐｒ）＝０．２时Ｌａ０．８ＲＥ０．２（ＮｉＣｏＭｎＡｌ）５合金的放电容量达最高值（３２０ｍＡｈ／ｇ）；Ｌａ１－ｘＮｄｘ（ＮｉＣｏＭｎＡｌ）５合金的晶胞体积随组分ｘ呈线性减小，少量的Ｎｄ替换对放电容量有良好的影响；退火处理改善了合金的放电容量，但起始活化较慢，可能与表面氧化物的生成有关；快凝条件下晶体织构生长及一次枝晶细化，因而有利于电化学综合性能的提高。

嗜线虫致病杆菌HB310菌株杀虫蛋白的纯化及活性鉴定

嗜线虫致病杆菌XenorhabdusnematophilaHB310是从河北省土壤中筛选出的一株昆虫病原线虫体内分离纯化获得的共生菌,该菌的发酵液对多种昆虫有较高的杀虫活性。利用85%饱和度的硫酸铵盐析分别获得胞内蛋白提取物和上清液中胞外蛋白提取物,生测结果表明这两种蛋白提取物中都含有胃毒素和血腔毒素。通过制备型非变性凝胶电泳对蛋白提取物进行分离和纯化,得到了3种有杀虫活性的毒素蛋白(毒素Ⅰ、毒素Ⅱ和毒素Ⅲ),胞内的毒素蛋白与分泌到胞外上清液中的毒素蛋白是同种蛋白。毒素Ⅰ和毒素Ⅱ对棉铃虫初孵幼虫有明显的胃毒活性,但没有血腔毒性;毒素Ⅲ对大蜡螟幼虫有很强的血腔毒性,LD50为0.18μg头。SDS_PAGE图谱显示毒素Ⅰ和毒素Ⅱ是由多个多肽组成的复合蛋白,而毒素Ⅲ只分离出一条多肽。毒素Ⅱ在50℃处理10min,其杀虫活性没有显著变化;70℃处理10min对毒素Ⅲ杀虫活性没有显著影响。

大豆蚜的研究进展

大豆蚜是我国大豆的一种主要害虫,近几年来,大豆蚜已先后侵入美国、加拿大和澳大利亚等大豆种植区,成为世界性的重要农业害虫。本文综述了大豆蚜翅蚜分化、寄主适应性、嗅觉的进化、取食行为、大豆抗性、天敌及防治方法等方面的研究进展。

氢氧化镍电极材料微结构特性的分析方法

根据Ｘ射线衍射（ＸＲＤ）分析、拉曼散射谱（ＲａｍａｎＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）和电子显微术等方法，结合我们的研究实践，探讨了ＭＨ－Ｎｉ电池用氢氧化镍电极材料微结构特性及其分析研究方法。高性能氢氧化镍粉末粒子是由许多带微孔的微晶组成的，其Ｘ射线衍射谱线呈各向异性宽化特征，由ＸＲＤ确定的微晶结构参数，可以用于建立氢氧化镍正极活性物质的利用率与这些微结构参数之间的关系。拉曼谱是迄今用于分析镍电极材料微细结构的最灵敏和最有效的方法之一，而电子显微术可以直接、有效地表征这些镍电极颗粒的微结构特征。ＸＲＤ和Ｒａｍａｎ谱可以有效地用于预测氢氧化镍电极的电化学效率。

营养和湿度对华北大黑鳃金龟生长发育和生殖的影响

以华北大黑鳃金龟为对象,研究了营养和湿度对其发育和生殖的影响。在室内条件下,以不同饲料饲养成虫,取食榆树叶的华北大黑鳃金龟产卵量最高,为107.1粒/头,其次是毛白杨叶,而取食玉米叶和刺槐叶的产卵量最低。在马铃薯块、甘薯块和花生米三种饲料中幼虫最嗜取食马铃薯块,且存活率最高,幼虫重量显著高于取食甘薯块和花生米的幼虫重量。土壤湿度对卵发育影响较大,土壤湿度为18%时,卵的孵化率最高为75.6%,过干过湿都不利于卵的孵化。以含有15.7 mg/cm^2水的滤纸在暗处培育卵,孵化率可达77.7%,这种卵的孵育方法操作简便,减少了土壤中病原微生物和土壤颗粒对卵的侵染及损伤。土壤湿度为15%-18%时最有利于幼虫的生长发育,高于或低于这一湿度,幼虫的死亡率均增加。饲养中发现,幼虫在低龄阶段死亡率最高,尤其在初孵幼虫生长发育的前30 d内,这可能与低龄幼虫体壁较薄,抵抗过干过湿以及物理损伤的能力较差有关。

