成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养

目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后细胞SMAD家族成员2/3(Smad2/3)蛋白及磷酸化水平。结果差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3 d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5 d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似"S"形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8法显示在第3~5天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加。结论建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法。

去泛素化酶BRCC36功能的研究进展

去泛素化酶是自然界中广泛存在于真核细胞内的一种生物活性酶,它与泛素化酶的作用相反,可将泛素或泛素链从底物上去除。BRCC36（BRCA1-BRCA2-containing complex subunit 36）是2003年发现的去泛素化酶家族新成员,属于JAMM（Jab1/MPN/Mov34 metalloenzyme）/MPN＋（Mpr1/Pad1 Nterminal）亚类,参于DNA损伤修复、细胞信号转导及细胞周期控制等多种细胞活动，在肿瘤发生、血管生成、抗心肌损伤过程中均发挥重要作用。

如何从办证窗口做好图书馆的读者服务工作

从更新办证环节为读者服务的工作观念和适应图书馆的发展必须提高自身素质两个方面,阐述作为形象窗口的办证处,如何做好读者服务工作。

高中数学学困生的诊断与干预策略

高中数学以其计算量大、知识量大、知识联系紧密、数学语言符号高度抽象、逻辑思维严密等特点,致使很多学生被困在了数学这片浩瀚的大海中,成为了“学困生”.数学是高中阶段重要的学科之一,不仅在高考中占据一壁江山,同时也对学生日后的生活、学习和工作有着深远的影响.所以,如何遵循高中新课标的要求,帮助数学“学困生”摆脱学习困境,是摆在每一位高中数学教师眼前的重要课题.本文,笔者结合自己的教学经验,从四个方面就数学学困生的转化展开简单探讨,以期达到抛砖引玉之效,启发广大同仁重视学困生这一特殊群体,推动学生的全面发展.

麝香通心滴丸联合常规治疗对心肌缺血再灌注损伤患者的临床疗效分析

目的探讨麝香通心滴丸联合常规治疗对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)患者的临床疗效和相关机制。方法选取96例经冠状动脉介入(PCI)治疗发生MIRI的急性心肌梗死(AMI)患者为研究对象,将其分为联合组和常规组,每组48例。联合组在常规组基础上加用麝香通心滴丸,2组均连续治疗1个月。比较2组治疗前后心功能及心脏病理性重构指标、血清心肌损伤标志物、血清炎症相关指标水平及治疗效果。结果联合组治疗总有效率为97.83%,高于常规组的87.50%,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、每搏心输出量(SV)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)、N-末端脑钠肽前体(NT-ProBNP)较治疗前均有所改善,且联合组较常规组改善效果更显著,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者治疗后血清NOD样受体家族3(NLRP3)炎症小体、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平均下降,且联合组低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论麝香通心滴丸联合常规治疗可缓解MIRI患者持续性心肌损伤,改善心功能和心脏病理性重构,治疗效果优于单纯西药治疗。

引导学生反思 提高数学学习能力

反思是学好数学的关键所在,也是数学思维活动的核心与动力.反思不仅仅是回顾过去,更重要的是在反思中学习新知识,提高学习效率.本文主要从数学概念与定理的形成过程、知识间的内在联系、解题的全过程、课堂笔记与错题本四个方面引导学生反思,以提高学生的数学学习能力.

TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰对小鼠心脏成纤维细胞活力和分化的影响

目的:探讨TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰(O-连接的N-乙酰葡萄糖胺修饰)对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞(MCFs)在缺氧/复氧(H/R)后活力和分化的影响及机制。方法:原代培养的MCFs缺氧6 h再恢复常氧24 h建立细胞H/R模型,通过感染O-连接的N-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)重组腺病毒提高MCFs氧连糖基化水平,将MCFs随机分组为空载腺病毒预处理+常氧(Ad. Null+Ctrl)组、空载腺病毒预处理+H/R(Ad. Null+H/R)组、OGT腺病毒预处理+常氧(Ad. OGT+Ctrl)组和OGT腺病毒预处理+H/R(Ad. OGT+H/R)组。RT-qPCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18 mRNA水平;Western blot检测p-Smad3、Smad3、OGT和炎症介质蛋白水平;免疫共沉淀实验检测Smad3修饰状态及蛋白间相互结合;CCK-8法检测细胞活力;免疫荧光共聚焦显示Smad3亚细胞定位。结果:H/R致使MCFs氧连糖基化水平下降,过表达OGT显著缓解了H/R诱导的细胞氧连糖基化水平降低(P<0.05)。提高氧连糖基化水平抑制H/R诱导的MCFs活力和向肌成纤维细胞分化,减少I型胶原合成和炎症介质IL-1β/IL-18表达(P<0.05);TGF-β1信号轴胞内关键分子Smad3氧连糖基化水平升高,并且Smad3磷酸化及核转位受阻(P<0.05)。结论:氧连糖基化修饰竞争性抑制Smad3 Ser423/425磷酸化并使Smad3滞留于胞质,负向调控TGF-β1/Smad3信号轴,抑制H/R对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞功能变化的诱导。

O-GlcNAc修饰调控NLRP3炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的:体外探讨O-连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及可能的机制。方法:对数生长期的H9c2大鼠心肌细胞感染O-GlcNAc转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)过表达腺病毒(Ad-OGT)以提高细胞内OGlcNAc修饰水平,通过缺氧6 h再恢复常氧12 h建立细胞H/R模型。将细胞随机分为空载腺病毒(Ad-Null)预处理常氧对照细胞组、Ad-Null预处理H/R细胞组、Ad-OGT预处理常氧对照细胞组和Ad-OGT预处理H/R细胞组。通过RT-qPCR检测炎症细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的mRNA水平;TUNEL染色检测细胞凋亡;Western blot测定NLRP3炎症小体组成蛋白[NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)和caspase-1]及其效应产物表达;蛋白质免疫共沉淀法检测NLRP3炎症小体组成蛋白相互作用及修饰状态。LPS诱导NLRP3炎症小体表达,再次验证OGlcNAc修饰的调节作用。结果:H/R导致细胞内O-GlcNAc修饰水平显著降低,过表达OGT可显著对抗H/R损伤造成的O-GlcNAc修饰水平下降(P<0.05)。与Ad-Null预处理H/R细胞组相比,Ad-OGT预处理H/R细胞组NLRP3炎症小体活化后效应产物IL-1β和IL-18 mRNA转录被抑制、相应蛋白表达水平降低、细胞凋亡现象减轻(P<0.05);虽然NLRP3炎症小体的3种组成蛋白(NLRP3、ASC和caspase-1)表达水平并无显著下调(P>0.05),但相互结合能力减弱(P<0.05),同时检测到NLRP3的O-GlcNAc修饰程度显著增强(P<0.05)。通过刺激物LPS诱导NLRP3炎症小体表达激活,再次验证了NLRP3的O-GlcNAc修饰状态对炎症小体组分相互结合的影响。结论:NLRP3发生OGlcNAc修饰后可通过阻碍NLRP3炎症小体的组装活化缓解H/R对体外培养H9c2大鼠心肌细胞的损伤。

大鼠原代肺动脉平滑肌细胞的分离鉴定及低氧对其增殖的影响

利用改良的组织贴壁法原代分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),探讨低氧对其增殖的影响。显微操作无菌下取SD大鼠肺组织,分离肺动脉、剥离肺动脉中层,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫荧光法和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)鉴定PASMCs纯度。常氧和低氧下体外培养PASMCs,CCK-8法测定增殖。成功培养大鼠原代PASMCs,细胞生长及传代稳定,纯度高达90%以上。PASMCs在低氧下的增殖能力明显低于常氧(P<0.05)。可选择内径合适、雄性来源的PASMCs作为体外研究对象。

“小金库”问题的立法现状与立法建议

多年来，我国“小金库”问题的治理取得了明显成效．但不可否认，“小金库”这一顽疾依然存在，甚至在一些地区和部门还相当严重，人民群众对此深恶痛绝。由于“小金库”问题成因复杂，治理难，根治更难，故彻底清理“小金库”既是一个系统而复杂的现实课题，也是一个重大而艰巨的理论课题。

