鸽新城疫病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种简便、快速,适用于基层检测鸽Ⅰ型副黏病毒的方法,研究针对鸽Ⅰ型副黏病毒全基因组保守序列,设计了1组可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型分离株的环介导等温扩增(LAMP)引物,通过优化反应条件及体系,建立鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法。结果显示:建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型鸽新城疫病毒,与H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、禽网状内皮组织增殖病病毒、小鹅瘟病毒以及禽白血病病毒以及新城疫病毒La Sota疫苗株均无交叉反应,最低检测限为10^(1)copies/μL。研究表明所建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法快速、简便,特异性强,灵敏度高,可应用于基层快速检测鸽Ⅰ型副黏病毒。

1,4-二氢吡啶衍生物的QSAR模型构建及制备

采用Hyperchem 8.0软件,通过分子动力学MM+和半经验AM1算法,优化并计算得到30种1,4-二氢吡啶衍生物的17种量子化学参数。运用Statistica 8.0软件中的主成分分析法,结合线性回归分析法,筛选出3个最佳参数与1,4-二氢吡啶衍生物的抗结核活性关联,构建定量构效关系(QSAR)模型。所建多元线性回归方程的相关系数R2为0.75,留一法交叉检验系数q2为0.72,活性实验值与预测值相关性较好。采用该模型设计并制备得到1种具有良好水溶性和潜在抗结核活性的N3,N5-二(对磺酸钾基)苯基-2,6-二甲基-3,5-二甲酰氨基-1,4-二氢吡啶(TM),用1H NMR、IR、MS和元素分析表征结构,并考察了紫外和荧光性能。良好的稳定性和预测能力使该QSAR模型有望用于结核病候选药物的筛选。

多环芳烃交叉反应率QSAR模型构建及半抗原设计

多环芳烃(PAHs)作为主要环境污染物和致癌物受到广泛关注。免疫分析技术应用于多环芳烃检测时,由于其潜在交叉反应物太多,很难通过实验来确定所有的交叉反应率(CR)。本研究采用定量构效关系(QSAR)中的比较分子力场分析法(CoMFA),对芘多克隆抗体的CR进行了预测。结果表明,化合物的CR与其三维结构相关,立体场贡献率95%,静电场贡献率5%,相关性结果与随机选取的测试化合物的实际CR进行了比较,证明模型具有良好的预测能力。该模型被用于预测其他17种多环芳烃的CR,同时运用分子模拟和量子化学计算,从空间结构、疏水性、原子电荷、前线分子轨道和静电势比较了引入连接臂的三种半抗原,最终确定1-芘丁酸为最佳半抗原。

多环芳烃半抗原在聚苯乙烯微球表面的固载及其评价

建立分别在胺基聚苯乙烯微球和氯乙酰化聚苯乙烯微球上固定不同多环芳烃半抗原的方法。用扫描电子显微镜(SEM)和傅里叶红外光谱仪(FT-IR)表征固载半抗原微球的外观形貌和表面官能团,采用紫外分光光度法测定固定化半抗原微球静态吸附多环芳烃萘和蒽的能力。结果表明:半抗原在微球表面固载成功,固定化半抗原微球单分散性好,球形度高,性质稳定;固定化半抗原微球具有良好的选择性吸附多环芳烃的能力,可以作为生物活性材料,用于抗体固载和抗体的分离和分析。

IL-17、IL-23、TGF-β和IL-10在乙型肝炎病毒感染中的表达分析

目的探讨乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染患者外周血中几种细胞因子在疾病慢性化及疾病进展中的作用。方法分离HBV慢性感染者及健康人外周血,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测IL-17、IL-23、TGF-β和IL-10的表达及其与乙肝患者肝功能指标及血清中病毒载量的关系。结果乙肝患者血清中IL-17、IL-23和TGF-β与健康对照比较无明显差异,但IL-10显著增加,IL-17、IL-10与转氨酶水平正相关,TGF-β与转氨酶水平负相关,而IL-10与乙肝病毒DNA载量正相关。结论IL-17、IL-10及TGF-β与HBV感染者肝细胞的炎性损伤有关,对于乙肝患者肝纤维化及疾病进展程度具有提示意义,而IL-10具有促炎和耐受的双重作用,可以预测乙肝感染慢性化及病毒持续感染。

