难治性癫痫患者血清和脑脊液中MCP-1表达的研究

目的研究单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemottractant protein-1 MCP-1)在难治性癫痫患者血清和脑脊液中的表达。方法采用RT-PCR和ELISA技术测定难治性癫痫患者、非难治性癫痫患者、正常对照组血清及/或脑脊液中MCP-1 mRNA及蛋白的含量。结果难治性癫痫患者血清及脑脊液中的MCP-1 mRNA及蛋白的含量较非难治性癫痫明显升高(P<0.01),血清中含量较正常对照组明显增高(P<0.01);非难治性癫痫患者血清中MCP-1 mRNA及蛋白的含量与正常对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论MCP-1在难治性癫痫患者血清及脑脊液中均升高,MCP-1可能参与了难治性癫痫的发病过程。

高效液相色谱-电化学法检测尿液8羟基脱氧鸟苷水平

目的 探讨一套高效液相色谱 电化学系统检测尿 8羟基脱氧鸟苷 ( 8 OH dG)水平的方法学。方法 采用ESA 5 60 0Coularray系统检测广西扶绥县肝癌户人群 2 1例及南宁市对照人群 63例尿 8 OH dG水平。 结果 8 OH dG峰与杂质峰分离良好 ;8 OH dG浓度在 0 .0 1～ 15ng/ml间呈良好线性 ;保留时间、标样和内对照的重复性试验的批内差异 (CV)均小于 8% ;标样 (F =0 .0 0 2 ,P =1.0 0 0 )和内对照 (F =2 .965 ,P =0 .0 82 )的重复性试验的批间差异经方差分析均无显著性意义。采用上述方法测得 84例总的尿 8 OH dG水平为 ( 5 .2 6± 0 .41)ng/mg肌酐 ,高于同类研究的检测值〔( 4 .62± 0 .0 91)ng/mg肌酐 ,n =3 2〕 ,但两地人群间尿 8 OH dG水平差异无显著性意义。 结论 这是对肝癌高发区高危人群氧化性DNA损伤的首次报告。通过谨慎设计试验和优化试验参数 ,该系统对 8 OH dG峰的分离优于以往报告 ,适用于尿 8 OH dG的高通量定量分析 ,可应用于人群氧化性DNA损伤的研究。

难治性癫痫患者血清层粘连蛋白的表达

目的研究层粘连蛋白(laminin)在难治性癫痫患者血清的表达差异,为进一步探讨难治性癫痫发病机制提供依据。方法采用ELISA和Western blot技术测定30例难治性癫痫患者、46例非难治性癫痫患者及20名正常人血清中laminin的含量。结果ELISA结果显示laminin含量难治性癫痫组为:177.396±30.602,非难治性癫痫组为:121.915±35.215,正常对照组为:67.474±7.197,血清中laminin的含量难治性癫痫组、非难治性癫痫组高于正常对照组(P<0.05),难治性癫痫组高于非难治性癫痫组(P<0.05)。Western blot结果显示laminin-β1与β-actin的光密度比值在难治性癫痫组为:0.871±0.032,非难治性癫痫组为:0.686±0.017,正常对照组为:0.385±0.024,难治性癫痫组、非难治性癫痫组高于正常对照组(P<0.05),难治性癫痫组高于非难治性癫痫组(P<0.05)。结论Laminin在癫痫患者血清中明显升高,在难治性癫痫患者血清升高更明显,laminin可能参与了癫痫的发病过程,可能是促成癫痫难治性的因素。

肝缺血再灌注后HSP70蛋白的表达及其与凋亡关系的研究

目的探讨肝组织对缺血再灌注(ischemic reperfusion,IR)损伤与及HSP70与肝细胞凋亡之间的关系。为选用有效的预处理方法、抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemic reper-fusion injury,HIRI)提供理论基础。方法肝切除术中在肝门阻断前、肝门阻断开放时和手术结束关腹前各取切缘旁肝组织10g,用于石蜡包埋切片。用SP免疫组化法检测肝组织中HSP70的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞的凋亡情况。结果(1)肝门阻断前肝组织HSP70在每高倍视野下阳性细胞数为0,肝门阻断开放时为(19.8±4.4)个,关腹前为(29.9±6.2)个;3组阳性细胞数及两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。肝门阻断前HSP70灰度差值为0.1609±0.1558,肝门阻断开放时为0.3409±0.3694,关腹前为0.5896±0.1802;3组比较及两两比较差异有统计学意义(均为P<0.05)。(2)肝门阻断前肝细胞凋亡指数(Apoptosis In-dex,AI)为(11.4±2.4)‰,肝门阻断开放时为(9.8±1.7)‰,关腹前为(8.6±1.6)‰;肝门阻断前肝细胞的AI高于肝门阻断开放时肝细胞的凋亡指数(P<0.05)及关腹前(P<0.05);肝门阻断开放时肝细胞的AI高于关腹前(P<0.05),HSP70表达与凋亡呈明显负相关。结论HSP70与HIRI的发生和发展有一定关系;HSP70具有一定的抑制细胞凋亡作用。

广西肝癌高发区氧化性DNA损伤与修复酶hOGG_1的表达和多态性关系的研究

目的研究广西肝癌高发区未成年人的氧化性DNA损伤情况。方法采用流式细胞技术检测外周血白细胞DNA7,8-dihydro-8-oxoGuanine(8-oxoG)及其修复酶hOGG1的水平,采用PCR-SSCP技术检测hOGG1-Cys326Ser多态性。结果8-oxoG与hOGG1表达水平高度相关(0·48<r<0·88,P<0·001)。高发区肝癌户未成年人(n=21)与对照(n=63)相比,hOGG1表达水平较高(P<0·01)但8-oxoG水平较低(P<0·05)。城市对照被动吸烟者hOGG1表达水平较高(P<0·05)。8-oxoG和hOGG1水平与体重指数负相关;hOGG1与年龄正相关。在12岁附近有一8-oxoG水平峰。hOGG1326Ser携带者较hOGG1326Cys携带者8-oxoG水平高。结论人群模型的氧化性DNA损伤研究,可从新的角度为了解环境-基因相互作用提供资料。