基于桑黄对肺炎的治疗作用及其机制的网络药理学分析

目的:基于网络药理学筛选中药桑黄治疗肺炎的活性成分,分析桑黄治疗肺炎的有效成分和靶点。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)软件搜索中药桑黄的成分和作用靶点;通过Uniprot数据库得到基因名称(Gene Name);通过GeneCards找出肺炎对应的靶点,将桑黄和肺炎的靶点进行比对,得到关键靶点。利用Cytoscape 3.9.1软件绘制出桑黄化学成分-肺炎-靶点网络图;通过String平台构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,采用Cytoscape软件中ClueGo插件对桑黄关键基因进行基因本体论(GO)生物功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果:桑黄主要活性成分有21种,(E)-4-(3,4-dihydroxyphenyl)but-3-en-2-one成分所含靶点最多,包括细胞色素P450家族(CYP450)、人表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶(MMP)等。筛选出桑黄的化合物靶点358个,其中217个基因为桑黄-肺炎共同靶点,与肺炎有关的关键基因包括含铜胺氧化酶3(AOC3)、DNA连接酶1(LIG1)、谷氨酰胺肽酶(ENPEP)、乙醛脱氢酶2(ALDH2)、组蛋白甲基化酶8(PHF8)、基因-溶质载体家族11成员2(SLC11A2)和CYP50等。GO和KEGG富集分析,桑黄主要通过17条代谢途径发挥作用,包括磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、癌症中的微小RNA(miRNA)、化学致癌-受体激活、前列腺癌、癌症中蛋白多糖和脂质、动脉粥样硬化及化学致癌物-活性氧(ROS)等相关途径。结论:(E)-4-(3,4-dihydroxyphenyl)but-3-en-2-one是桑黄成分中对肺炎治疗最有效的化学物质,其作用机制主要与CYP450家族有关。

蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1的中药抑制剂筛选

用含有蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1催化结构域(ΔSHP-1)的质粒转化大肠杆菌,得到ΔSHP-1的高效表达,经分离纯化后,以ΔSHP-1为靶标,通过体外酶反应动力学实验,对157种中药水提液的抑制效果进行研究,筛选出两种对ΔSHP-1具有显著抑制作用的中药:山茱萸和蒲公英,并对其IC50及抑制类型做了进一步研究.为建立蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂的筛选方法和中药在治疗免疫疾病和糖尿病上的开发和应用提供了理论依据.

蛋白质酪氨酸磷酸酶及相关疾病

蛋白质酪氨酸磷酸酶家族是细胞信号转导中的重要调节因子,参与多种细胞功能的调控。本文作者概述了几种重要的蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP1B、TC-PTP、SHP-1、SHP-2、MEG2及PRL3等的功能,并介绍了其在许多人类疾病(癌症、心血管疾病、神经及代谢失调及自身免疫系统疾病等)的发生和发展中所起的重要作用。

超高效液相色谱串联质谱联用法快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂

建立了超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)检测酶促反应体系中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)浓度变化,快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)抑制剂的方法。优化了HMGCR酶促反应体系和检测NADPH的色谱-质谱条件,探讨了NADPH的离子化试剂的作用和质谱碎裂机理。采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以三乙胺/六氟异丙醇缓冲液(pH=8.0)为流动相,流速0.3 mL/min,柱温30℃,电喷雾离子源-多反应监测模式,对酶促反应体系中的NADPH进行分析。NADPH的峰面积与其浓度在0.05～50μmol/L范围内呈良好的线性关系(r>0.9996),定量限(S/N=10)为0.05μmol/L。