永煤塌陷区水污染对鲫鱼过氧化氢酶和乳酸脱氢酶活性的影响

2010年5月,选择永城煤矿塌陷区天然鱼塘的野生鲫鱼(Carassius auratus)为对象,以相对无煤矿污染的商丘市天沐湖为对照,研究了永城煤矿塌陷区低浓度混合重金属污染对鲫鱼血液过氧化氢酶(CAT)和血清乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。结果表明,永城煤矿塌陷区鲫鱼CAT的OD值(0.600)极显著高于天沐湖鲫鱼CAT的OD值(0.411)(P<0.01),塌陷区鲤鱼血清中LDH的OD值(0.310)极显著低于天沐湖鲫鱼CAT的OD值(0.421)(P<0.01),说明煤矿塌陷区低浓度混合重金属污染对鲫鱼的正常生理过程有明显的抑制。

苯基脲类和磺酰脲类除草剂半抗原设计策略

本文综述了苯基脲类和磺酰脲类除草剂半抗原的设计原则、合成方法及影响因素等方面的研究进展。合成苯基脲类除草剂半抗原,在苯基脲类分子中引入可供结合用活性基团的位点主要有3种,即外部脲桥上的氮、内部脲桥上的氮以及直接在苯环上。研究表明,在外部脲桥上的氮连接亚甲基基团是最理想的半抗原。合成磺酰脲类除草剂半抗原有保留苯环部分、保留杂环部分和保留磺酰脲分子全部特征部分3种方法。经比较研究,保留苯环特征部分的半抗原要比保留磺酰脲全部特征部分的半抗原产生的抗体有更高的亲和力。间隔臂长度是半抗原设计的一个重要因素。间隔臂长(5个亚甲基)的半抗原一般要比间隔臂短的半抗原更能产生理想的免疫结果。在建立酶联免疫法中选择包被/示踪半抗原时,选用比免疫用半抗原更不被抗体识别的半抗原做包被/示踪半抗原。示踪半抗原亲和力的适度减少,被分析物所需的量可以减少,可以进一步提高分析的灵敏度,降低检测限。

基于四种水产病原弧菌的简型芯片检测体系的优化

基因芯片技术在病原菌检测领域展现出良好的前景,本文依托水产病原菌基因检测芯片的检测体系,以水产常见病原弧菌的hsp60、toxR基因检测探针为研究对象,系统研究不同点样液配方、寡核苷酸探针浓度、荧光标记物质浓度、杂交温度、杂交时长对芯片杂交效果的影响,并进行相应优化。结果表明,杂交温度为60℃、杂交时长为2h、探针浓度为1μmol/L、Cy3标记的随机引物的用量为150pmol时,芯片的经济性、灵敏度、检测效率达到均衡;以0.1mol/L磷酸氢二钠和25%二甲基亚砜混合溶液作为点样液,效果较好。优化后的芯片对4种弧菌的检测没有出现交叉杂交现象,探针特异性达到100%;对溶藻弧菌全基因组DNA检测灵敏度为10fg,高出PCR方法约2个数量级。

短期低浓度混合重金属污染对鲫鱼肝、肾和肌肉内可溶性蛋白的影响

为了探讨短期低浓度混合重金属污染物对鲫鱼(Carassius auratus)肝脏、肾脏和肌肉内可溶性蛋白的影响,以煤矸石浸出液作为低浓度混合重金属污染物,在实验室条件下研究了鲫鱼肝、肾和肌肉中可溶性蛋白的变化。结果表明:试验组肝脏出现5种特异表达蛋白、3种表达丰度降低蛋白;肾脏出现3种特异表达蛋白、1种表达丰度增高蛋白;肌肉中蛋白质的表达虽有细微变化但差异不明显。表明短期低浓度混合重金属污染对鲫鱼肝、肾中蛋白质的合成和表达产生了一定的影响。

