高效的水稻基因枪转化和可育转基因植株再生

从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3～4周的愈伤组织,经过1～3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组织,在含30～50mg/L潮霉素的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养.使用干燥处理来增加再生频率和出苗数,并摸索出移栽再生小植株的有效方法.从接种到获得转化小植株只需要13～21周.三次转化实验共轰击536块胚性愈伤组织,获得199个系的2783株潮霉素抗性植株.DNA点杂交检测表明73.4%的抗性植株同时含有GNA基因和hpt基因,Southern杂交分析进一步证实了GNA基因在转基因水稻基因组中的整合.89.3%的转基因植株可育.分子证据表明GNA基因和hpt基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离.