《动物研究:体内实验报告》即ARRIVE 2.0指南的解释和阐述(五)

提高生物医学研究结果的可重复性是一项重大挑战,研究人员透明且准确地报告其研究过程有利于读者对该研究结果的可靠性进行评估,进而重复该实验或在该成果的基础上进一步探索。ARRIVE 2.0指南是英国国家3Rs中心(NC3Rs)于2019年组织发布的一份适用于任何与活体动物研究报告相关的指导性清单,用以提高动物体内实验设计、实验实施和实验报告的规范性,以及动物实验结果的可靠性、可重复性和临床转化率。ARRIVE 2.0指南的使用不仅可以丰富动物实验研究报告的细节,确保动物实验结果信息被充分评估和利用,还可以使读者准确且清晰地了解作者所表述的内容,促进基础研究评审过程的透明化和完整性。本文是在国际期刊遵循ARRIVE 2.0指南的最佳实践基础上,对2020年发表于PLoS Biology期刊上的ARRIVE 2.0指南完整解读版(https://arriveguidelines.org)第五部分包括“推荐11条”里的第6~11条:“动物照护和监测”、“解析/科学阐释”、“可推广性/转化”、“研究方案注册”、“数据获取”和“利益冲突声明”等内容进行了编译、解释和阐述,以期促进国内研究人员充分理解并使用ARRIVE 2.0指南,提高实验动物研究及报告的规范性,助推我国实验动物科技与比较医学研究的高质量发展。

口蹄疫病毒研究进展

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病,是全球范围内家畜及其产品贸易最大的羁绊。FMDV通过逃避宿主的免疫监视建立持续性感染,使患畜持续向外界排毒,成为传染源。作者查阅了近几年FMDV的国内外研究进展,对其流行病学、病原学及致病机理进行了概述。

佐剂及其功能和作用机制

介绍了佐剂的分类、功能及作用机制,其作用机制主要包括:作为疫苗在体内的贮存库;诱导并调节免疫应答;改变免疫应答方式;延长活化的免疫细胞存活时间。

公共阅读空间建设“体系化”拓展研究——以金华市“城乡10分钟阅读圈”建设为例

近年来,我国公共阅读空间建设在各地方政府的统一规划和相关措施保障下有序推进,各地根据各自特色开展图书馆总分馆体系管理运营,形成了互联互通、统一管理的公共阅读服务体系。其中,温州将“城市书房”纳入全市公共图书馆通借通还服务网络和数字图书馆服务网络,在管理上实行统一标识、统一调配和“连锁化”运营,“城市书房”还走进农村,成为乡村家门口无人值守的图书馆,与“城市书房”一起构成了城乡一体的公共阅读服务体系。本文通过对金华市“城乡10分钟阅读圈”建设并形成了新的公共阅读空间体系进行了探讨,并对金华市公共阅读空间体系化建设的进一步延伸和拓展进行了研究。

《动物研究:体内实验报告》即ARRIVE 2.0指南的解释和阐述(四)

提高生物医学研究结果的可重复性是一项重大挑战,研究人员透明且准确地报告其研究过程有利于读者对该研究结果的可靠性进行评估,进而重复该实验或在该成果的基础上进一步探索。ARRIVE 2.0指南是英国国家3Rs中心(NC3Rs)于2019年组织发布的一份适用于任何与活体动物研究报告相关的指导性清单,用以提高动物体内实验设计、实验实施和实验报告的规范性,以及动物实验结果的可靠性、可重复性和临床转化率。ARRIVE 2.0指南的使用不仅可以丰富动物实验研究报告的细节,确保动物实验结果信息被充分评估和利用,还可以使读者准确且清晰地了解作者所表述的内容,促进基础研究评审过程的透明化和完整性。本文是在国际期刊遵循ARRIVE 2.0指南的最佳实践基础上,对2020年发表于PLoS Biology期刊上的ARRIVE 2.0指南完整解读版(https://arriveguidelines.org)第四部分包括“推荐11条”里的第1~5条:“摘要”、“研究背景”、“研究目标”、“伦理声明”和“饲养场所和饲养”等内容进行了编译、解释和阐述,以期促进国内研究人员充分理解并使用ARRIVE 2.0指南,提高实验动物研究及报告的规范性,助推我国实验动物科技与比较医学研究的高质量发展。