气候变化对雪豹全球潜在适生区分布的影响与评估

气候变化不仅是人类正在面临的挑战,也是野生动物需要应对的危机。雪豹(Panthera uncia)作为亚洲中部高原和山脉的旗舰种,它的生存和繁衍可以反映青藏高原等地区生态系统的健康状况。青藏高原等地区的气候变暖速度远快于全球平均水平,研究气候变化对雪豹的生境的影响对于高原物种的保护有重要意义。以雪豹为研究对象,采用第六次国际耦合模式比较计划(CMIP6)气候模式下四种共享社会经济路径(SSPs)对应的未来21世纪中期和21世纪末期的环境数据,并基于最大熵模型(MaxEnt),结合ENMTool、SDMTool、ArcGIS和R等工具对当前和未来全球不同发展模式引起的气候变化对雪豹适宜生境的影响进行了模拟预测和分析评估。研究发现:(1)影响雪豹分布的主要环境因素包括:两种气候变量(年平均气温和最冷月最低温度),两种地形变量(海拔和坡度)和一种水文变量(距离最近河流的距离)。(2)当前气候模式下雪豹的全球潜在适宜分布区的总面积约为1122.05万km^(2),其中低适生区面积为534.5万km^(2),中适生区面积为386.15万km^(2)以及高适生区面积为201.4万km^(2)。我国拥有556.65万km^(2)的雪豹适生区面积,其中低适生区面积为146.2万km^(2),中适生区面积为256.07万km^(2),以及高适生区面积为154.38万km^(2)。(3)研究发现未来不同气候模式下雪豹的中高适生区出现不同程度的缩小,并且雪豹高适生区对气候变化的响应更加显著。位于青藏高原东部、昆仑山脉、天山山脉、阿尔泰山脉以及兴都库什山等地区的雪豹高适生区较为碎片化,更容易受气候变化的影响。此外,在中等发展路径(SSP245)和高速发展路径(SSP585)模式下,雪豹新增的高适生区域有助于增强雪豹分布区之间的连通性。以上研究结果表明气候变化对雪豹生境有重要影响,建议加强对雪豹等高原物种的关注和保护。

盐酸普萘洛尔衍生物的合成及水解性能

以α-萘酚、环氧氯丙烷和异丙胺为原料,依次经醚化、消除、氨化、成盐反应,制备盐酸普萘洛尔,再分别与乙酰氯和聚丙烯酰氯反应,制备了两种盐酸普萘洛尔衍生物:O-乙酰基-盐酸普萘洛尔(化合物Ⅳ)和聚丙烯酸固载盐酸普萘洛尔(化合物Ⅶ),产品结构经熔点、IR、1HNMR和晶体结构表征。酸性条件下的水解性能研究表明,化合物Ⅳ和Ⅶ于8 h的盐酸普萘洛尔的释放率分别为15.18%和17.86%。与化合物Ⅳ相比,化合物Ⅶ的高分子载体不易被人体吸收,有望作为前体药,应用于临床。

N,N-二甲基甲酰胺催化的吡唑亲电/亲核氯代反应

在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)催化下,用氯化亚砜氯代1-苯基-5-(4-甲基苯基)-1H-3-羟基吡唑(1a),以83%的高产率获得了4-氯-1-苯基-5-(4-甲基苯基)-1H-3-羟基吡唑(2a),用高效液相色谱(HPLC)跟踪反应,得出最佳反应条件为:n(1a)∶n(DMF)=10∶1,在SOCl2中回流4 h,并分离得到单质硫,提出了DMF催化的吡唑亲电/亲核氯代机制。通过合成系列吡唑底物1b^1h,研究了氯代机制的普适性,其氯代产物2b^2h经核磁共振氢谱(1H NMR)、核磁共振碳谱(13C NMR)和元素分析表征,并用X线衍射法测定了2d的晶体结构。该氯代反应操作简单、官能团相容性好。

儿童腹膜后畸胎瘤围手术期并发症的相关危险因素分析

目的分析儿童腹膜后畸胎瘤围手术期并发症的相关危险因素。方法选取56例儿童腹膜后畸胎瘤围手术期发生并发症的患儿作为发生组,并以1∶1配比选取56例同期儿童腹膜后畸胎瘤围手术期未发生并发症的患儿作为未发生组。收集两组性别、年龄、体重、肿瘤位置、跨越中线、手术时长、直径、病理、COG分期、静脉移位、器官移位等信息,分析儿童腹膜后畸胎瘤围手术期发生并发症的危险因素。结果年龄、体重、跨越中线、直径、静脉移位、器官移位是影响儿童腹膜后畸胎瘤围手术期发生并发症的单因素(P<0.05);logistic回归分析显示,年龄≤1岁、体重>5 kg、跨越中线、直径长、静脉移位、器官移位是儿童腹膜后畸胎瘤围手术期发生并发症的影响因素(P<0.05)。结论儿童腹膜后畸胎瘤围手术期发生并发症的影响因素较多,临床应根据上述因素实施相关措施,做好术前影像学检查及评估,提高手术安全性,减少并发症发生。

自媒体时代下的大学生思想政治教育困境与对策研究

本文分析了自媒体时代下大学思想政治教育面临的困境,着重探讨信息失真、信息碎片化和信息封闭的问题对大学生认知和价值观形成的消极影响。在此背景下,论文论证了应对这些困境的必要性,提出了三个应对措施:学校、个人和社会协力加强大学生媒体素养教育、建设全面发展的教师队伍,促进思政教育内容的创新、推进大学校园文化建设,营造积极向上的学习环境。

