半夏泻心汤调控TLRs/NF-κB/MyD88信号通路干预溃疡性结肠炎的实验研究

目的观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠道粘膜中的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/核转录因子κB(Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)/髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation factor SS,MyD88)信号通路及抑制因子基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-1、MMP-2表达影响,并探讨其作用机制。方法建立葡聚糖硫酸钠盐(Dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导产生UC模型,根据随机数字表法,将35只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)级大鼠进行分组,分为正常组、模型组、低浓度给药组(0.473 g·mL^(-1))、中浓度给药组(0.945 g·mL^(-1))和高浓度给药组(1.890 g·mL^(-1))。除正常组外,其余4组大鼠连续10天使用2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐溶液每天2 mL进行灌胃,造模成功后,连续给药1周,观察大鼠疾病活动指数(Disease activity index,DAI)变化;采用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法,确认结肠组织病变损伤程度;同时应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)法,检测TLR4、NF-κB、MyD88蛋白在各组大鼠结肠中的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)技术则测定了大鼠结肠黏膜TLR4、NF-κB、IκB-α(人核因子κB抑制蛋白α,NF-κB inhibitorα)、MMP-1、MMP-2的mRNA的表达。结果造模后大鼠体质量、食欲、被毛、活动度、尿量较造模前均出现不同程度的下降,同时部分大鼠出现腹泻、便血的症状。模型组与正常组相比,大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达,及TLR4、NF-κB、IκB-α、MMP-1、MMP-2的mRNA表达均显著升高(P<0.01);给予半夏泻心汤治疗后,UC大鼠体质量下降、腹泻、便血等症状明显减轻。低、中、高剂量的半夏泻心汤实验组中,大鼠结肠黏膜组织TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达相较于模型组有不同程度地降低;MMP-1、MMP-2水平也有所下降。结论半夏泻心汤可能通过影响TLRs/NF-κB/MyD88信号通路及其相关因子的表达,改善溃疡性结肠炎大鼠结肠损伤程度,进而防治UC。

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠PI3K/Akt信号通路及炎症因子表达的影响与分子机制

目的观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路表达的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法用葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液灌胃大鼠建造UC模型,通过随机数表法对大鼠进行分组,具体为正常组、模型组、低剂量给药组(0.473 g/mL)、中剂量给药组(0.945 g/mL)和高剂量给药组(1.890 g/mL),连续给药7 d后,观察大鼠疾病指数(DAI)的变化、苏木精-伊红(HE)染色法处理的结肠组织损伤程度、酶联免疫法(ELISA)检测的IL-6及TNF-α的水平,以及通过免疫印迹法(Western blotting,WB)检测的PI3K和Akt蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组DAI水平,TNF-α、IL-6含量,PI3K、Akt蛋白表达水平明显升高,结肠组织损伤程度严重;与模型组比较,3组给药组的DAI水平,TNF-α、IL-6含量,PI3K、Akt蛋白表达水平明显降低,结肠组织损伤情况有所改善。结论抑制TNF-α、IL-6等炎症因子的表达和PI3K/Akt信号通路的活化等途径是应用半夏泻心汤预防溃疡性结肠炎发生的可能机制。