马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定

RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和354bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVYCP同源的hairpin RNA。结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染。

农杆菌渗入法介导的基因瞬时表达技术及应用

农杆菌渗入法是在植物中瞬时表达外源基因的一种方法,该方法通过在植物叶片上注射农杆菌,使目的基因转入植物细胞中进行快速表达。本文综述了农杆菌渗入法的原理、技术流程、影响因素及其应用,其应用主要涉及外源基因的表达、检测转基因的表达、启动子分析、转录后基因沉默、抑制子功能鉴定、细胞定位以及基因相互作用等方面。随着技术的进一步完善,我们相信该技术将成为转基因育种领域的重要的手段。

穿心莲内酯3,19-缩醛(酮)衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响

目的：评价穿心莲内酯及其衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响，用于指导以穿心莲内酯为先导化合物的新型免疫调节剂的合成。方法：采用MTT法，在1．56～12．50umol·L^-1定量考察穿心莲内酯及其3，19-缩醛（酮）衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果：穿心莲内酯对丝裂原诱导的淋巴细胞增殖活性有显著的抑制作用。通过半合成改造得到的3，19-缩醛（酮）衍生物可使抑制活性显著提高，但是部分衍生物在1．56～6．25umol·L^-1。内表现出促进T或／和B淋巴细胞增殖的作用。结论：穿心莲内酯3，19-缩醛（酮）衍生物对穿心莲内酯作为开发免疫调节剂的先导化合物有重要价值和潜力。

TC-RT-PCR技术在马铃薯病毒检测及其基因克隆上的应用

利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)技术从马铃薯病毒发病叶片中检测并克隆到PVX、PVY和PLRV3种病毒及其外壳蛋白基因的全长序列,长度分别为714、804和627 bp。结果表明,TC-RT-PCR技术是一种简单,快捷,灵敏度高的方法,在马铃薯病毒的检测和相关基因的克隆中将会得到很好的应用。

贵州马铃薯Y病毒外壳蛋白基因的克隆与遗传分析

本研究从中国贵州不同海拔地区采集感染马铃薯Y病毒(PVY)病害叶片,利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)方法克隆到长度为804bp的8个目的片段,序列分析表明为PVY外壳蛋白(PVY-CP)基因。通过与已经发表的PVY-CP基因序列进行比较和遗传分析,并根据PVY的CP基因全长和5'端序列构建系统发育树,结果表明,本研究分离的PVY,7株为O株系,1株为NTN株系。

药用植物鹅毛玉凤花的组织培养与植株再生

1 植物名称 鹅毛玉凤花[Habenaria dentata（Sw．）Schltr．]。 2 材料类别 成熟种子。 3 培养条件 以1／2MS为基本培养基。（1）种子萌发培养基：1／2MS＋NAA0．5mg·L^-1（单位下同）＋0．2％活性炭和1／2MS＋NAA0．5；

药用植物鹅毛玉凤花胚培养的研究

以药用植物鹅毛玉凤花的种子胚为外植体进行培养，研究不同无机盐浓度、活性炭浓度、NAA浓度、碳源、pH值及光照时间等因子对其胚萌发的影响。结果表明：以固体1／2MS为基本培养基，添加NAA0.5mg／L＋3％蔗糖和0.1％～0.5％活性炭，培养基pH为5.5～6.0时对种胚的萌发较好；先黑暗培养再光照条件培养可以提高胚的萌发率，达82％。

抗马铃薯Y病毒的ihpRNA高效茎长度的选择

为获得干涉基因片段的最小有效干涉长度,利用Gateway技术,构建出4个具有不同马铃薯Y病毒（PVY）外壳蛋白基因片段的RNAi载体（Phe-Y246、Phe-Y199、Phe-Y143和Phe-Y103）,瞬时表达检测这4个干涉载体的干涉效果。结果表明：20株浸润有Phe-Y143载体的抗病毒植株比例达100%,Phe-Y246、Phe-Y199和Phe-Y103载体浸润植株的抗病毒比例分别为85%、90%和80%。表明,PVY外壳蛋白基因的高效抗性片段的茎长度为104~143 bp。

藻蓝蛋白色素稳定性及其递送体系研究进展

藻类作为一类具有经济价值的养殖对象,在世界范围内广泛培养。藻类藻胆体中的光能色素--藻蓝蛋白以天然的蓝色、广泛的生理功能特性而受到越来越多的关注,其抗炎、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等生理功能已被充分验证。然而,纯化的藻蓝蛋白水溶后易发生沉淀或解离,对温度、pH值、光照、离子等环境因素表现出较强的敏感性。在其色泽稳态方面,通过颗粒、乳液等纳米结构提高藻蓝蛋白的稳定性,从而在食品加工、生产和储运等过程中保持稳定。在其活性保持方面,通过对藻蓝蛋白进行物理、化学改性,或通过构建纳米载体递送藻蓝蛋白,以提高藻蓝蛋白的生物可利用度。此外,藻蓝蛋白具备荧光大分子的特性,在纳米壁材、金属纳米颗粒、荧光探针等领域有较大的应用空间。本综述对现有研究成果进行归纳总结,为藻蓝蛋白的开发利用提供参考。

瞬时表达比较2种不同的RNAi载体的干涉效果

RNAi with natural defence mechanism of homologous RNA degradation is widely used in research of antiviral plant.It is important to construct a highly efficent RNAi vector for transgenic plants of virus resis-tance.In this study,part fragments of coat protein gene of Potato virus Y(PVY)(451-750 bp) were inserted into the two expression vectors.Vector pROKY300 without intron and pHelY300 with PDK and CAT introns on the hpRNA stem were constructed.The silence efficiency of virus resistance of the two vectors was investigated as 88%(22/25)for pROKY300 and 92%(23/25) for pHelY300 through transient expression mediated by agroinfiltration.The results showed that both vectors were highly antiviral and elucidated the validity of RNAi-medicates resistance to virus.