Red/ET同源重组介导的基因克隆载体pBACS的构建、鉴定与应用

目的通过Red/ET同源重组技术构建pBACS基因克隆及测序质粒载体。方法以质粒pBAC2015、pET28a为模板设计四对引物,PCR扩增得到四段彼此间有50 bp同源区域的基因片段,分别命名为bac-sop、bac-ori、bac-kan和bac-T7。利用Red/ET同源重组技术,将四段基因片段电转至E.coli GB05-dir感受态中进行线线重组。经酶切、测序验证阳性克隆质粒。此外,对重组质粒pBACS进行稳定性鉴定;利用pBACS分别进行细菌16S rDNA和真菌ITS基因克隆和基因测序。结果酶切和测序的验证结果显示,质粒的大小、元件方向及序列正确;pBACS具有较强的稳定性,适用于作为基因工程的克隆载体;可高效用于细菌16S rDNA和真菌ITS序列的克隆,阳性率为100%。结论成功利用Red/ET技术构建克隆载体pBACS,质粒载体具有稳定性强、重组效率高的特点,在基因克隆和基因测序等方面具有良好的应用潜力。

靶向鉴别、检测动物双歧杆菌的引物探针及应用

为解决目前应用于鉴别动物双歧杆菌的方法的用时长、操作复杂、实验环境低适配性等缺点,开发了一种基于ERIC-PCR技术设计特异性引物探针以靶向鉴别、检测动物双歧杆菌的方法。以动物双歧杆菌HP-B1124基因组DNA为基础,优化动物双歧杆菌HP-B1124的ERIC-PCR反应条件,对ERIC-PCR片段逐一回收并进行测序,针对测序结果设计两对特异性引物探针,对两对引物探针设计结果的准确性、特异性、可检测基因组DNA的含量限度、普适性进行检验,并运用所设计的两对特异性引物探针检验市售公示配方中含有动物双歧杆菌的产品。本研究设计的两对特异性引物探针可简单、快速、靶向的用于动物双歧杆菌的鉴定。此方法优化了目前相对传统的动物双歧杆菌纯培养及平板计数鉴定方法,一定程度上解决了SNP基因分型技术及实时荧光定量PCR法等方法在鉴定动物双歧杆菌方面对实验设备及试剂的高要求,具有成本低、特异性强的特点,有较为广阔的市场开发前景。

持续应用小剂量氨茶碱治疗早产儿原发性呼吸暂停的临床观察

目的:探讨持续小剂量氨茶碱对早产儿原发性呼吸暂停的治疗效果。方法:2005年～2009年收治的原发性呼吸暂停早产儿共72例,2007年前36例为对照组,2007年～2009年36例为实验组。两组在发生呼吸暂停后每次静滴氨茶碱5 mg/kg。实验组12 h后每次给维持量2.5 mg/kg;对照组不使用氨茶碱维持治疗。观察两组在生后一周内呼吸暂停的发生率、平均用氧时间、需机械通气百分率、每日体重增长及住院时间。结果:实验组在呼吸暂停的发生率、平均用氧时间、需机械通气百分率、住院时间均明显低于对照组,每日体重增长高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:持续应用小剂量氨茶碱治疗早产儿原发性呼吸暂停有效,安全剂量范围内无明显不良反应,值得推广应用。

益生菌治疗早产儿喂养不耐受的临床观察

目的:探讨益生菌治疗早产儿喂养不耐受的效果。方法:52例喂养不耐受早产儿随机分为观察组和对照组,每组26例,均予红霉素5 mg/kg,每天1次;观察组加用枯草杆菌二联活菌颗粒1/2支,2次/d。结果:在治疗有效率、治疗天数、治疗至GRV≤10%的天数、经胃肠道摄取热卡达100 kcal.kg-1.d-1的日龄、体重增减、累计光疗时间等临床指标上,观察组的效果明显优于对照组(P均<0.05)。结论:益生菌治疗早产儿喂养不耐受有一定疗效,无明显不良反应。

脑出血患者的护理体会

为了更好地护理脑出血患者,我们护理工作者必须了解脑出血患者的发病特点以及病情变化,配合临床治疗,观察病情变化,做好患者思想工作。医护人员要积极主动帮助患者,进行精神安慰,鼓励患者树立战胜疾病的信心,促进患者早日康复。

12例新生儿臀红的护理体会

笔者在临床上护理12例新生儿臀红取得了较好的效果。必须保持患儿臀部清洁、干燥、做到勤巡视、勤更换尿布，局部及时涂擦用药，只有积极治疗、精心护理才能较快治愈。

婴儿蒙被综合征护理体会

在临床上常见的蒙被综合征,对患儿治疗十分不利,所以我们护理人员一定要有高度的责任感,加强责任管理,及时发现及时纠正,以防发生测.才能提高治疗效果.

新生儿的病情观察及护理体会

要做好新生儿病情的观察,必须要注意新生儿的啼哭、哺乳、呕吐、尿、便、脐带、五官、皮肤等情况的变化。护理人员高度的责任感和精心的护理,有利于新生儿病情的康复。

特异性检测、鉴别乳酸片球菌的引物探针及其应用

为解决现有方法在检测乳酸片球菌时表现出耗时长、检测不灵敏的缺点,拟制备并运用2对特异性引物探针快速准确地从复杂生境中检测乳酸片球菌。提取乳酸片球菌HP-B1099基因组DNA,通过4因素3水平正交实验寻找ERIC-PCR最佳反应程序,并得到乳酸片球菌有代表性的2条ERIC基因片段,设计获得2对引物探针1099-750-F/1099-750-R、1099-3-F/1099-3-R,并对2对引物的特异性、普适性、检测限度进行验证与检验。结果表明:基于ERIC-PCR技术设计的2对引物探针,可简便快速地实现混合样本中乳酸片球菌的检出,具有特异性、普适性的特点,并在多达8种基因组DNA或8种菌株混合样本中特异性地鉴别痕量乳酸片球菌,最终实现在多株近缘菌株或复杂生境中检出极低浓度的乳酸片球菌。

特异性检测鼠李糖乳杆菌的引物探针及应用

[目的]基于ERIC-PCR技术设计引物探针,用于鼠李糖乳杆菌的特异性检测,探究引物探针的属性特征。[方法]以鼠李糖乳杆菌HP-B1083为研究对象,利用新型ERIC兼并引物与4因素3水平正交实验获得鼠李糖乳杆菌ERIC指纹图谱,根据鼠李糖乳杆菌ERIC序列设计特异性引物探针,并进行引物探针特异性、普适性及检测限度验证。[结果]使用ERIC-PCR技术获得的鼠李糖乳杆菌ERIC指纹图谱,成功设计了4对针对鼠李糖乳杆菌的引物探针。探针能在8种混合益生菌中特异性检出鼠李糖乳杆菌,能高效检出6株鼠李糖乳杆菌的同源菌株,在DNA为27 ng/mL的混合基因组中亦可实现鼠李糖乳杆菌的痕量检出。[结论]设计的4对引物探针能实现鼠李糖乳杆菌的特异性检出,具有高特异性、宽广谱性、强灵敏性的特征,实现DNA为27 ng/mL的混合基因组中鼠李糖乳杆菌的痕量检出,具有良好的探针属性特性。