猪源肠球菌明胶液化表型与5种毒力基因的检测分析

为探究明胶液化的表型与其5种毒力基因在不同来源和不同种属猪肠球菌中的分布差异,本研究采用PCR方法以及明胶液化试验对湖南分离的375株肠球菌携带的明胶酶基因(gelE)、调控gelE表达的毒力基因反应调节子基因(fsrA)、前肽加工蛋白基因(fsrB)、组氨酸激酶基因(fsrC)、丝氨酸蛋白酶基因(sprE)共5种毒力基因的分布情况以及液化明胶现象进行检测。结果显示,共263株肠球菌检测到了毒力基因,检出率分别为41.3%(gelE)、45.9%(fsrA)、50.9%(fsrB)、48.8%(fsrC)、48.8%(sprE)。能够同时检测到5种毒力基因的菌株共有110株,其中粪肠球菌106株,且该5种毒力基因在106株粪肠球菌中的检出率均为最高,另外4株为其它肠球菌。在明胶液化试验中,共有155株肠球菌检测到gelE基因,但只有106株能够发生明胶液化现象,且这些菌株正是能够同时检测到5种毒力基因的106株粪肠球菌,而另外4株能够同时检测到5种毒力基因的其它肠球菌却不能发生明胶液化现象。结果表明,粪肠球菌是肠球菌中主要携带毒力基因的菌属,与屎肠球菌以及其它肠球菌相比,更容易出现液化明胶的表型,这可能与粪肠球菌中某些明胶液化的机制有关,且除gelE外,参与gelE表达的几种毒力基因对该表型的出现也具有一定的影响。

湖南省部分地区猪、鸡源粪肠球菌耐药性及多位点序列分型分析

为探究湖南省不同地区猪、鸡源粪肠球菌耐药特征,多重耐药株的流行性和多位点序列的分型,本研究采用微量肉汤稀释法对81株分离的粪肠球菌进行8种抗菌药物的耐药性检测,应用MLST方法对部分多重耐药菌株进行分型。结果显示,分离株对红霉素、四环素以及头孢西丁严重耐药,耐药率均在90%以上,对氧氟沙星和氟苯尼考的耐药相对严重,耐药率为60%~80%,仅有1株对万古霉素耐药;本次试验中有75株粪肠球菌对3种及3种以上药物耐药,多重耐药率达92.6%;35株多重耐药粪肠球菌共有21个MLST型,其中CC(Clonal complex)16、CC480、CC476、CC4为优势克隆群。CC16所覆盖的粪肠球菌数量最多,占比28.6%。比较4个优势CC群耐药性,所有菌株均对四环素、红霉素及头孢菌素耐药,2株ST16型菌株的多重耐药谱完全相同,2株ST480菌株的耐药谱仅存在1处差异。结果表明,不同地区猪、鸡源粪肠球菌分离株有着丰富的ST型,同一种ST型的菌株可能具有相同或相似的多重耐药谱。

猪瘟E^rns蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体间接ELISA方法的建立

将人工合成的CSFV E^rns基因插入到pFastBac1获得重组转移载体pFastBac1-E^rns,在DH10Bac大肠杆菌中转座后提取杆粒并转染Sf9细胞,用获得的重组杆状病毒感染High Five细胞表达E^rns蛋白并通过亲和层析进行纯化。以纯化后E^rns蛋白作为诊断抗原,通过摸索抗原包被量和抗体血清稀释倍数等条件,建立检测CSFV E^rns抗体的间接ELISA方法(E^rns-iELISA)。结果显示,E^rns蛋白得到有效表达,相对分子质量约为35000;确定的ELISA抗原包被量为120ng/孔、血清稀释100倍,酶标二抗稀释6000倍,封闭条件为37℃30min,TMB底物作用15min,临界值为0.329。用E^rns-iELISA方法检测92份阴性血清,其特异性为88.04%,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应;对171份阳性血清的敏感性为92.98%;批内和批间重复的平均变异系数为7.4%和10.74%。结果表明,本试验所建立的E^rns-iELISA方法重复性好,具有较高的检测特异性,且对CSFV疫苗毒和国内流行毒株都具有较高的检测敏感性,具有潜在的开发和应用价值。