贵州地区类风湿关节炎患者合并结核感染的危险因素分析

目的探讨贵州地区类风湿关节炎(RA)患者合并结核(TB)感染的危险因素。方法选取RA患者103例作为研究对象,根据合并TB感染情况分为单纯RA组(n=71)和RA合并TB组(n=32);比较2组患者的一般资料、RA疾病程度、既往药物使用情况、实验室及其他检查指标等;将具有统计学差异的指标进行多因素logistic回归分析筛选RA合并TB感染的危险因素。结果与单纯RA组比较,RA合并TB组患者血细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)升高(P<0.05),使用肿瘤坏死因子抑制剂(TNFi)和既往TB感染史等方面比较差异具有统计学意义(P<0.05);二元logistic回归分析后提示CRP和ESR的升高、TNFi的使用及既往TB感染史为RA合并TB感染的危险因素(P<0.05)。结论CRP和ESR的升高、TNFi的使用及既往TB感染史是贵州地区RA合并TB感染的危险因素。

类风湿关节炎相关外泌体及其治疗作用的研究进展

细胞外囊泡(EVs)是由从细胞膜主动分泌的双层膜结构的囊泡小体。外泌体为最小的EVs,外泌体包括源细胞非特异性和特异性两类蛋白分子。前者包括热休克蛋白、参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、细胞溶质蛋白和四跨膜蛋白等;后者只存在于某种特殊的细胞,如树突状细胞(DC)等。外泌体除含有蛋白,还含有小RNA,如微小RNA和长链非编码RNA,参与基因的表达调控。与类风湿关节炎(RA)相关的外泌体蛋白如瓜氨酸蛋白、外泌体淀粉样蛋白A等,外泌体酶如金属蛋白酶氨基肽酶N、D和B-葡糖醛酸酶、Rab27蛋白等,外泌体核酸如miR155和miR146a等,其不仅参与了RA的发病,而且还是RA具有诊断价值的生物标志物。在RA中,利用外泌体能再次诱导机体对自身抗原的耐受,可防止疾病的发生发展。阻断肿瘤坏死因子表达外泌体可治疗RA,除了DC和中性粒细胞衍生的外泌体具有治疗作用外,还有口服牛乳源性EVs可减轻胶原诱导型关节炎模型炎症。外泌体自身不仅可作为治疗药物,而且可作为结合药物的载体,满足精准治疗的需求。

mTOR非依赖途径介导二甲双胍对类风湿关节炎大鼠心血管损伤的作用及机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)非依赖途径介导二甲双胍对类风湿关节炎(RA)大鼠心血管损伤的作用及其机制。方法:取健康雄性Wistar大鼠32只,8只作对照(Con组,生理盐水灌胃),余24只构建RA大鼠模型后随机均分为模型组(RA组,生理盐水灌胃)、Met治疗组[Met组,400 mg/(kg·d)Met灌胃]、联合治疗组[Met+CC组,400 mg/(kg·d)Met灌胃联合AMPK抑制剂Compound C 20 mg/(kg·d)腹腔注射],大鼠出现二次反应起开始干预,总实验周期8周;实验结束时,称重后麻醉各组大鼠,经腹主动脉采血2 mL,取心脏及胸主动脉予福尔马林固定、4%甲醛浸泡制作病理切片,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心血管组织学变化,采用流式细胞仪检测各组大鼠血清γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素-6(IL-6)及IL-17的含量,采用免疫组织化学法检测各组大鼠心血管组织血管内皮生长因子(VEGF)、mTOR及磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)蛋白的表达。结果:RA组与Met+CC组大鼠心肌细胞出现不同程度的变性坏死、炎性细胞浸润、血管平滑肌玻璃样变性及外膜纤维化等,Met组大鼠病变程度较RA组减轻;RA组大鼠血清INF-γ、IL-6及IL-17含量分别较Con组升高(P<0.05),Met组INF-γ、IL-6含量分别较RA组、Met+CC组降低(P<0.05);与Con组比,RA组大鼠心血管组织VEGF、mTOR表达升高但AMPK表达下降(P<0.05);与RA组、Met+CC组比较,Met组大鼠心血管组织VEGF水平降低但AMPK、mTOR升高(P<0.05)。结论:Met可以降低RA大鼠VEGF表达,减少炎症反应,从而减轻RA大鼠早期心血管损伤,其机制可能与上调大鼠心血管AMPK的表达有关。