母婴产品跨境电子商务现状问题及对策研究

面对快速发展的跨境电商,母婴跨境电商也发展迅速。2016年是中国母婴跨境电商改革的一年。二孩政策开放后,新生儿出世大潮行将而至,由此催生的中国母婴市场可抵至两万亿的规模。我国跨境母婴电商通过这几年的开展,许多亟待解决问题的渐渐浮出水面。本文主要研究狭义的母婴产品跨境电商,即B2C模式母婴产品跨境电商。母婴行业近几年来发展相对迅速,我国现有超越7000万0-3岁的婴幼儿人口,基数占比较大,具备良好的消费者市场。从2013年开始,大批的母婴电商不再局限在国内母婴电商品牌而是经过海外淘的形式来吸引消费者。虽然母婴市场变动莫测,各电商竞争激烈,然而是收到规模的制约,绝大多数的市场份额照旧被综合性的电商平台瓜分。天猫国际、京东全球购等大型电商平台攻克了母婴市场的一大份额。

栽培措施对烟草花叶病的影响

烟草花叶病俗称“烟癌”，是河南省烟草主要病害之一，每年均有发生。据调查，１９９６年柘城县８０％的烟田均不同程度地感染了烟草花叶病，烟叶平均减产３０％，且品质下降。鉴此，１９９７年，我们进行了几种不同栽培措施（地膜覆盖、施氮量、移栽期等）对花叶病影响的...

颈动脉超声联合平均血小板体积对冠心病患者急性心肌梗死的预判价值

目的探讨颈动脉超声联合血小板平均体积(mean platelet volume,MPV)检测对稳定型冠心病(coronary heart disease,CHD)患者发生急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的临床预判价值。方法选取2020年1~6月在扬州大学附属医院确诊的384例CHD患者并分为AMI组和非AMI组,对比分析两组患者临床特征、颈动脉内膜中层厚度(carotid intima-media thickness,CIMT)、颈动脉斑块(carotid plaques,CPs)数和性质、斑块比例、心肌损伤标志物、血脂分析、血小板平均体积(mean platelet volume,MPV)的差异,采用Logistic二元回归分析影响CHD患者发生AMI的危险因素及相关性,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估颈动脉超声指标、MPV单独及联合检测的预判价值和效能。结果AMI组患者CIMT、CPs、斑块发生比、MPV均高于非AMI组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素回归分析显示:CIMT和MPV与CHD患者发生AMI风险呈正相关性(P<0.05);单独预判CHD患者发生AMI的ROC曲线下面积(area under ROC curve,AUC)、截断值、敏感度、特异性为0.638、1.46mm、62.47%、79.63%,MPV为0.684、11.79fL、71.52%、82.44%,联合预判AUC为0.842效能显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CIMT和MPV是CHD患者发生AMI的独立风险因素,联合颈动脉超声和MPV检测能够显著提高预判CHD患者发生AMI的效能,有良好的临床实用价值。

烤烟接茬种植技术调查研究

近几年,受烟粮争地及烟田套种和长期连作种植模式的影响,烟叶的种植面积难以稳定,内在质量也出现了不同程度的下降。柘城县分公司结合本县实际,探索研究烟叶种植新模式。通过烟叶-娃娃菜接茬和烟叶-胡萝卜接茬等模式的筛选,最终选定烟叶-娃娃菜接茬种植模式。由于接茬作物娃娃菜的生长周期较短,只有50天左右,在初霜冻时就可以收获,不影响烟田冬耕灭茬杀虫,也不影响来年的烟叶生产,故此,烟叶-娃娃菜种植模式是成功的选择。经过近几年的试验示范,该模式已逐渐被烟农接受,为现代烟草农业的迈进打下了坚实基础。

smad蛋白在心血管疾病中作用的研究进展

smad（smallmotheragainstdecapentaplegic）蛋白是转化生长因子（TGF）信号通路中重要的细胞内作用底物，目前共发现8个亚型，人类smad2／4／7定位在18号染色体长臂2区1带，smad3／6定位在15号染色体长臂2区，smadl定位在4号染色体长臂3区1带，smad5定位在5号染色体长臂3区1带，smad8定位在13号染色体长臂12区。TGF是一组包含50多个成员的超家族，包括转化生长因子β（TGF—β）、骨成形蛋白（BMP）和活化素（activin）3类。业已证实TGF／smad信号通路在细胞的分化、生长、增殖、凋亡、迁移、黏附，免疫应答，以及炎症反应中均发挥着重要作用。