食品中有机磷农残前处理及检测分析技术

综述近年来最常用的有机磷农药残留分析样品前处理技术和检测技术,分别对这些新技术的基本原理、特点以及在农药残留分析中的应用进行了详细的介绍,讨论了它们的优点和缺点,并对其发展趋势进行了展望。

改良中性粒细胞CD64指数鉴别诊断感染的临床应用效能

目的探讨改良中性粒细胞CD64(nCD64)指数与传统nCD64指数鉴别诊断感染的临床应用效能差异。方法纳入自身免疫性疾病(AID)患者32例、血液肿瘤患者32例、急诊发热患者59例及健康体检者41例。所有患者中确诊感染者76例,非感染者47例。采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的CD64荧光强度,计算改良nCD64指数和传统nCD64指数并比较两种指数对感染的鉴别诊断效能。结果感染患者的改良nCD64指数和传统nCD64指数均显著高于非感染患者及健康体检者(均P<0.05);两种指数鉴别感染的AUC分别为0.782和0.770(均P<0.05),最佳临界值分别为1.00和4.74。传统指数仅在AID中具有较好的诊断效能(AUC=0.887,P<0.05),改良指数在三类患者中均有较好的诊断效能(AUC均>0.75,P<0.05)。结论两种nCD64指数对感染的鉴别诊断均有一定的临床价值,且二者在自身免疫性疾病中诊断价值最高,改良nCD64指数较传统nCD64指数在急诊发热患者和血液肿瘤中有更高的诊断效能。

金枪鱼制品中几种DNA提取方法的效果比较

金枪鱼种类繁多,市场上以次充好、以假乱真的现象时有发生。基于DNA的检测技术已经被广泛用于金枪鱼制品品种掺假检测。而DNA提取对DNA检测技术的运用至关重要。本研究以28份深加工金枪鱼产品为样本,采用3种DNA提取方法(SDS法以及2种市售试剂盒)进行DNA提取,并对DNA的质量、得率、PCR扩增及方法的可操作性等方面进行比较研究。结果表明,3种方法均可用于大多数金枪鱼制品的DNA提取。与其它2种市售试剂盒相比,SDS法提取的DNA得率较低,但纯度较好,A260/A280比值为1.89,盐残留少,对实时荧光定量PCR的抑制少,且成本相对价格经济,满足金枪鱼制品掺假检测的需求。

PCR法检测鱼及其制品中的鱼源性成分

目的:建立一种快速、特异、灵敏的鱼源性成分聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据鱼线粒体基因组12S r RNA中的保守序列设计鱼源性特异性引物,进行PCR扩增,建立鱼源性成分检测方法;对24种鱼及鸡、牛、羊、猪、鸭、虾6种常见的易混于鱼制品的动物源性成分进行特异性检测;将草鱼肉混入其他动物肉中,混合均匀后提取DNA进行PCR扩增,确定肉样水平的检测灵敏度;将草鱼DNA混入其他动物DNA中,以混合后的DNA为模板进行PCR扩增,确定DNA水平的检测灵敏度。结果:该方法能特异性的对鱼源性成分进行快速检测,检测灵敏度达0.5%。结论:该方法能对食品中是否含有鱼源性成分进行初筛,到达快速检测的目的,对防止食品掺假、维护消费者利益、规范市场秩序有重要意义。

食品中常见有机磷农药残留的气相色谱-质谱检测方法

建立了气相色谱-质谱联用技术分析蔬菜、谷物中敌敌畏、甲胺磷等16种有机磷农药残留的快速检测方法。样品用乙腈提取,采用Qu ECh ERS处理方法进行前处理,用气相色谱-质谱联用多反应监测仪检测16种有机磷农药残留。16种有机磷农药在15 min内流出,分离度良好,农药在0.025~0.4 mg/kg范围内线性良好,相关系数(R2)均大于0.94。不同基质如大米、面粉、蔬菜的加标回收率分别为75.9%~112.2%、77.3%~126.9%、76.2%~125.3%,相对标准偏差(RSD)<8.5%。重复性实验引入的不确定度符合国家标准。该方法具有操作方便、分离时间短、灵敏度高、选择性好等优点,适用于大多数食品中有机磷农药残留检测。

微生物高密度培养策略

微生物高密度培养具有发酵周期短、生产率高、成本低等优点,已成为发酵工程领域的研究重点。笔者从营养物质、环境因素、补料方式及反应器、代谢调控策略等方面分析如何提高微生物发酵密度效果,表明微生物高密度发酵必须从菌体本身、代谢特点、营养需求等多角度、综合设计才更有效,便于降低发酵成本。