海南自由贸易港环境下人体寄生虫学教学体系重构机遇、依托和方向

在海南自由贸易港大环境下,有必要抓住机遇,依托“海南自由贸易港战略”、“海南地缘与疾病特点”、“学校办学特色和学科建设”等,围绕“全球视角”、“热带医学”、“新医科”、“全健康”、“全科医学”、“课程思政”对海南医学院(海南医学院)人体寄生虫学课程教学体系进行重构,推进培养有利于海南自由贸易港建设的高层次创新型人才。

曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I(SmCaMK I)基因的生物信息学分析与表达鉴定

目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,SmCaMK I进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析。结果 SmCaMK I是一个全长基因,由1 068bp组成,编码355个氨基酸。SmCaMK I与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89%和88%,与人的CaMK I氨基酸序列一致性仅仅只有44%。分子进化树分析中SmCaMK I与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远。与人类CaMK I相比,淋巴细胞表位具有统计学差异。SmCaMK I能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表。结论SmCaMK I是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白。

曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶的生物信息学分析

目的通过生物信息学预测曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶(Smcathepsin L样蛋白酶)的生物学特征及其潜在功能和结构,为下一步Smcathepsin L样蛋白酶参与寄生虫和宿主相互作用过程研究提供依据。方法通过NCBI的ORF finder工具对Smcathepsin L样蛋白酶的开放阅读框(ORF)进行分析,利用Ex PASy网站进行蛋白的物理化学参数、信号肽、跨膜螺旋和潜在分子生物学功能的预测,通过NCBI/BLAST对蛋白保守功能域进行预测。从NCBI网站获取不同物种的cathepsin L样蛋白酶序列,并利用Vector NTI suit 8.0和Tree View软件进行分析。利用SWISS-MODEL网站和SPDBV4.10软件分析Smcathepsin L样蛋白酶的三维空间结构。结果 Smcathepsin L样蛋白酶是一个全长基因,编码336个氨基酸。蛋白由2个典型的cathepsin L样蛋白酶结构域组成,序列当中有信号肽,是一个稳定的可溶性蛋白分子。三维空间立体结构分析结果显示Smcathepsin L样蛋白酶是一个保守的蛋白。Smcathepsin L样蛋白酶编码氨基酸序列与细粒棘球绦虫、链状带绦虫、多房棘球绦虫和人的cathepsin L样蛋白酶基因的同源性分别是50%、50%、49%和46%。分子进化分析显示Smcathepsin L样蛋白酶与日本血吸虫、多房棘球绦虫和链状带绦虫亲源性更近,而与其他物种,例如原虫、线虫和哺乳动物亲源性较远。结论 Smcathepsin L样蛋白酶可能是一个潜在的分泌蛋白,该蛋白能在胞外发挥作用,即在寄生虫的消化、转移、入侵及宿主-寄生虫相互作用中起着重要的作用,是一个具有潜在研究价值的多功能分子。

曼氏迭宫绦虫中亮氨酸氨基肽酶基因的生物信息学分析和转录水平检测

目的检测曼氏迭宫绦虫的3个亮氨酸氨基肽酶亚类(leucine aminopeptidases of Spirometra mansoni,Sm LAPs)基因在虫体不同发育阶段的转录水平,为进一步病原诊断研究奠定基础。方法运用生物信息学相关软件对3个亮氨酸氨基肽酶亚类编码蛋白的氨基酸序列的功能区域、免疫学特征、信号肽和跨膜区预测分析。应用Real time PCR方法检测Sm LAPs在曼氏迭宫绦虫的成节、孕节和裂头蚴阶段的转录水平。结果对Sm LAPs编码氨基酸序列的保守区域进行比对,Sm LAPa与Sm LAPb、Sm LAPc的氨基酸序列一致性均为38%,Sm LAPb和Sm LAPc的一致性也只有44%。多功能位点分析发现,Sm LAPs均含有底物结合位点、锌离子结合位点和多肽结合位点。在B细胞线性表位预测结果显示,Sm LAPa有13个、Sm LAPb有14个、Sm LAPc有13个。T细胞表位预测中,Sm LAPa有12个、Sm LAPb有13个、Sm LAPc有14个。3个Sm LAPs亚类序列中均含有一个强烈的信号肽,并且均没有跨膜区域。在虫体各个发育阶段的转录水平检测中,在成节阶段,Sm LAPb的转录水平是Sm LAPa的1.34倍,Sm LAPc的转录水平是Sm LAPa的46.53倍。在孕节阶段,Sm LAPb的转录水平是Sm LAPa的1.96倍,Sm LAPc的转录水平是Sm LAPa的56.89倍。在裂头蚴阶段,只有Sm LAPc有转录,没有检测到Sm LAPa和Sm LAPb的转录。结论在3个Sm LAPs亚类基因中,Sm LAPc是裂头蚴病更有价值的免疫诊断分子。

