联合诱导分化方案治疗急非淋白血病的疗效分析和实验研究

本文应用阿克拉霉素或三尖杉酯碱和全反式维甲酸联合诱导分化33例急非淋白血病细胞原代培养后的结果显示:1.细胞形态趋向成熟,其胞浆内可见到Auer小体,且经组化染色证实;2.硝基兰四氮唑还原率和溶菌酶含量显著增高(P<0.01);3.表面抗原的转铁蛋白受体均转为阴性。14例急非淋患者联合诱导分化治疗结果的有效率为85.7%,其中完全缓解8例,部份缓解4例和未缓解2例。无DIC等副反应发生。

慢性轻度职业性苯中毒患者外周血T细胞亚群变化的检测

苯类物质对造血系统有直接损害作用,并可降低苯中毒患者的淋巴细胞转化率和T淋巴细胞玫瑰花结的形成率.本文采用T细胞单克隆抗体（McAb）检测慢性职业性苯中毒患者外周血T细胞亚群的变化,探讨其机体免疫功能状态. 材料与方法正常组系健康体检者和献血团员,年龄24～48岁,共24例.苯中毒组32例,年龄27～51岁.慢性苯中毒的诊断原则和分级标准参阅中华人民共和国国家标准UDC61 3.62,616—07,GB3230—82. 本组应用美国Ortho-mune公司的OKT系列McAb:T3（总T细胞）,T4（T辅助细胞,TH）和T8（T抑制细胞,T8）.采用间接SPA（金黄色葡萄球菌蛋白A）花环法。

一种可检测细胞 凋亡多项指标的样品处理

目的：建立一种更为简便，可同时用ＤＮＡ电泳、流式的细胞仪，免疫组化分析检测细胞凋亡多项指标的样品处理方法。方法：用７５％乙醇预固定样品后，经柠檬酸缓冲液抽取凋亡细胞内降解的小分子量ＤＮＡ，而保持细胞形态完整，细胞的抗原，大分子ＤＮＡ完好，进而可用于流式细胞仪和免疫组化分析。结果：将柠檬酸抽提液用于琼脂糖电泳，出现典型的“ＤＮＡ梯形”图谱。其敏感性达２×１０６个细胞检出７．６％凋亡率。而标本可贮存５周之久。结论：本方法为对同一标本进行多种指标的同步分析提供了可能性。

慢性淋巴细胞白血病bcl-2基因表达与重排的研究(英文)

人类恶性肿瘤常伴有非随机性染色体异常,并由于使调控细胞生长的基因表达失控而在肿瘤的发生中发挥十分关键的作用。bcl-2基因由于t(14,18)染色体易位而激活在低恶度的非霍奇金淋巴瘤的发生和演变中的作用已举世公认。类似的重排和非重排引起的bcl-2过度表达也见于慢性淋巴细胞白血病。我们应用免疫组化染色和聚合酶链反应检测了11例慢性淋巴细胞白血病bcl-2基因表达和重排,结果发现所有病例均高度表达Bcl-2蛋白,1例有t(14,18)(q32,q21)染色体易位。结论提示慢性淋巴细胞白血病普遍存在bcl-2基因高表达,bcl-2基因在慢性淋巴细胞白血病的发生和发展中发挥着十分重要的作用。

急性非淋巴细胞性白血病免疫球蛋白和T细胞受体基因重排的研究及其意义

采用PCR法对25例不同时期急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）患者免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ链（TcRr）基因重排进行了研究。结果显示，3例（12．0％）发生IgH基因重排，3例（12．0％）出现TcRr基因重排，其中1例同时出现IgH和TcRr基因重排，对这种ANLL中序列失真现象的机制及其在白血病基因分型及检测微小残留疾病中的意义进行讨论。

人恶性淋巴瘤细胞系p53,p16与bcl-2/JH基因的研究

抑癌基因p53,p16的缺失和突变以及癌基因bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学原因,p53和p16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因。为研究这3种基因结构的变化,用PCR和PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人9种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DHL-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,Daudi,8392 7种恶性淋巴瘤细胞系有p53基因的点突变,分别在第五、六、七外显子;SU-DHL-9有p16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有p16基因的第二外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插入了一个C;SU-DHL-4和SU-DHL-6有bcl-2/JH基因的重排,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生发展中的意义。

