大肠杆菌和酵母PCR模扳制备的优化

对快速制备大肠杆菌和酵母基因组DNA PCR模板的方法进行了优化。实验证明加入0.1%Triton X-100和0.1%SDS的煮沸法能够明显提高大肠杆菌基因组模板的扩增效率,加入0.1%SDS的煮沸法在提高酿酒酵母基因组模板的扩增效率方面也有类似效果,但加入0.1%Triton X-100的煮沸法对酿酒酵母基因组模板的扩增仅有较小的作用。

棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达

棉铃虫组织蛋白酶B(Helicoverpa armigeraCathepsin B,HCB)属于半胱氨酸蛋白酶类,参与胚胎发育中卵黄蛋白水解供给胚胎发育的氨基酸。将HCB基因克隆到pPIC9K载体并转化毕赤酵母KM71菌株,经甲醇诱导,HCB表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定分子量为38kDa,与HCB基因编码的蛋白质分子量一致。用HCB的特异性抗体检测表明重组表达产物为棉铃虫组织蛋白酶B,原位水解实验显示重组表达的蛋白酶具有蛋白水解活性,表明在毕赤酵母中表达了有活性的棉铃虫组织蛋白酶B,可用于组织蛋白酶B酶原活化机理研究及开发新蛋白酶产品。