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路探讨瑞香素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

目的探讨瑞香素(daphnetin,DAP)对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的作用及其与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)PERK/ATF4/CHOP信号通路的关系。方法RA-FLS细胞培养,免疫荧光法检查波形蛋白(vimentin)和CD68对细胞进行鉴定;CCK-8检测(0、5、10、20、30、40、50、60、70)mg·L^(-1) DAP对RA-FLS细胞增殖活性的影响,根据增殖活性将实验分为空白组(Blank)、低剂量组(L-DAP)、中剂量组(M-DAP)、高剂量组(H-DAP)以及高剂量+抑制剂4-PBA组(H-DAP+4-PBA);ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中与内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、Caspase-12、C-caspase-12、Bcl-2表达。结果CCK-8结果显示,与0 mg·L^(-1) DAP组比较,20~70 mg·L^(-1) DAP中各组增殖活性均差异具有显著性(P<0.05),组间比较后0、20、40、60 mg·L^(-1) DAP对应的细胞增殖率差异具有统计学意义(P<0.05),以此浓度分别作为空白、低剂量、中剂量、高剂量组以及高剂量+4-PBA实验分组依据;DAP可成浓度依耐性抑制RA-FLS细胞炎症因子IL-6、TNF-α释放,减弱细胞侵袭能力,促进细胞凋亡,上调PERK、p-PERK、ATF4、GRP78、CHOP及Caspase-12及C-caspase-12蛋白表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。另一组实验证明,高剂量DAP+4-PBA可上调IL-6、TNF-α表达以及细胞侵袭,抑制细胞凋亡及ERS相关蛋白表达。结论DAP可通过激活PERK/ATF4/CHOP信号通路调节相关炎症因子分泌,抑制RA-FLS细胞增殖及侵袭,诱导细胞凋亡,有望成为治疗RA的潜在途径。

血清sPD-1和sPD-L1对类风湿关节炎的诊断价值及其与疾病活动度的相关性

目的探讨可溶性程序性死亡受体1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)对类风湿关节炎(RA)的诊断价值及其与患者疾病活动度的相关性。方法100例RA患者据RA疾病活动评分(DAS28-3)分为缓解期组(n=50,DAS28-3<2.6分)和活动期组(n=50,DAS28-3≥2.6分)、同时选取健康体检者50例作为正常对照组,采集2组RA患者入院次日和正常对照组受检者体检当日清晨空腹外周静脉血,采用酶联免疫法(ELISA)检测3组受试者血清sPD-1和sPD-L1表达,采用全自动血液细胞分析仪和全自动血沉分析仪分别检测3组受试者全血白细胞(WBC)计数和血沉(ESR),采用全自动生化分析仪检测3组受试者血清类风湿因子(RF)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清肌酐(SCr)水平,采用全自动电化学发光分析仪检测3组受试者血清C反应蛋白(CRP);采用Pearson相关系数分析RA患者血清sPD-1、sPD-L1与ESR、CRP、DAS28-3的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC)来评估sPD-1、sPD-L1对RA的诊断价值及疾病活动度的预测价值。结果RA患者血清sPD-1水平明显高于正常对照组,其中活动期组高于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05);RA患者血清sPD-1分别与ESR(r=0.743,P<0.001)、CRP(r=0.672,P<0.001)、DAS28-3(r=0.946,P<0.001)均呈正相关;ROC结果显示,sPD-1对RA的诊断价值最大,AUC为0.904、最佳截断值为305.56μg/L,RF的诊断价值次之,2项指标与抗CCP抗体比较差异均有统计学意义(P<0.001);sPD-1对RA病情活动度的预测价值最高,AUC为0.974、最佳截断值为370.75μg/L,抗CCP抗体的预测价值次之,2项指标与RF比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清sPD-1可作为一种新的RA血清学辅助诊断指标和预测病情活动的评估指标。