骨形态发生蛋白2型受体基因在肺动脉高压发病机制中的研究进展

肺动脉高压（pulmonaryarterialhypertension，PAH）是一种罕见的以肺末梢小动脉进行性重构、肺动脉内压力异常升高为特征的临床疾病。

蛋白质氧连糖基化修饰对肿瘤坏死因子α诱导的小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导心肌成纤维细胞(CF)增殖,探讨快速提高细胞内氧连糖基化(O-GlcNAc)水平对CF功能及P65、核因子κB信号通路负向调控因子TNFAIP3蛋白表达的影响。方法胰酶联合Ⅳ型胶原酶消化成年小鼠心脏组织培养CF,差速贴壁法分离纯化原代CF,波形蛋白免疫荧光染色鉴定细胞类型。将CF分为空白对照组;TNF-α(10μg/L)组;Thiamet-G(150μmol/L)预处理+空白对照组;Thiamet-G(150μmol/L)预处理+TNF-α(10μg/L)组。活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测CF增殖,细胞划痕实验评价迁移能力,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TNF-α靶基因血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达,Western blot检测磷酸化P65(p-P65)、总P65(t-P65)、TNFAIP3蛋白水平。结果原代培养的心脏细胞经波形蛋白免疫荧光染色鉴定为CF,纯度>95%。Thiamet-G预处理CF 2h即可观察到全细胞蛋白O-GlcNAc水平显著升高(3.22±0.32比1.00±0.22,P<0.05);与空白对照组相比,TNF-α处理组可激活核因子κB通路(p-P65增高:3.13±0.27比1.00±0.13,P<0.05),诱导靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表达(4.21±0.37比1.00±0.21,11.26±0.98比1.00±0.32,均P<0.05),明显提高CF增殖及迁移能力(1.74±0.21比0.48±0.11,P<0.05);与TNF-α处理组相比,Thiamet-G预处理后TNF-α诱导的CF增殖及迁移被抑制(1.04±0.07比1.74±0.21,P<0.05),靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表达减少(2.09±0.13比4.21±0.37,3.13±0.85比11.26±0.98,均P<0.05),P65蛋白总水平在12h无明显变化(1.08±0.13比1.00±0.24,P>0.05),但p-P65水平下降(1.82±0.08比3.13±0.21,P<0.05),TNFAIP3蛋白表达显著上调(5.86±0.61比2.95±0.33,P<0.05)。结论快速提高细胞内O-GlcNAc水平对TNF-α诱导的成年小鼠CF增殖和迁移具有抑制作用,其作用机制可能与上调TNFAIP3的表达有关。

“小金库”概念浅析

“小金库”概念的界定是开展“小金库”治理工作中最基础的内容。只有解决了概念界定问题，才能准确把握“小金库”的内涵和外延，进而判定“小金库”的“是”与“非”，决定“罚”与“非罚”。

推行再审调解检法协作

密云县人民检察院在全市首创“再审调解检法协作机制”，强化民事行政抗诉案件的审判监督，妥善化解当事人之间的矛盾。这项制度包括：定期与法院研讨抗诉案件；参与再审程序的调解工作：督促当事人即时履行达成调解的协议内容；及时纠正法院裁判存在的错误。该机制的实行使民行抗诉工作向检法协作再审调解结案的方式转变，得到了上级部门的充分肯定。

父亲的梦

“不错，今年桃子长得还行，开春以来雨水比较多，也没闹冻灾、虫灾，过几天再上茬肥催一催……”父亲扒拉着树权，笑呵呵地说。连续几天的阴雨过后，天已经放晴，泥土和青草散发着田野里特有的清香，一棵棵桃树长得十分壮硕；桃子长势也很喜人，已经有玻璃球大，掩映在绿叶之间，让人不自觉地憧憬着“红满衣”后的丰收景象。雨后的阳光分外刺目，父亲本就晒成古铜色的脸在阳光中显得更加红润，一笑起来，脸上的皱纹更深了，但看得出来笑容里满是丰收在望的喜悦和轻松。