动物园禽源奇异变形杆菌对第三代头孢菌素的耐药分子机制

为研究观赏禽类中分离的奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)对第三代头孢菌素的耐药机制,于2019年从河南省某动物园禽类养殖区绿孔雀(Pavo muticus)、红绿金刚鹦鹉(Ara chloroptera)、火鸡(Meleagris gallopavo)、帽子鸡(polish chicken)和非洲鸵鸟(Struthio camelus)5种观赏禽类中分离17株奇异变形杆菌,经药物敏感性试验、blaCTX-M基因检测、全基因组测序、PFGE和RT-qPCR等探明受试菌对第三代头孢菌素的耐药机制。结果发现:共有6株受试菌对第三代头孢菌素耐药,除1株(6D)携带超广谱β-内酰胺酶blaCTX-M-14和1株(106A)携带AmpC酶blaACT-16外,其余4株经PFGE检测证实为同一克隆型,且细菌体内双组分信号转导系统CpxAR、BaeSR和EnvZ/OmpR的表达量显著高于敏感菌,主要通过抑制耐药菌细胞膜上OmpC和OmpF的表达减少药物吸收,同时促进OmpW表达加速药物外排,从而减少菌体内药物浓度,进而导致其对第三代头孢菌素类耐药。研究表明,动物园禽类养殖区的奇异变形杆菌对第三代头孢菌素的耐药机制复杂多样,散播机制主要为染色体介导的克隆传播,应引起重视。

某市动物园散养禽类革兰阴性分离菌的耐药性及分子特征

目的通过检测某市动物园禽类散养场中分离革兰阴性菌对常见抗菌药物的耐药特性,以了解动物园禽类散养场在人禽耐药菌传播过程中的作用,并为进一步防控耐药菌散播提供参考依据。方法将采集到的42份禽源样品进行常规细菌分离纯化,对革兰染色确定为阴性菌的受试菌采用16S rRNA进行细菌鉴定,微量肉汤稀释法进行药敏试验,PCR扩增和测序比对确定耐药基因。结果在42份禽源样品中分离获得72株革兰阴性菌,其中肠杆菌有68株,占94.4%。主要病原菌依次为大肠埃希菌(33/72,45.8%)、奇异变形杆菌(14/72,19.4%)、肺炎克雷伯菌(8/72,11.1%)。受试菌对阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、多西环素和恩诺沙星耐药严重,对头孢噻肟和氟苯尼考较耐药,对阿米卡星和黏菌素高度敏感。有8株大肠埃希菌、1株奇异变形杆菌和两株肺炎克雷伯菌检出bla_(CTX-M)基因,两株大肠埃希菌LYS3BA、LYS12A检出mcr-1,1株不动杆菌LYS68A和1株单胞菌LYS68C检出tet(X)。结论受检动物园禽类散养场中检出的革兰阴性菌耐药较为严重,可能在人禽耐药肠杆菌的传播过程中发挥重要的桥梁作用,应引起重视。

bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌中mcr-1的分子流行病学分析

检测了不同时期从河南省分离的162株bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药性,进行了耐药基因bla_(CTX-M)和mcr-1的质粒接合试验,并比较了各亚型的水平传播规律。结果表明:随着时间的推移,bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药率由0%显著增加到42.2%;在头孢噻肟单药筛选下获得的21株接合子有5株同时携带mcr-1,在黏菌素单药筛选下获得的18株接合子有11株同时携带bla_(CTX-M),且bla_(CTX-M)和mcr-1基因的接合频率无明显差异;原菌及对应接合子的bla_(CTX-M)亚型均属于bla_(CTX-M-1)和bla_(CTX-M-9)亚群,部分原菌同时携带两种亚型,但接合子均仅携带一种亚型(bla_(CTX-M-9)亚群)。说明在单一药物(黏菌素或头孢噻肟)的选择性压力下,bla_(CTX-M)和mcr-1基因均易水平传播,且携带bla_(CTX-M)和mcr-1的质粒既可单独转移也可同时转移。

1株同时携带tet(X6)和tet(X3)的禽源印地不动杆菌比较基因组学分析

为了研究动物园禽类散养场分离菌对替加环素敏感性及其耐药机制,2019年从某市动物园禽类散养场采集的1只健康珍珠鸡粪便样品中分离获得分离菌,通过常规细菌分离纯化、革兰染色镜检和全自动细菌鉴定仪鉴定,以及序列比对确定该菌株为印地不动杆菌(LYS68A)。采用微量肉汤稀释法测定菌株对8种抗菌药物的敏感性,并通过全基因组测序和比较基因组学分析该菌株的耐药特征。药敏试验及PCR检测发现,尽管该菌株对多西环素和替加环素高度敏感,但却携带对替加环素耐药的tet(X3)基因。进一步全基因组测序发现菌株LYS68A未携带耐药质粒,其染色体上共携带tet(X3)、tet(X6)、floR、sul1、aadA2、dfrA12、aph(3’)-I、mphE和sul2等9个耐药基因,构成了一个29252 bp的多重耐药区并以一个整体插入到基因组tRNA-Gly的上游。耐药基因tet(X6)的基因环境(hp-tet(X6)-α/βhydrolase-GMP synthase)与2020年在1株奇异变形杆菌中发现的tet(X6)的基因环境同源性高达99%,推测其是通过ISVsa3和假定蛋白(hp)之间的热点区域(TCTTCC)经同源重组获得。耐药基因tet(X3)的基因环境与质粒p34AB(MK134375)中tet(X3)的上、下游序列高度相似,主要区别是前者仅一侧含有ISVsa3,而另一侧的插入序列在同源重组后缺失,结果导致tet(X3)失去独立在菌属间水平传播能力。本试验首次在1株替加环素敏感的禽源印地不动杆菌菌株LYS68A的染色体上同时检出tet(X6)和tet(X3)基因,且两种tet(X)的变异体主要通过菌属间的同源重组获得。

原创绘本融入幼儿园民间艺术教育的实践研究--以大班主题活动“蜡染”为例

中华优秀传统文化代表着中华民族独特的精神标识,是中华民族的"根"和"魂"。传统民间艺术作为传统文化重要的组成部分和重要载体,是承载民族记忆的文化基因,是国家重要的文化遗产,是理解传统文化的重要途径和窗口。《3—6岁儿童学习与发展指南》明确指出.

mgrB和mcr-1在耐多黏菌素猪大肠杆菌中的作用

大肠杆菌mgrB变异和携带mcr基因是其对多黏菌素耐药的重要机制,威胁着多黏菌素的临床应用。为了比较mgrB和mcr在猪源大肠杆菌中对多黏菌素耐药的影响,本试验收集165株猪源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定菌株对多黏菌素敏感性,并对耐药菌的mcr-1~mcr-5以及mgrB进行检测及测序比对分析。结果显示,165株猪大肠杆菌中有147株对多黏菌素耐药(MIC≥4 mg/L),耐药率为89.1%(147/165),147株耐药菌中均未检出mcr-2~mcr-5基因,且仅有1株(EPF25)不含mcr基因。mgrB基因经PCR检测并测序比对后发现mgrB启动子区变异的有104株菌,mgrB编码区氨基酸变异的有11株,在147株耐药菌中占78.2%(115/147)。结果表明比较多黏菌素对受试菌的MIC值及耐药菌mcr-1、mgrB基因变异之间的关系发现相关性不明显,猪大肠杆菌对多黏菌素耐药是mcr基因和mgrB变异共同作用的结果。