猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立

为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法,本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因,分别设计引物和TaqMan探针,通过优化扩增反应条件,建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法;分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并初步应用于临床样品检测。结果显示,25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量:PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序:50℃反转录20 min,95℃预变性2 min,95℃变性5 s,55℃退火10 s,72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好,与其他猪常见病原体无交叉反应;检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此,本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪支原体肺炎(MPS)的诊断和防控工作提供支持。

紫外诱变对血红铆钉菇菌丝纤维素酶活性影响

用不同剂量的紫外线诱变血红铆钉菇菌丝体。从诱变菌株中挑取生长较好的菌丝体进行传代培养,测定第5代诱变菌株和对照株菌丝体的纤维素酶活性。结果表明,未经紫外诱变的血红铆钉菇菌丝发酵液纤维素酶活性为34.13U·g-1,而诱变4min后纤维素酶活性为51.02U·g-1,诱变8min后的酶活为46.80U·g-1。紫外诱变对血红铆钉菇菌丝纤维素酶活性有一定的影响。

2020-2022年鲁北地区猪流行性腹泻的流行病学调查

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea viruse,PEDV)属于冠状病毒科、冠状病毒属病毒,是导致猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhe,PED)发生的病原,猪是唯一感染后发病的动物,该病发病急、高度接触传播、主要通过消化道途径传播的病毒病。临床表现为呕吐、腹泻严重,呈水样、严重脱水,最后死亡。该病无明显季节性,全年均有发病,寒冷季节发病率高。

视力筛查仪在儿童视力检查中应用结果分析

目的:探讨手持式视力筛查仪在儿童视力检查中的作用.方法:对734例1432眼3～7岁儿童采用视力表和手持式视力筛查仪对比检测视力.结果:视力筛查仪与视力表检测结果无显著性差异(P＞0.05).并发现视力异常中单纯性散光所占比例最高267眼(52.5%),且随着年龄的增长,单纯性远视、单纯性远视+散光在视力异常中的比例逐渐上升,儿童近视所占比例最少5眼(1%).结论:手持式视力筛查仪在儿童视力测定中,能很好地反应儿童视力状况.特别在儿童视力普查中,能有效避免儿童不合作情况,从而准确反应儿童视力状况.

鸭甲型肝炎病毒3型和鸭圆环病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立

为建立同时检测鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)和鸭圆环病毒(DuCV)的双重荧光定量PCR方法,试验根据NCBI中收录的DHAV-3 VP1和DuCV cap基因序列,分别设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了同时检测DHAV-3和DuCV的双重荧光定量PCR,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,并采用该方法对临床样品进行检测。结果显示:建立的方法不与其他常见鸭病原发生交叉反应,对DHAV-3和DuCV的检测灵敏度分别为3.8 copies/μL和7.3 copies/μL,批内和批间变异系数均小于2%,从65份临床样品中分别检出DHAV-3和DuCV阳性样品11份和28份,与现有地方标准符合率分别为95.4%和90.8%。研究表明,建立的双重荧光定量PCR特异性强、敏感性高、重复性好,可用于DHAV-3和DuCV的快速检测。

分子生物学技术在鸭肝炎病毒检测中应用研究进展

本文综述了分子生物学技术在鸭肝炎病毒检测中应用,主要包括常规RT-PCR、套式RT-PCR、多重RT-PCR、荧光定量RT-PCR、环介导等温扩增等5种方法,对鸭病毒性肝炎防控有一定的参考价值。

快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种双重PCR方法的建立

本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法。根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重PCR检测方法的引物浓度及比例,并筛选了其最佳退火温度;用该双重PCR反应体系以其他几株阴性菌株为对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌倍比稀释后进行菌落计数,对该检测方法的敏感性进行了鉴定。M-like和GDH引物的加入量均为1μL(20pmol/L),最佳退火温度为52.3℃;该双重PCR反应体系有较高敏感性,检测马链球菌兽疫亚种和猪链球菌的敏感度分别达100和10CFU;特异性试验结果显示,常见的5种病原菌在该双重PCR体系中无特异性条带出现;临床应用该方法分离鉴定了1株猪链球菌和2株马链球菌兽疫亚种。本试验建立了一种能同时检测猪链球菌和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法,且该方法应用快速、特异且敏感。

18例牙源性面部皮肤瘘诊治体会

我们自1986年10月～1994年10月共诊治牙源性面部皮肤瘘21例。对其中记录完整的18例在治愈后随访2～8年。现将结果报告如下。

混合O血清型蛋鸡大肠杆菌的分离与鉴定

河南省某鸡场产蛋期的鸡群出现呼吸困难,死亡增多现象;病死鸡剖检可见气囊浑浊、浆膜炎、皮下广泛性出血等。无菌采集肝脏、肺脏等进行鸡胚病毒分离,未分离到病毒。病原菌的分离鉴定,获得1株细菌,分离纯培养、革兰氏染色镜检、PCR鉴定和血清型鉴定,确定为O29和O78混合血清型大肠杆菌。该分离菌对小鼠具有较强的致病性,对阿莫西林、环丙沙星2种药物产生了耐药性,但对头孢曲松、阿奇霉素等7种药物敏感。