瑞香素对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响及其与内质网应激的关系

目的探讨瑞香素(DAP)对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡的影响及其与内质网应激(ERS)的关系。方法取对数增长期人RA-FLS细胞,分别用0、10、20、30、40、50、60及70 mg/L DAP处理24 h,采用细胞增殖计数试剂盒(CCK-8)检测RA-FLS细胞存活率;选择0、20、40及60 mg/L DAP处理RA-FLS细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用细胞免疫荧光方法检测0和20 mg/L DAP组RA-FLS中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酰化-PERK(p-PERK)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)蛋白表达;采用Western blot方法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、激活转录因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与0 mg/L DAP组相比,人RA-FLS细胞增殖活性随DAP浓度增加而降低(P<0.05),细胞凋亡率随DAP浓度增加而增大(P<0.05);20 mg/L DAP组人RA-FLS细胞中PERK、GRP78及Caspase-12荧光强度高于0 mg/L DAP组;与0 mg/L DAP组比较,20、40及60 mg/L DAP组人RA-FLS细胞PERK、p-PERK、GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达均增加(P<0.05),但Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论DAP可抑制人RA-FLS细胞增殖并促进细胞凋亡发生,其机制可能与ERS的激活有关。

类风湿性关节炎间质性肺疾病动物模型概述

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种病因不明的慢性自身免疫性疾病,病变主要位于四肢小关节,随着疾病发展,可累及全身各个系统,其中ILD是最常见的关节外改变。RA患者中有2%~10%可发展为类风湿性关节炎间质性肺疾病(rheumatoid arthritis-interstitial lung disease,RA-ILD)[1];近年来RA的总体死亡率有所下降,但ILD却成为RA患者主要死亡原因之一,并呈逐年上升趋势,占所有RA相关死亡的7-13%[2]。

基于转录组学分析CD146在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞条件培养液状态下的EAhy.926细胞中的基因表达差异

黑色素瘤细胞黏附分子CD146作为一种新的内皮细胞标志物,其表达与肿瘤、自身免疫性疾病的进展密切相关。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、慢性多关节炎症为特征表现的系统性自身免疫性疾病,滑膜血管翳作为RA的代表性病理产物在疾病的发生发展中起着重要作用。为了研究CD146分子在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human rheumatoid arthritis fibroblast like synovial cell,HFLS-RA)条件培养液状态下的人脐静脉内皮细胞株EAhy.926的基因表达差异及其影响机制,本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制EAhy.926细胞中CD146的表达。培养并提取HFLS-RA上清液制备条件培养液。将转染后的EAhy.926细胞用HFLS-RA条件培养液培养24 h构建RA损伤模型,并对其进行转录组测序,筛选出差异表达基因(differentiallly expressed genes,DEGs),并通过GO、KEGG通路分析,探索CD146调控的DEGs主要参与的相关信号通路及生物学过程。结果显示,与对照组细胞相比,HFLS-RA条件培养液状态下CD146敲低的EAhy.926细胞有341个DEGs,其中上调基因有173个,下调基因有168个;GO、KEGG通路分析发现DEGs主要富集在Wnt信号通路、PPAR信号通路、TRP通道的炎症介质调节、脂肪细胞因子信号通路上,参与了细胞黏附、细胞运动、细胞定位、半胱氨酸生物合成过程等生物过程。本研究通过转录组学分析发现在HFLS-RA条件培养液状态下,CD146分子可能通过多条关键信号通路及多个基因影响EAhy.926。研究结果为探讨CD146分子在类风湿关节炎滑膜血管生成中的作用及机制的研究提供了理论依据。

类风湿关节炎血浆外泌体特征及对人血管内皮细胞功能的影响

目的探讨健康者和RA患者血浆来源外泌体对人静脉内皮细胞功能的影响。方法收集健康者和RA患者血浆,用试剂盒分离外泌体后,通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪(NTA)测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。通过CCK8、细胞划痕、Transwell小室实验检测外泌体对内皮细胞增殖和迁移侵袭能力的影响;RT-PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)含量变化。采用t检验。结果透射电镜观察到双凹圆盘状的囊性小泡,纳米颗粒跟踪分析(NTA)测其直径在50~150 nm,蛋白质印迹法显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81,相对分子质量分别为47000和26000。内皮细胞活性随着外泌体浓度增高而降低,但2组差异均无统计学意差义(t=1.86,P>0.05)。与健康者血浆外泌体相比,RA血浆外泌体可显著抑制内皮细胞迁移[(2.24±0.23)和(1.46±0.13),t=6.60,P<0.05],侵袭能力减弱[(0.673±0.030)和(0.827±0.030),t=8.11,P<0.05],分泌HIF-1α、VEGF细胞因子的能力也显著降低,差异均有统计学意义[(0.706±0.020)和(0.908±0.040),t=10.10,P<0.05;(0.692±0.010)和(0.841±0.020),t=14.90,P<0.05]。结论血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。