sifA基因缺失沙门菌增强巨噬细胞炎性体活化研究

利用λRed重组系统敲除鼠伤寒沙门菌SL1344的sifA基因以获取△sifA沙门菌。无菌分离培养小鼠骨髓来源巨噬细胞,分别用SL1344沙门菌及△sifA沙门菌刺激细胞,Western blot、ELISA及LDH释放检测方法检测IL-1β分泌,caspase-1表达及LDH的释放。结果表明,△sifA沙门菌促进IL-1β分泌、caspase-1表达增强、LDH释放量增多,即△sifA沙门菌增强炎性体活化。

MKK3抑制巨噬细胞炎性体活化

为了探究MKK3对小鼠巨噬细胞炎性体活化过程中的调控作用,无菌分离培养野生型与MKK3基因缺失小鼠原代腹腔来源巨噬细胞,以LPS联合ATP经典方法诱导炎性体活化,并分别采用Western blot和ELISA的方法分析检测Caspase-1的活化、ASC的表达以及细胞因子IL-1β和TNF-α的分泌量。结果表明,与野生型小鼠巨噬细胞处理组比较,巨噬细胞缺失MKK3基因Caspase-1活化显著,ASC表达增加,IL-1β分泌也显著增加,而TNF-α分泌量差异不显著。即MKK3抑制小鼠巨噬细胞炎性体活化,对小鼠巨噬细胞炎性体活化具有负调控作用。