形态实验课手机质控平台构建及推广前探索

在形态实验课手机质控平台(平台)推广过程中遇到阻力的最大因素是教师课后工作量加大。为此,课题组进行了减低教师课后工作量的探索,即作业批改放权于生。

常用蚊媒监测方法概述

媒介蚊虫的种群密度和季节消长对于蚊媒传染病的防治具有重要意义,本文对蚊媒监测的常用方法进行了简单的比较分析。

海口市居民蚊媒防治知识态度行为现状调查

目的了解海口市居民有关蚊媒防制知识、态度和行为情况,为今后更好地开展有针对性的干预措施提供依据。方法采用统一设计的调查问卷,于2017年7-9月在海口市4个区各随机选择两个调查点,每个调查点随机抽取约150个家庭,每个家庭选一位18岁以上的成人作为调查对象进行答卷。结果本次调查共发放问卷1 020份,回收有效问卷988份,有效问卷回收率为96.9%。居民蚊虫防治知识总知晓率为54.8%,其中城区居民总知晓率为58.9%,郊区居民为50.6%,城区居民知晓率显著高于郊区(P<0.05)。不同人口特征(性别、地区、文化程度、年龄和职业)的居民对蚊媒防治知识的知晓率差异有统计学意义(P<0.05)。81.2%的居民意识到蚊虫叮咬会传播疾病,分别有67.1%、52.7%及31.5%知道登革热、疟疾和寨卡病毒病由蚊虫传播。63.8%知道蚊子有雌雄之分,33.6%知道雌蚊吸血。防治态度方面,51.1%的居民迫切希望政府和社区增加灭蚊次数,86.1%的居民认为非常有必要防蚊灭蚊。结论目前海口市居民的蚊媒防治知识需要进一步提高,卫生防疫部门与地方政府应重视开展蚊媒及其传播疾病的健康教育活动。

一种基于实时荧光定量PCR的寨卡病毒检测方法的建立

目的建立一种基于实时荧光定量PCR技术的寨卡病毒检测方法。方法根据代表性亚洲型、非洲型寨卡病毒株NS5基因序列,设计特异性引物ZK-1F/R、ZK-2F/R;利用PCR、Real-time PCR方法对引物特异性、灵敏度、可重复性进行评价和优化;利用寨卡病毒感染细胞对本方法进行验证。结果 PCR结果表明两对引物的特异性良好,其Real-time PCR检测灵敏度分别为1.0×103copies/μL和1.0×101copies/μL,扩增效率分别为0.68和0.90,说明引物ZK-2F/R的综合效果优于ZK-1F/R,通过优化实验条件建立基于引物ZK-2F/R的实时荧光定量PCR检测方法,对含有寨卡病毒PRVABC59株和MR766株的样本进行检测,结果分别为9.0×104copies/μL、8.5×104copies/μL。结论本研究建立了一种检测寨卡病毒的方法,可用于临床患者ZIKV感染的检测和预防。

广州市流通纸币细菌污染状况的调查研究

目的纸币的反复使用易受到细菌的污染,可能对人体健康造成危害。本研究目的是了解广州市市面流通纸币的卫生状况,为进一步加强其管理与保洁、消毒工作提供科学依据。方法对广州市内商铺,银行进行纸币的随机抽样共371张(来自银行80张,非银行291张),进行表面菌落总数的测定和纸币表面致病菌检出率的测定,用SPSS13.0软件对测定结果进行统计分析。结果研究结果显示各种面值的纸币表面菌落总数为164.33cfu/cm2,来源于银行的322.22cfu/cm2,非银行的75.97cfu/cm2,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的检出率分别为84.0%,16.0%,3.3%。结论银行和非银行的纸币污染状况差异有统计学意义(P<0.05),大肠埃希菌污染率高提示受污染严重,对病菌的传播有重要的意义。