Na_2WO_4-WO_3-ZnO体系熔盐镀钨

对Na2 WO4 WO3 ZnO体系熔盐镀钨工艺进行了详细研究 ,得到了获得金属钨镀层的工艺条件。结果表明 :在空气气氛中 ,当氧化钨的浓度为 1 5%～ 30 %时 ,于 850～ 950℃能得到金属钨镀层且镀层表面平整 ;当其它条件都相同时 ,在铜基体上获得钨镀层比钼基体上所需的温度略高一些 ;扫描电镜照片显示钨镀层与钼基体之间有明显分界面 ,元素线扫描结果证实镀层与钼基体间扩散层厚度仅为 2 .5μm ,基本不形成扩散层 ;不同电流密度下所获得的钨镀层X射线衍射表明镀层中存在织构。

熔盐电解直接制备钛镍合金的研究

研究了利用熔盐电解法从金属氧化物中直接电解制备钛镍合金的可行性。在熔融CaCl2体系中,以二氧化钛和氧化镍的混合物为阴极,石墨为阳极,在电解温度900～1000℃,槽电压2.6～3.1V条件下进行电解,采用SEM,EDS,XRD等方法对电解还原产物进行了分析,结果表明二氧化钛和氧化镍被电解还原为钛镍合金,组成符合设计配比,并且沿直径方向合金成分均匀。

DGGE/TGGE技术在土壤微生物分子生态学研究中的应用

传统的微生物生态学研究方法只限于环境样品中极少部分(0.1%￣1%)可培养的微生物类群,极大程度地限制了对土壤微生物群落结构的研究。综述了以16S rDNA为主要研究对象的DGGE/TGGE(Denaturing gradientgel electrophoresis,DGGE/Temperature gradient gel electrophoresis,TGGE)技术原理,以其为主要手段结合PCR扩增、克隆建库、序列测定以及种系分析对土壤微生物的群落结构和多样性研究的最新动态。DGGE/TGGE技术极大地推动了土壤微生物分子生态学的发展,同时也为实际问题的诊断、作物生长跟踪监测等提供了技术支撑,在土壤微生物分子生态学研究和生产实践中起着越来越重要的作用。

稀土贮氢合金的相结构研究

根据合金化原理，从合金相结构的角度，探讨合金优化时相结构对电极性能如放电容量和循环寿命等方面的影响。具有ｈＰ６－ＣａＣｕ５型结构的单相ＬａＮｉ５存在一个大的均相区，并为吸氢提供大量的四面体和八面体间隙位置。快凝下非化学计量ＡＢ５＋ｘ贮氢合金，由于过剩Ｂ原子的插入而产生各向异性变形晶体点阵也即ａ轴减小ｃ轴增加。经退火后变形晶体点阵得以弛予形成双相合金。面心立方ＮｉＣＯ３和六方的ＭｏＣＯ３相有利于电极综合性能的提高。对于富稀土混合稀土贮氢合金，ＭｍＮｉ（Ｍｍ：混合稀土）相在晶界择优沉淀，抗氧化能力降低；而贫稀土的合金ＡｌＮｉ３在晶界择优沉淀，大大地降低放电容量和循环寿命。原位Ｘ射线衍射方法是研究气相吸放氢等温过程及原位相结构点阵膨胀的有效方法。