猪流行性腹泻病毒分子生物学检测方法研究进展

文章综述了猪流行性腹泻病毒分子生物学检测方法,主要包括核酸探针、常规PCR方法、套式PCR方法、多重PCR方法、荧光定量PCR方法、环介导等温扩增等6种方法,对猪流行性腹泻防控有一定的参考价值。

禽呼肠孤病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立禽呼肠孤病毒(ARV)快速、敏感的检测方法。本研究利用RT-PCR技术扩增出ARV S1基因中298bp的保守序列,并克隆到p MD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了ARV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达4.8×101拷贝,与NDV、AIV、IBV、IBDV、ALV、REV均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床ARV的检测。

我国猪流感的流行现状及分子生物学诊断方法研究进展

猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、高度接触性猪呼吸道传染病,给养猪业造成很大的危害,猪流感病毒也可感染人类,威胁人类的生命健康。文章综述了我国猪流感的流行现状及分子生物学诊断方法的研究进展情况,以期对猪流感的诊断和防控工作提供参考。

禽流感病毒分子生物学诊断方法研究进展

禽流感是流感病毒引起的一种禽类传染病,同时也是一种人和动物之间的高度传染性疾病。本文综述了禽流感病毒分子生物学诊断方法研究进展,主要包括常规RT-PCR、套式RT-PCR、多重RT-PCR、荧光定量RT-PCR、环介导等温扩增等5种方法,对禽流感防控有一定的参考价值。

猪口蹄疫的诊断及防控措施

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪感染口蹄疫后主要表现为蹄部、口腔、鼻盘、乳腺等部位出现水疱,该病传染性强、传播速度快、危害严重,给养猪业造成了严重的经济损失,因此,做好该病的防控工作意义重大。文章对口蹄疫的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方面进行阐述,并提出了有效的防控措施,以期为猪口蹄疫的防控工作提供参考。

我国猪圆环病毒的分类、流行现状及分子生物学检测方法研究进展

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒(PCV)感染后引起的一类疾病,各日龄和品种猪均可发生,其中仔猪和母猪受到的危害严重。猪圆环病毒病发病率高,分布广泛,在世界主要养猪国家均有发生和流行,给我国养猪业造成了严重的经济损失。文章综述了我国PCV的分类及流行现状,并对PCV分子生物学检测方法研究进展进行了综述,以期为猪场圆环病毒相关疾病的防控提供参考。

禽呼肠孤病毒分子生物学诊断技术及基因工程疫苗的研究进展

本文综述了禽呼肠孤病毒分子生物学诊断方法,主要包括核酸探针、RT-PCR方法、套式RT-PCR方法、多重RT-PCR方法、荧光定量RT-PCR方法、环介导等温扩增方法等6种方法,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了着重阐述,对禽呼肠孤病毒病的诊断和防控有一定的参考价值。

猪轮状病毒病的流行与防控措施

猪轮状病毒病是由猪轮状病毒引起的一种病毒传染病。临床表现为水样腹泻、呕吐、嗜睡、脱水、厌食、迅速消瘦。一年四季均可发病,冬春季节多发。该病发病急,传播速度快,疫苗免疫效果不理想,给养猪业造成了严重的经济损失。文章对猪轮状病毒病的病原学、流行病学、临床症状和病理变化、实验室诊断及防控措施等方面进行了较全面的阐述,以期为猪轮状病毒病的防控工作提供参考。

猪细小病毒分子生物学诊断技术及基因工程疫苗的研究进展

文章论述了猪细小病毒分子生物学诊断方法,包括常规PCR方法、多重PCR方法、荧光定量PCR方法、环介导等温扩增技术、基因芯片等,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了着重阐述。

基于gyrB基因的地衣芽孢杆菌PCR快速检测方法的建立

根据地衣芽孢杆菌的gyrB基因序列设计一对引物,扩增片段大小为507bp的基因片段,该方法对地衣芽孢杆菌DNA的扩增结果为阳性,对照菌株扩增结果均为阴性,对地衣芽孢杆菌检测的灵敏性为1pg总DNA量,成功建立了地衣芽孢杆菌PCR检测方法,该方法具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,为地衣芽孢杆菌的分离及鉴定奠定了良好的基础。

2015年鲁北地区猪病毒病检测结果与分析

为了准确把握鲁北地区猪病毒性疾病的发病情况,指导养殖场（户）做好疫苗免疫与防控工作,依托鲁北兽医诊断中心,对2015年鲁北地区各猪场送检的病料检测结果进行了统计分析,主要包括猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、