口蹄疫病毒前导蛋白酶抑制宿主先天性免疫应答的机制

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病。口蹄疫病毒有多种机制对抗宿主的先天性免疫应答,在这个过程中病毒的前导蛋白酶(Lpro)发挥了关键作用。Lpro可切断宿主细胞帽子依赖性的蛋白翻译,抑制干扰素蛋白的合成;Lpro通过破坏核转录因子-κB(NF-κB)的完整性或减少干扰素调节因子3/7(IRF3/7)的表达,从而抑制IFN mRNA的产生;Lpro还会参与维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)、TANK结合激酶1(TBK1)、TNF受体相关因子3(TRAF3)和TRAF6的去泛素化,从而影响Ⅰ型干扰素信号通路的活化。

基因组编辑技术及其安全管理

基因组编辑技术利用核酸酶对生物体内的DNA双链进行断裂,并以非同源末端连接或同源重组的方式对基因组DNA特定位点进行突变、缺失或者基因的插入与替换。锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶、成簇规律间隔短回文重复序列是目前基因组编辑技术应用中的3种关键核酸酶。基因组编辑技术已在植物基因功能、育种等领域广泛应用,特别是基于成簇规律间隔短回文重复序列的基因编辑技术CRISPR-Cas9。具有优良性状的基因组编辑大豆、玉米等产品已逐步从实验室走向田间,基因组编辑作物展现了较传统转基因作物更为优越的应用前景。本文简要概述了主要使用的3种基因组编辑技术及其原理。对这些技术的优缺点进行了分析,并依据物种分类梳理了利用上述3种技术在动物、植物中突变体建立、基因功能研究、分子育种等方面的研究进展。同时,针对基因编辑产物的产业化应用前景,讨论了基因编辑技术及其产品较传统转基因技术产品的优势,分析了基因编辑技术及其产品可能因脱靶效应而引发的生物安全风险,介绍了美国、欧盟等国家对基因编辑技术及其产品安全管理和商业化应用的政策。文章结合中国现行法规对转基因生物的定义及安全评价(实质等同、个案分析)原则,讨论了基因编辑技术及其产品的安全管理,初步提出了基于传统转基因生物安全评价框架的基因编辑产品的安全评价和管理思路。针对基因编辑产品需要按照个案原则进行评价和管理,安全评价重点开展分子特征及食用安全评价;同时需要针对基因编辑技术的特点建立更加有效、特异的检测新方法,实现对基因编辑产品的有效监测,以促进基因组编辑产品的商业化应用。

热应激对ICR雌性小鼠血液生化指标的影响

目的探讨热应激对小鼠血液生化指标的影响。方法实验从25℃对照组和42℃热应激第7、14、21、28天,各选取4只小鼠进行血液生化指标的测定。血液生化指标包括小鼠血清Na^(+)、K^(+)、Cl^(-)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清碱性磷酸酶(ALP)。采用罗氏全自动生化分析仪进行测定。其中Na^(+)、K^(+)、Cl^(-)采用离子选择电极法;血清总蛋白采用双缩脲法;白蛋白采用溴甲酚绿法;ALT、AST、LDH、ALP采用速率法。结果热应激7、14、21和28 d,小鼠血清中的Na^(+)浓度较对照组偏高,而K^(+)浓度均较对照组偏低,但是各组之间不存显著差异。Cl^(-)浓度较对照组在第28天时显著增高(P<0.05)。TP含量在各个时期不存在显著差异,而ALB的含量在第28天显著高于对照组(P<0.01)。热应激组AST、LDH、ALP浓度在第21天时显著高于对照组(P<0.05)。结论热应激提高了小鼠血清中ALT、AST、LDH、ALP浓度。

树鼩微生物感染研究进展

树鼩是我国正在开发的具有自主知识产权的实验动物新品种,随着树鼩应用范围越来越广泛,实验树鼩的标准化重要性日益凸显。本文调研了1978至2020年树鼩微生物感染的文献,梳理了树鼩的微生物感染状况,以期为建立标准化的实验树鼩种群提供参考。

公共图书馆为两会开展信息服务的实践和思考——以金华市图书馆为例

以地市级图书馆——金华市图书馆为例,从该图书馆为社会提供信息服务的缺失谈起,列举了该馆服务两会新举措,并从其他公共图书馆的两会信息服务工作进行了总结思考。

高职院校图书馆构建“城市第三空间”的策略研究

提出了高职院校图书馆应构建"城市第三空间"的观点,分析了高职院校图书馆构建"城市第三空间"的可行性,探讨了构建"城市第三空间"的策略以及实现"城市第三空间"的保障因素。