热处理对La_(0.9)Nd_(0.1)(NiCoMnAl)_5电极性能的影响

研究了热处理对Ｌａ０．９Ｎｄ０．１（ＮｉＣｏＭｎＡｌ）５电极材料结构、成分、脱氢压力－组成等温曲线（ＰＣＴ）、循环寿命的影响。Ｘ射线衍射结果表明热处理降低了评价主相峰的半高宽（ＦＷＨＭ）平均值，即降低了晶格应力。采用ＪＳＭ－８４０能谱分析仪对热处理前后合金成分进行分析，发现热处理使得合金中的Ｌａ、Ｍｎ向晶内扩散，而Ｎｉ、Ｃｏ、Ａｌ却向晶界偏聚。测定了室温下热处理前后的合金脱氢ＰＣＴ曲线及其电极循环寿命曲线，结果表明热处理使电极放电容量有所降低，同时却又使电极循环寿命有所提高，并且还降低了合金平衡压。

新型低温铝电解质体系的研究——氧化铝的溶解度与溶解速度

分别测定不同温度下粉末状α－Ａｌ２Ｏ３在Ｎａ３ＡｌＦ６－ＡｌＦ３（摩尔比１∶１）Ｋ３ＡｌＦ６－ＡｌＦ３（摩尔比１：１）及Ｎａ３ＡｌＦ６－Ｋ３ＡｌＦ６－ＡｌＦ３（摩尔比０．５：０．５：１）熔盐体系中的溶解度和溶解速度。探讨和分析了ＬｉＦ对Ｎａ３ＡｌＦ６－Ｋ３ＡｌＦ６－ＡｌＦ３熔体（摩尔比０．５：０．５：１）中氧化铝溶解度的影响。结果表明氧化铝在低温钾冰晶石体系Ｎａ３ＡｌＦ６－Ｋ３ＡｌＦ６－ＡｌＦ３（摩尔比０．５：０．５：１）中的溶解度和溶解速度能够满足低温电解的要求。

鞘翅目害虫-华北大黑鳃金龟围食膜结构的初步研究

应用光学显微镜和生化技术，研究了华北大黑鳃金龟（Holotrichia oblita）围食膜的基本结构和表面形态，初步分析了围食膜蛋白质的种类，蛋白质和糖的含量，测定了棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白对围食膜结构的影响。结果表明，华北大黑鳃金龟围食膜表面平滑致密，富有弹性，但与多数昆虫围食膜相比韧性较差，主要由蛋白质、糖和几丁质组成，其中蛋白质的含量约为36．25％，糖的含量约为8．91％，其他为几丁质等；经SDS—PAGE测定，围食膜的蛋白质种类较多，有28条多肽比较清晰，分子量多在17．6—320．3kDa。棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白不能降解华北大黑鳃金龟围食膜中的蛋白质。

两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应

昆虫细胞系的建立在病毒学和昆虫学等领域的研究和应用中发挥着重要的作用。本研究由棉铃虫Helicoverpa armigera胚胎组织建立了两株细胞系,分别命名为QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5,在含10%胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代60余代。两株细胞系均以圆形和短梭形细胞为主。DAF鉴定结果表明,两株细胞系均来源于棉铃虫胚胎,其扩增谱带与其他几种昆虫细胞系明显不同;QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5的第30代细胞群体倍增时间分别为63.7h和66.9h。两株细胞系均能被棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)感染,4d的感染率分别为86.6%和56.5%,对甘蓝夜蛾Mamestra brassicae核型多角体病毒(MbNPV)7d的感染率均为15%左右,但对苜蓿银纹夜蛾Autographacalifornica核型多角体病毒(AcMNPV)侵染的反应不同。DAPI染色和基因组DNA电泳结果表明,AcMNPV可诱导QB-Ha-E-5细胞发生凋亡,极少数细胞内可形成多角体,但不能诱导QB-Ha-E-1细胞发生凋亡,其感染率为55.3%;两株细胞系均可被1.25μg/mL的放线菌素D诱导发生凋亡。两株细胞系具有相同的遗传背景,但对AcMNPV侵染的反应不同,可作为昆虫病毒和细胞之间相互关系以及细胞凋亡机制研究的理想材料。

微包覆铜贮氢合金电极的研究

对比研究了表面微包覆铜与未包覆的AB_5型混合稀土贮氢合金电极的电性能.实验结果表明,表面微包覆铜贮氢电极在放电容量、高倍率放电、自放电和循环寿命性能方面均有明显改进.化学镀铜微包覆处理的操作工艺简便,费用低廉.

