哈巴苷对缺氧缺糖诱导下大鼠海马神经细胞游离Ca^(2+)浓度的影响

目的:研究哈巴苷对缺氧缺糖(OGD)诱导下海马神经细胞内游离Ca2+浓度的影响。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经细胞,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定并检测其纯度;哈巴苷(0.5、1、5、10、25、50、100、150、200、250、500、1 000μmol/L)预处理48 h后,OGD 4 h,另设正常对照组及模型组,采用MTT法检测各组海马神经细胞活力,筛选哈巴苷有效浓度范围;将SD乳鼠海马神经细胞随机分为正常对照组、模型组、哈巴苷各剂量(50、75、100、125μmol/L)组,采用Fluo-3/AM负载的海马神经细胞,应用荧光倒置显微镜及荧光分光光度计观测哈巴苷各剂量对OGD海马神经细胞内游离Ca2+浓度的影响。结果:原代SD乳鼠海马神经细胞培养至第7天,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定为海马神经细胞,并检测其神经细胞纯度为85%~90%;MTT结果显示:与模型组比较,哈巴苷10、25、50、100μmol/L能显著增强海马神经细胞的活力(P<0.05或P<0.01),确定哈巴苷预处理48 h的有效浓度范围为10~100μmol/L;荧光倒置显微镜下观察,正常对照组海马神经细胞Ca2+荧光强度弱,模型组海马神经细胞Ca2+荧光强度强;与模型组比较,哈巴苷各剂量预处理48 h,均能降低OGD诱导的海马神经细胞Ca2+的荧光强度,其中75μmol/L组荧光强度降低最为明显。荧光分光光度法测定显示:与正常对照组比较,模型组海马神经细胞内游离Ca2+浓度显著升高(P<0.01);与模型组比较,哈巴苷75μmol/L能显著降低OGD诱导下海马神经细胞内游离Ca2+的浓度(P<0.05)。结论:哈巴苷预保护48 h能降低OGD诱导的海马神经细胞内游离Ca2+的浓度,以75μmol/L剂量效果最好,其保护作用与降低细胞内游离Ca2+浓度有关。

哈巴苷对急性脑缺血小鼠神经保护作用及线粒体保护机制的研究

目的探讨哈巴苷对急性脑缺血小鼠的神经保护作用及线粒体保护机制。方法采用脑中动脉阻断复制急性脑缺血模型,将ICR小鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,哈巴苷(5、10、15 mg·kg-1)组;造模后立即腹腔注射给药,考察各组小鼠神经功能评分、脑含水量、脑指数、脑缺血体积及大脑组织结构病理变化;测定脑中动脉阻断小鼠大脑缺血区细胞线粒体内Ca2+-Mg2+-ATPase的活性及缺血区caspase-3蛋白表达水平;透射电镜(TEM)下观察脑中动脉阻断小鼠大脑缺血区细胞线粒体超微结构变化。结果与模型组比较,哈巴苷各剂量组,均能不同程度降低脑中动脉阻断小鼠神经功能评分、脑含水量、脑指数及脑缺血体积(P<0.05,P<0.01);哈巴苷10 mg·kg-1能明显增强Ca2+-Mg2+-ATPase的活性(P<0.01),明显下调脑缺血区caspase-3蛋白的表达(P<0.01);哈巴苷各剂量能不同程度改善脑中动脉阻断小鼠大脑缺血区皮层及海马齿状回病理结构及线粒体超微结构变化,减少线粒体水肿。结论哈巴苷对急性脑缺血小鼠具有明显的保护作用,其作用机制与保护线粒体损伤、下调细胞凋亡蛋白途径有关。