巨核细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶2的克隆表达及其与骨质疏松症的关系

目的:探讨巨核细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶2(PTPMEG2)的克隆表达及其对骨质疏松症发展过程的调节作用。方法:分离纯化后的PTPMEG2蛋白,应用免疫学技术制备PTPMEG2的多克隆抗体。30只雌性SD大鼠随机分为模型组(n=15)和对照组(n=15),采用维甲酸灌胃给药的方法构建大鼠骨质疏松症模型,对照组大鼠采用生理盐水灌胃,检测2组大鼠血清中酸性磷酸酶(ACP)及碱性磷酸酶(ALP)的水平。Western blotting法检测大鼠各组织中PTPMEG2的表达水平,并对比PTPMEG2在骨髓细胞(BMCs)、红细胞及骨髓基质细胞(BMSCs)中表达量的变化。结果:成功制备PTPMEG2的多克隆抗体。模型组大鼠血清中ACP和ALP表达水平均高于对照组(P<0.01),且模型组大鼠的骨脆性明显高于对照组。模型组大鼠肾脏组织中PTPMEG2的表达水平高于对照组(P<0.05),而其在肌肉组织中的表达水平却低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,PTPMEG2在模型组大鼠BMCs中表达量显著增加,而在红细胞和BMSCs中其表达量无明显差异。结论:骨质疏松症大鼠BMCs中PTPMEG2表达水平增加,且多发生在骨髓内分化成熟的骨细胞中;PTPMEG2可能在骨质疏松症的发展过程中发挥重要的调节作用。

丁香对胰岛素信号通路的影响及2型糖尿病降糖机制的研究

目的研究丁香治疗2型糖尿病的降血糖机理。方法通过Western Blot检测丁香对胰岛素信号通路中蛋白的磷酸化水平。体外酶反应动力学实验检测丁香对酪氨酸磷酸酶的抑制效果。结果丁香显著提高胰岛素信号通路关键蛋白磷酸化水平(P<0.001),并对SHP-1有明显的抑制效果。结论推测丁香的降血糖机制是通过抑制胰岛素信号通路负调节酶SHP-1的活性,进而增强胰岛素受体敏感性。

论城镇化规划与决策阶段的公众参与

在当前的城镇化模式下,政府主导无疑是最显著的特点,也是中国城镇化进程区别于其他国家城镇化进程的一大特色。在这一发展模式下,对程序的规制以及公众参与的成分相当不足,涉及规划与决策阶段的公众参与更是微乎其微。将公众参与的阶段提前,对解决城镇化带来的诸问题以及实现新型城镇化更好的发展具有举足轻重的作用。

葵花盘粉有效成分对小鼠高尿酸血症的治疗作用

目的:探讨葵花盘粉主要成分小分子肽、生物碱、总黄酮和多糖等对小鼠高尿酸血症的治疗作用,阐明葵花盘粉对小鼠血尿酸(UA)水平和大鼠关节肿胀的影响及对肝和肾组织的保护作用。方法:取昆明雄鼠96只,随机分为8组,各组12只,一组为空白对照组,其余用作高尿酸血症模型制备。高尿酸血症模型造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性对照(别嘌醇)组、小分子肽组、生物碱组、总黄酮组、多糖组和葵花盘粉组,分别灌胃给药,给药7d后检测各组小鼠血UA水平;取每组小鼠肝和肾组织,采用HE染色法观察各组小鼠肝和肾组织形态表现。在雄性SD大鼠膝关节腔注射3mg尿酸钠,建立大鼠急性痛风性关节炎模型。实验分为空白组、模型组、阳性对照药秋水仙碱组、不同浓度(0%、20%、40%、60%、80%和100%)乙醇葵花盘提取物(SDE)组,每组4只。分别测定0、12、24和48h大鼠关节周长。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠血清中相关炎症因子白细胞介素10(IL-10)和巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)水平。结果:与模型组比较,别嘌醇组、小分子肽组、生物碱组、总黄酮组和葵花盘粉组小鼠血UA水平均在给药后明显降低(P<0.05),其中别嘌醇组小鼠血UA水平降低最大,小分子肽组次之。HE染色观察,小分子肽组小鼠肝小叶内肝细胞及肝细胞索清晰,肝细胞胞质饱满,且肾细胞与空白对照组比较未见异常。注射尿酸钠48h后,与模型组比较,SDE组大鼠关节肿胀度最多减少27.1%。与模型组比较,20%SDE组大鼠血清IL-10水平明显升高(P<0.01),血清中MIP-1α水平亦明显升高(P<0.01)。结论:葵花盘粉可降低血UA水平,并对肝和肾组织有一定的保护作用,且可通过提高机体抗炎活性降低机体炎症反应,实现抗痛风性关节炎活性的作用。