发光杆菌Photorhabdus sp.HBgy13菌株对4种蔬菜病原菌的抑菌活性

测定了发光杆菌属Photorhabdussp.HBgy13菌株对番茄菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum),冬瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、萝卜褐腐病菌(Rhizoctoniasolani)、黄瓜灰霉病菌(Botrytiscinerea)等4种蔬菜病原真菌的抑制作用,并对该菌株发酵液中抑菌活性成分的理化特性及滤液活性进行了研究。结果表明:该菌株对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌有较好的抑制作用;该菌株在200r/min,28℃,96h发酵后,抑菌活性达到最大,抑菌圈分别达到2 28cm和2 74cm;发酵液经50℃处理10min后,对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌抑制活性分别下降34 2%、43 7%,经80℃处理10min后,对这2种病菌的抑菌活性消失,说明发酵液中的抑菌活性成分不耐高温;发酵液经紫外线处理30min后抑菌活性完全消失;发酵液pH值为7时,抑菌活性最强。滤液对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌的抑制活性分别为原液的33 0%和33 2%。

甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫剂的制备及田间防治试验

应用活体增殖病毒 ,制备甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫剂乳剂 ,室内对 4龄甘蓝夜蛾幼虫的毒力测定 ,其LD50 为 9 4 2× 1 0 3 PIB/头。田间防治效果表明 ,采用 1 0× 1 0 11PIB/hm2 和 3 0× 1 0 11PIB/hm2 的剂量防治甘蓝夜蛾的效果都在 70 %以上。乳液的稳定性较好 。

甜菜夜蛾肠粘蛋白cDNA基因的分子克隆与序列分析

【目的】围食膜(peritrophic membrane,PM)是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,它能够促进食物消化,保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白(ⅡM)是其重要组分之一。因此,作为中肠防御系统的PM已成为害虫生物防治的新靶标。分离和鉴定甜菜夜蛾肠粘蛋白基因cDNA。【方法】以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)中肠为材料,依据stratagene公司试剂盒方法,构建甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库。依据现代免疫学原理,利用粉纹夜蛾肠粘蛋白特异性多克隆抗体(anti-ⅡMantiserum)筛选该文库。【结果】cDNA表达文库滴度为8.51×106pfu/ml,重组率为99.97%。筛选文库得到一个编码甜菜夜蛾肠粘蛋白的cDNA克隆SeⅡM-8。核酸序列分析显示,该cDNA长为2234bp,在polyA末端上游24bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AAATTA。最长读码框(ORF)编码714个氨基酸,与粘虫肠粘蛋白(Mamestra configurata intestinal mucin)序列相似性为42%。结构域分析表明,它具有5个几丁质结合功能域;一个富含苏氨酸类粘蛋白结构域,重复序列为TTTQAPTTT,高度O-联糖基化;一个天冬氨酸富集区,序列DDDKPGCNGNCPE重复达12次,该区域在已知的昆虫肠粘蛋白中属首次发现。与已知肠粘蛋白比较,推测其5′端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。SeⅡM-8基因在GenBank登录号为EU047712。【结论】从本研究构建的高质量甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库中筛选得到一个新的围食膜蛋白基因SeⅡM-8。

八字地老虎血球细胞系的建立

由八字地老虎Xestiac nigrum血细胞建立了一株细胞系 ,命名为NEAU Xc 96 0 716H ,原代培养 90余天 ,现已传至 70余代。细胞多为圆形 ,部分梭形 ,细胞群体倍增时间约为 6 3h。具有典型的鳞翅目昆虫染色体特征 ,数量多 ,形态为短杆状和球形。酯酶同工酶谱为 5条主带 ,与同种昆虫 (八字地老虎 )的胚胎细胞系 (NEAU Xc 730E)酯酶图谱稍有不同 ,而与草地夜蛾细胞系 (IPLB SF 2 1)的酯酶图谱完全不同。该细胞系可以被八字地老虎核型多角体病毒XcNPV感染 ,但感染率较低。