2009年广州市市区职业人群对流通纸币卫生的观念和习惯调查

[目的]了解不同职业人群对流通纸币卫生的观念与使用习惯,为进一步开展有关内容的健康教育提供支持和依据。[方法]2009年,在广州市市区采用分层的单纯随机抽样方法,在不同职业人群集中区域抽取部分人群进行调查。[结果]调查425人,认为纸币脏的占83.29%,不脏的占8.94%,不清楚的占7.76%。认为纸币脏者所占比例,银行职员为41.43%,医务工作者为30.43%,餐饮工作者为9.64%,学生为17.50%,其他职业者为87.86%(P<0.01)。全部调查对象中,认为纸币可以消毒的占87.86%,认为纸币可以传播疾病的占87.06%;使用纸币卫生习惯优秀、良好、差的分别占3.06%、40.71%、56.24%。使用纸币卫生习惯优良者所占比例,医务工作者为63.94%,餐饮工作者为40.96%,银行职员为34.29%,学生为20.00%,其他职业者为45.00%(P<0.01)。[结论]广州市市区职业人群对于纸币的卫生意识以及使用习惯存在问题。

应用PCR技术研究白纹伊蚊的吸血习性

目的应用PCR技术鉴定登革热传播媒介白纹伊蚊胃血来源,研究白纹伊蚊的吸血习性。方法在实验室条件下,将6种动物(鸡、猫、狗、鸽、野鼠、小鼠)分别放入6个小玻璃房,同时,将6种动物放入一个大玻璃房,然后放入已经饥饿18h的白纹伊蚊雌蚊,3h后采集吸血蚊,应用PCR技术鉴定白纹伊蚊胃血来源。现场调查则通过紫外诱蚊灯和BG-SentinelTrap采集吸血蚊,利用实验室建立的PCR体系鉴定白纹伊蚊胃血来源。结果在不同空间内,白纹伊蚊对野鼠的平均吸血率最高,为44.45%,其余依次为鸡、猫、小鼠、狗、鸽(38.27%、36.53%、35.70%、34.94%、24.75%)。在同一空间内,白纹伊蚊对鸡、小鼠、猫、野鼠、狗、鸽的吸血率依次为12.36%、7.09%、6.41%、4.81%、2.52%、1.60%。在现场收集到的饱血白纹伊蚊共13只,其中吸狗血的有7只,吸人血的白纹伊蚊有2只,多重吸血(小鼠和猫)的白纹伊蚊有1只。结论 PCR技术可鉴定白蚊伊蚊胃血来源,结果稳定可靠;白纹伊蚊不仅嗜吸人血,也可兼吸多种常见的动物血。

江苏省徐州市2018年白纹伊蚊的分布及种群密度研究

目的调查江苏省徐州市重要媒介蚊虫白纹伊蚊的分布及种群密度,评估登革热在徐州市暴发流行的风险。方法于2018年1-12月,采用诱蚊诱卵器法对白纹伊蚊进行持续监测,采用χ2检验分析不同月份、不同生境和不同地区的白纹伊蚊诱蚊诱卵指数(MOI)之间的差异,观察徐州市白纹伊蚊的季节消长趋势及各生境和地区的白纹伊蚊分布差异。结果据2018年监测数据显示,不同月份、不同生境和不同地区的白纹伊蚊分布不同。白纹伊蚊自5月开始出现,随后蚊虫密度逐渐增高,8月达到高峰(MOI为64.24),其后逐渐降低。在蚊虫盛行的季节,居民区的白纹伊蚊MOI最高为36.33,公园(MOI为28.19)和学校(MOI为24.62)白纹伊蚊MOI差异无统计学意义(χ^2=1.722,P=0.107);居民区和非居民区白纹伊蚊MOI在6月(χ^2=4.591,P=0.038)、9月(χ^2=18.100,P=0.001)、10月(χ^2=3.734,P=0.035)差异有统计学意义。另外,对比分析2018年徐州市云龙、铜山、开发和鼓楼区白纹伊蚊MOI,其中云龙区和开发区(χ^2=21.010,P<0.01)、开发区和鼓楼区(χ^2=19.700,P<0.01)、开发区和铜山区(χ^2=12.500,P<0.01)的白纹伊蚊MOI差异有统计学意义,且开发区白纹伊蚊的MOI最高,达41.08。结论徐州地区应提高对伊蚊的监测力度,监测重心应偏向居民区。采用敏感、科学、客观的监测方法,及时发现伊蚊密度升高并进行防控,可有效降低蚊媒传染病在徐州市暴发流行的风险。