用响应面法优化酶水解法制备葵花盘小分子肽

为提取并利用葵花盘中具有降尿酸和溶解痛风石作用的小分子肽,以小分子肽得率为指标,通过酶水解法优化提取条件,确定碱性蛋白酶为最理想的酶.通过单因素实验考察料液比、时间、温度、pH值和加酶量对小分子肽得率的影响,利用响应面Box-Behnken实验,优化酶水解法提取葵花盘小分子肽的工艺,得到其最佳工艺条件为:加入碱性蛋白酶,m(料)∶V(液)=1∶15,酶的用量为2%,pH=9.0,温度为55℃,时间为2h,葵花盘小分子肽的得率最高为(42.41±0.01)%.

基于拉伸分子动力学模拟的黄嘌呤氧化酶抑制剂解离途径的理论研究

采用拉伸分子动力学模拟的方法研究了黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇(Allopuri⁃nol)和葛根素(Puerarin)从XO离去通道解离的动态过程.分子对接结果表明,别嘌呤醇和葛根素均结合在XO的钼蝶呤中心(Molybdopterin,Mo-pt);丙氨酸扫描的结果显示,Val789,Arg880,Phe911,Phe914和Val1081在XO与抑制剂的结合中起到非常重要的作用.拉伸分子动力学模拟结果显示,相比于葛根素,别嘌呤醇需要更大的外力和更长的时间才能从XO中解离,拉伸过程中Arg880,Phe1009,Thr1010,Val1011和Ala1079均对维持2种复合物的结构稳定起到重要作用,Phe649和Phe1013在抑制剂解离过程中起到门控的作用,His875起到阻碍抑制剂解离的作用.

基于分子动力学模拟的VmoLac非特异性底物催化活性的理论研究

采用分子动力学模拟方法研究了VmoLac的非特异性底物催化活性,模拟了VmoLac/3-oxo-C10-AHL,VmoLac/3-oxo-C6-AHL,VmoLac/γ-nonalacton和VmoLac/ethyl-paraoxon 4个复合物.分析了分子动力学模拟过程中不同底物结合引起VmoLac构象变化的主要原因.结果表明,3-oxo-C10-AHL和γ-nonalacton的结合会使VmoLac活性口袋附近的Loop8结构域运动明显,利于底物结合在Loop8疏水通道外侧进而引起催化反应;VmoLac活性口袋周围的门控残基W264和Y230之间距离的变化会影响底物的结合;Y98与长链内酯、壬内酯的羰基碳之间形成的进攻距离较小,而与短链内酯的羰基碳以及对氧磷的磷原子之间形成的进攻距离较大,短的距离更有利于发生亲核进攻反应;D257是引发VmoLac催化反应的关键残基;当VmoLac催化3-oxo-C10-AHL和γ-nonalacton时,D257与极化水以及底物形成更多的氢键,使底物与酶更容易结合.从理论催化机制角度解释了VmoLac催化长链内酯(3-oxo-C10-AHL)比短链内酯(3-oxo-C6-AHL)的能力强,催化壬内酯(γ-nonalacton)比对氧磷(ethyl-paraoxon)能力强的原因,为实验结果提供了理论证明.

黑色食物活性物质研究

黑色食品包含黑芝麻、黑米、黑豆、黑花生、黑木耳等众多食物种类,并且各个具有不同功效和食用方法,其中黑豆多肽含量多达36%~40%,黑花生中油酸的含量高达50%以上,大多黑色食物含有大量花青素、黄铜和酚类物质,这些物质对保肝护肾、预防肥胖,改善血糖和抗氧化方面有着巨大作用,本文对黑色食物的活性成分、作用及巨大的发展潜力做了介绍。

浅析立功制度下的人性扭曲与异化现象

立功制度是我国现行刑法中一项重要的刑罚裁量制度和刑罚执行制度。纵观世界各国的刑法,极少有类似我国刑法立功制度的规定。这一制度的确立和司法实践中的有效实施在某种程度上确实节约了司法资源,减少了司法运作成本,然而掩藏在立功制度下的人性缺失以及种种异化现象的出现无疑使其致命缺陷显现了出来,我国立功制度到底出路何在呢?