转染miR-133a过表达对人食管癌EC9706细胞生长的影响及启膈散干预作用

目的优化miR-133a转染EC9706细胞条件,观察转染后启膈散对EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法使用荧光显微镜及流式细胞术优化EC9706细胞miR-133a转染条件;MTT法检测转染miR-133a后启膈散对EC9706细胞活性的抑制作用;流式细胞术检测转染miR-133a后启膈散对EC9706细胞的凋亡的影响。结果从荧光显微镜观察到的荧光信号强度及流式细胞仪检测荧光转染效率来看,24孔板EC9706细胞转染实验使用1L/孔Lipofectamine 2000(脂质体2000转染试剂)和100nmol·L^(-1)miR-133a时转染效果最佳;应用启膈散及转染miR-133a模拟物后对EC9706细胞活性有明显抑制作用(P<0.05),两者联合应用呈现一定的竞争抑制作用(P<0.01);EC9706细胞转染miR-133a模拟物48h后,与空白对照组相比,可增加细胞总凋亡率、细胞晚期凋亡率(P<0.01);启膈散作用于EC9706细胞48h后,与空白对照组相比可增加细胞总凋亡率、细胞早期凋亡率及细胞晚期凋亡率(P<0.01);两者联合应用对EC9706细胞的总凋亡率具有协同增效作用(P<0.01)。结论miR-133a过表达可促进EC9706细胞的增殖和凋亡,启膈散可通过促进miR-133a的表达影响EC9706细胞的生长。

旋覆归连方对食管癌ECa9706细胞致瘤裸鼠瘤体形态及血管生成的影响

目的观察旋覆归连方对ECa9706细胞致瘤裸鼠瘤体生长、超微结构及血管生成的影响。方法制作裸鼠肿瘤模型,观察给药后裸鼠瘤体生长情况,瘤体电镜下形态变化及血清IL-6,CD34蛋白表达的影响。结果旋覆归连方能够抑制肿瘤的生长,改变肿瘤细胞形态,抑制IL-6活性及CD34蛋白的表达。结论旋覆归连方可抑制ECa9706细胞致瘤裸鼠肿瘤的生长,其抑制作用可能与抑制炎症因子及抑制血管生成有关。

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a(miR-133a)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位;噻唑蓝(MTT)比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt,mTOR的表达。结果:与空白组比较,启膈散可抑制EC9706细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性,筛选30%抑制浓度(IC30)40 mg·L^(-1)和半抑制浓度(IC50)80 mg·L^(-1)进行后续实验;与空白组比较,抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖(P<0.01),筛选抑制剂0.25μmol·L^(-1)进行后续实验;与空白组比较,启膈散80 mg·L^(-1)组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率(P<0.05),启膈散40 mg·L^(-1)组可促进EC9706细胞晚期凋亡率(P<0.05),与Akt/mTOR抑制剂联合用药后,可协同增效。与空白组比较,各组均能提高miR-133a表达(P<0.05),其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较,各组均能够均可明显降低Akt,mTOR蛋白表达(P<0.05),与单独用药比较,抑制剂与中药联合应用组Akt,mTOR的蛋白表达有所降低。结论:启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长,促进EC9706细胞的凋亡,其抑制机制可能与调控miR-133a的表达,影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。

PI3K/Akt信号通路影响食管癌细胞生长的机制及中药干预作用研究进展

食管癌是我国肿瘤发病死亡率较高的恶性肿瘤之一,国家癌症中心2019年发布的中国最新癌症报告中显示,2015年食管癌患病人口达到了24.6万人,死亡人数高达18.8万人。如何有效的治疗食管癌,提高患者的生存率也是当今医学领域中亟待解决的首要问题之一。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是调节机体内细胞存活、分化及凋亡的重要信号通路之一,在各种癌症的发生及作用机制中起到了重要的作用。近年来的研究表明,PI3K/Akt信号通路的激活是调节食管癌细胞的增殖、凋亡、周期阻滞、迁移与侵袭的重要因素。长期的临床观察发现中药治疗食管癌作用平稳、毒副作用小,尤其在改善肿瘤患者的生活质量,延长患者生存期等方面作用独特、效果显著。用中药干预该信号通路以探索其对食管癌的作用机制是目前中药治疗食管癌的研究热点。本文对2009-2019年CNKI,Pubmed数据库中PI3K/Akt信号通路,食管癌,miRNA为关键词进行检索,共检索文献226篇,整理、归纳与中药,食管癌,miRNA,PI3K/Akt信号通路相关文献61篇。综述了PI3K/Akt信号通路在食管癌中的作用机制,miRNA与PI3K/Akt信号通路与食管癌发生发展的关系以及中药如何通过调控PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达而抑制细胞增殖、影响细胞生长周期、诱导细胞凋亡、诱导细胞自噬、抑制肿瘤的侵袭和转移、抑制血管生成等,最终对食管癌起到一定的改善作用。对中医药治疗食管癌提供理论基础以及科学依据。

健脾和胃法六君子汤通过影响细胞能量代谢增强顺铂对EC9706活性抑制作用

目的:观察六君子汤增强顺铂对食管癌EC9706细胞疗效并探索机制。方法:以EC9706细胞为研究对象,体外常规培养后将细胞进行如下分组:空白对照组、六君子汤50、100μg/mL组、顺铂1、2μg/mL组、顺铂和六君子汤联合用药组、二甲双胍15 mmol/L组。MTT法检测细胞活性,能量代谢分析系统检测细胞糖酵解速率和线粒体压力,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位。结果:与空白对照组相比,六君子汤(25、50、100、200μg/mL)可明显抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),六君子汤50μg/mL组ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧明显降低、备用呼吸能力明显降低(P<0.05),六君子汤100μg/mL组补偿糖酵解、糖酵解潜能、ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧、备用呼吸能力明显降低(P<0.05);顺铂(1、2、4、8μg/mL)可抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),顺铂1μg/mL组ATP合成耗氧、基础呼吸值明显降低(P<0.05),JC-1单体比率明显提高(P<0.05),顺铂2μg/mL组补偿糖酵解、基础糖酵解、ATP合成耗氧、基础呼吸值明显降低(P<0.05),JC-1单体比率明显提高(P<0.05);二甲双胍(12.5、25、50、100 mmol/L)可抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),二甲双胍15 mmol/L组补偿糖酵解、线粒体代谢与基础糖酵解比值、糖酵解潜能、ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧、备用呼吸能力明显降低,JC-1单体比率明显提高(P<0.05);与顺铂2μg/mL组相比,顺铂2μg/mL+六君子汤100μg/mL组细胞活力、补偿糖酵解、基础糖酵解速率、线粒体代谢与基础糖酵解比值、糖酵解潜能、ATP合成耗氧量、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧和备用呼吸能力明显降低,JC-1单体比率明显提高(P<0.05)。结论:六君子汤增强顺铂对EC9706细胞活力抑制作用,二者在调节食管癌EC9706细胞的糖酵解能力、线粒体呼吸能力和线粒体膜电位方面有协同作用。