浅谈公共图书馆工作中“软技巧”的运用

在图书馆免费开放的大环境下,图书馆的服务对象也随之增加且层次各异,图书馆工作人员在服务过程中要善于运用"软技巧",与读者取得良性互动,彰显图书馆服务魅力。

实验动物金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立和应用

为了快速检测出实验动物临床样品中的金黄色葡萄球菌(SA),建立了一种普通PCR方法。同时合成3对引物,用金黄色葡萄球菌的阳性核酸DNA做模板,进行引物扩增,筛选出一对能扩增出270 bp单一目的片段的引物。逐一对该引物灵敏度、重复性和特异性进行了测试。实验结果显示,该方法具有高度的特异性,除了识别金黄色葡萄球菌基因组外,对小鼠其他常见病原菌均不发生交叉反应,具有优良的敏感性和稳定性。两个不同操作人员,在两个不同时间段,利用两台不同品牌的PCR仪器,用金黄色葡萄球菌阳性样品进行测试,结果显示此方法再现性良好。用该方法检测待测样本,效果也良好。

鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为制备CIAV VP2单克隆抗体,将原核表达的His-VP2融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-VP2融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌抗CIAV VP2蛋白的杂交瘤细胞克隆,分别命名为3D7、3B8、2D3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价分别为1:8.0×10~5、1:4.0×10~5,以及1:6.4×10~6,亲和力解离常数分别为7.34×10^(-11)、2.65×10^(-11),以及2.98×10^(-11)。IgG亚类分别为IgG1、IgG2b以及IgG2b。经Western Blot试验证明,3D7株单抗能特异地识别CIAV VP2蛋白,其识别的抗原表位区域为VP2 N-端的20~40 aa。经IFA试验证明,3株单抗均能识别天然的CIAVVP2蛋白。此单抗为研究CIAVVP2的生物学功能和CIAV致病机理奠定基础。

“十四五”时期地市级公共图书馆服务大提升策略思考——以金华市图书馆为例

为贯彻落实浙江省服务大提升行动方案,浙江省地市级公共图书馆全面部署实施提升工作。文章以金华市图书馆为例,从硬件提档升级、强化数字赋能、打造城乡“10分钟阅读圈”、强化精细管理等方面着手提升惠民满意度,指出了“十四五”时期地市级公共图书馆实施服务大提升的策略,以期推进服务大提升工作,为文化强国建设打下坚实基础。

转基因玉米MIR604基体标准物质研制

转基因生物安全监管是生物技术产业健康发展的保障,而转基因检测标准物质是进行转基因监管检测的物质基础,缺少标准物质就难以保证检测数据的准确性、可靠性和可比性。转基因玉米MIR604是我国批准进口用作加工原料的转基因品种,对其安全监管亟须制备标准物质。本项目通过对转基因玉米MIR604种子进行原材料鉴定、研磨、过筛、含水量测定等步骤,制备出转基因玉米MIR604纯品基体标准物质。均匀性检验和稳定性检验结果表明,本批标准物质在瓶内和瓶间均具有良好的均匀性,可在常温下运输1个月,长期稳定性达到6个月,量值稳定。本批标准物质的特性量值为转基因DNA与总DNA的拷贝数比值,由9家实验室采用MIR604/Adh1二重数字PCR联合定值,量值为0.50。充分评估了标准物质定值结果的各个不确定度分量,合成扩展不确定度为0.06 (copy/copy)。本批标准物质规格为1 g瓶–1,使用时最小取样量为100 mg,可用于转基因玉米MIR604的安全监管和定量标识、以及实验室质量控制等领域。

一种用于鉴定18种转基因大豆转化体的多靶标质粒的构建与应用

本文拟构建一种可满足我国转基因大豆转化体鉴定需求的多靶标质粒(multiple target plasmid,MTP)分子。根据相应的国家农业检测标准,选定我国已经批准进口的14种独立转化体和尚未批准但具有重要应用前景的4种重要转化体,将这18种转化体的特征序列以及大豆内标准基因Lectin的检测序列合理排列后,接入pUC18质粒,构建一种多靶标质粒pDDID-1905。在插入序列之间,分布着多种位点单一的限制性内切酶识别序列,可用于后期对该质粒的修订和更新。对pDDID-1905质粒中包含的19种靶标序列进行聚合酶链式反应检测,以验证该质粒的实用性。结果显示,所有靶标序列均被成功扩增,其大小与预期一致。总之,本文构建的适用于18种转基因大豆转化体鉴定的阳性质粒分子pDDID-1905,是目前包含大豆转化体特征序列最多的多靶标质粒,其构建和应用将极大地简化烦琐的阳性物质准备工作。

