玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响

目的探讨玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响。方法采用MTT法检测玉屏风及其组分水煎剂对HEK-293细胞存活率的影响;采用Western blot法和RT-PCR法检测各组水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及mRNA表达的影响。结果玉屏风、白术、防风水煎剂下调大鼠肾脏和HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),玉屏风及防风水煎剂下调大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),白术水煎剂上调大鼠肾脏及HEK-293细胞OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。黄芪水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白表达无抑制作用。结论玉屏风水煎剂对OAT1/3有明显的抑制作用,玉屏风的这种抑制作用可能跟其主要成分白术、防风有关。

肾脏OAT1/3蛋白介导的玉屏风抗炎免疫药效配伍增效的药动学机制

目的本研究通过整体动物、细胞模型水平分别考察复方玉屏风(YPF)、各单味药黄芪、白术、防风以及部分有效成分对肾组织、细胞有机阴离子转运蛋白(OAT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨YPF配伍后抗炎免疫药效增强的药动学分子机制及其与肾脏OAT1/3蛋白表达、活性的相关性。方法整体动物实验:大鼠随机分为生理盐水组、YPF组、黄芪组、白术组、防风组,灌胃连续给药21天。第21 d收集各组肾组织,Western印迹法及RT-PCR法检测肾组织中OAT1/3蛋白及mRNA的表达。细胞实验:培养人胚胎肾细胞HEK-293,采用MTT法确定YPF组、黄芪组、白术组、防风组及单一活性成分升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组、白术内酯Ⅰ组、白术内酯Ⅲ组的给药浓度,并以该浓度刺激细胞,应用Western印迹法及RTPCR法检测各给药组细胞的OAT1/3蛋白及mRNA表达变化。结果YPF、防风水煎剂均能不同程度降低大鼠肾脏、HEK-293细胞中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。白术水煎液降低了大鼠肾脏、HEK-293细胞的OAT1蛋白及mRNA的表达水平,但升高了OAT3蛋白及mRNA的表达水平;白术内酯Ⅰ(30 g·L^-1)、升麻苷(30 g·L^-1)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(50 g·L^-1)能显著降低HEK-293细胞中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。白术内酯Ⅲ(30 g·L^-1)降低了HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA的表达,但明显升高OAT3蛋白及mRNA的表达水平。结论相较于黄芪,YPF、防风水煎剂和部分有效成分如升麻苷等,可明显抑制肾OAT1和OAT3 mRNA和蛋白的表达,进而抑制其底物的肾排泄,延长药物的体内作用时间,这可能即是YPF配伍增效的药动学机制之一。