转基因油菜筛查阳性质粒分子的研制及应用

【目的】转基因油菜是四大转基因作物之一,是中国转基因生物安全监管的重要对象,转基因检测为转基因安全监管提供技术支撑。转基因筛查是转基因检测的第一步,筛查靶标设置不合理会导致漏检部分转基因成分。建立转基因油菜筛查策略,并研制与筛查策略配套的阳性质粒分子,将为中国的转基因油菜安全监管提供强有力的技术支撑。【方法】通过收集数据库中登记的转基因油菜品种的外源基因元件信息,分析转基因油菜品种中常用的调控元件和标记基因,基于最大筛查覆盖率原则,确定转基因油菜的筛查靶标。通过检索数据库或查询专利,收集筛查元件的核苷酸序列。一个筛查元件通常有多个标准方法,查阅各筛查元件的检测标准,分析各标准中普通PCR引物对和实时荧光PCR引物/探针组合在筛查元件核苷酸序列中的位置,根据引物探针的结合位点,确定拟构建到质粒上的各筛查元件的核苷酸序列。人工合成各筛查元件和油菜内标基因的融合序列,克隆到常用质粒pUC18,构建阳性质粒分子。采用各筛查元件的普通PCR和实时荧光PCR方法,评估阳性质粒分子的适用性。【结果】建立了转基因油菜的筛查策略,通过检测CaMV 35S启动子、FMV 35S启动子、Bar、PAT、CP4-EPSPS、NPTⅡ、HPT、NOS终止子和PinⅡ终止子共9个基因元件,可实现已知信息转基因油菜品种的全覆盖。构建出聚合9个筛查元件和2个油菜内标基因HMG I/Y和CruA的转基因油菜筛查质粒分子pYCSC-1905。9个筛查元件和2个油菜内标基因的扩增效率均在90%—110%,证明质粒分子上的不同靶标序列没有相互干扰,影响PCR的扩增效率。质粒分子pYCSC-1905可用作9个筛查元件和2个油菜内标基因的通用阳性对照,适用于国家标准(GB/T和农业农村部公告)、出入境检验检疫行业标准(SN/T)和欧盟标准。【结论】提出的转基因油菜筛查策略涵盖9个基因元件,可实现从商业化到安全评价各阶段转基因油菜的筛查检测,显著降低转基因油菜的筛查漏检率。研制的配套质粒分子pYCSC-1905为转基因油菜筛查和各基因元件标准方法的应用提供了通用标准样品,保证检测机构间检测数据的准确性和可比性。

转基因玉米T25数字PCR方法的建立与验证

转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证。转基因玉米T25为我国批准进口用作加工原料的转基因植物。为加强对T25的监管,以T25基体标准物质为研究对象,建立数字PCR方法,并选择8家实验室,采用数字PCR联合定值测定。结果表明,T25/Adh1二重数字PCR系统具有良好的扩增特异性。初始模板量在100~10 000拷贝·μL^-1之间可获得稳定、可靠的检测结果。通过多实验室协同定值说明T25/Adh1二重数字PCR方法准确、可靠。T25基体标准物质的量值为1.001 2,相对不确定度为0.001 6。研究表明建立的T25/Adh1二重数字PCR方法可以用于转基因玉米T25的定量检测,为转基因成分定量检测提供了物质基础和技术保证。

转基因玉米成分定性检测能力验证结果与分析

目的提高检测实验室对转基因玉米成分的检测能力和检测人员专业技术水平,增强实验室竞争力。方法中心实验室依据能力验证作业指导书和农业部公告的要求,参与了ACAS-PT570(2018)粮食转基因检测能力验证测试,分别对编号18-F750和18-K388样品进行PCR检测。结果 18-F750和18-K388待测样品中, CaMV35S启动子、FMV35S启动子、NOS终止子、Bt基因、CP4 EPSPS基因、bar/pat基因、59122转化体、MIR162转化体和Bt11转化体均为阳性。结论本次能力验证获得满意评价。