急性髓系白血病细胞粘附分子VLA-4、LFA-1表达特点及临床意义

为探讨急性髓系白血病（AML）细胞细胞粘附分子VLA－4、LFA－1表达的临床意义，用免疫组织化学APAAP方法检测50例AML患者白血病细胞VLA－4、LFA－1表达，结合临床资料及化疗疗效分析，发现：①AML细胞VLA－4、LFA－1表达具有很大差异，前者为0％～99％，平均41±31％；后者为1％～100％，平均57±32％。50例AML中VLA－4+病例36例（＜72．0％）；LFA－1+病例37例（74．0％）。②VLA－4+、LFA－1+组与VLA－4-、LFA－1-组在FAB分型、年龄、性别、血红蛋白量、血小板计数、补周血原始细胞数等方面无显著区别。③AML未缓解组VLA－4表达显著高于完全缓解组（56±22％VS20±18％，P＜0．001）；LFA－1表达未缓解组也高于完全缓解组（59±31％VS36±26％，P＜0．05）。复发组VLA－4表达显著高于初发组（54±23％VS34±29％，P＜0．02）；LFA－1表达在复发组有增高趋势（60±33％VS41±32％，P＞0．05），结果表明，VLA－4＋、LFA－1＋、AML细胞具有化疗抵抗特征，可作为AML患者不良预后预测指标之一。

联用重组的IL-3、GM-CSF对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为研究在阿糖胞苷（Ara－C）的作用下，基因重组的人白细胞介素3（rh－IL－3）、粒单祖细胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）对白血病细胞凋亡的影响，选用了HL－60白血病细胞系，采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C－myc、bcl－2抗原表达的分析以及白血病细胞集落的培养观察方法，观察了0～36h8个不同时相凋亡率与其他指标的变化，表明Ara－C凋亡的作用随药物孵育时间的延长而逐渐增强，凋亡率从0h的1．5％升至36h后的36．4％，而IL－3和GM－CSF能使这种作用明显提高，使凋亡率从7．6％升至19．6％，并能增强Ara－C对白血病细胞的杀灭，引起HL－60细胞C－myc抗原表达下降，而bcl－2抗原表达变化不大，同时发现这两种细胞因子对正常造血细胞影响较小，这为临床上白血病诱导缓解期联用rh－IL－3、rh－GM－CSF和细胞毒药物，提高缓解率，提供了理论依据。

急性白血病的P16基因表达分析

应用免疫组织化学方法．对61例急性白血病患者P16基因表达进行检测和分析。结果表明：AML和ALL患者的P16表达均显著低于对照组（P＜0.001），ALLP16表达又显著低于AML（P＜0．05）。AL亚型中P16表达率以M2最高，L3最低。比较耐药组和药敏组，P16表达两组间有显著差异（P＜0．05），但初诊组与复发组、缓解组与未缓解组比较未见统计学差异（P＞0．05）。上述结果提示：P16基因表达异常在急性白血病的发生、发展中起重要作用，但与白血病患者的治疗和预后无明显关系。

阿霉素、柔红霉素对CFU-GM和L-CFU细胞毒作用的比较

微量液体克隆形成法检测的结果提示,柔红霉素对正常人粒细胞、巨噬细胞克隆形成细胞的细胞毒作用是阿霉素的1.98倍(24小时作用法)至2.15倍(168小时作用法),其TDI(Time-schedule Dependence Index)均在100左右。柔红霉素对急非淋患者急性非淋巴细胞白血病细胞克隆形成细胞的细胞毒作用是阿霉素的4.74倍。柔红霉素的平均敏感指数(MSI=2.01±0.53)略大于阿霉素(MSI=1.65±0.49),从理论上解释了柔红霉素多用于治疗急性白血病,阿霉素多用于治疗实体瘤。

8种人恶性淋巴瘤细胞系P16基因突变的研究

为确定 P16基因与恶性淋巴瘤发生发展的关系 ,对 8种人恶性淋巴瘤细胞系中 P16基因突变情况进行研究。用银染 PCR- SSCP方法对 P16基因第二外显子突变情况进行研究 ,并对检出突变者用自动测序仪进行测序分析。检出1例纯合缺失 ,2例 P16基因第二外显子突变。测序分析发现 SU- DHL- 1P16基因第二外显子有 3处点突变 ,即密码子72的 GAC突变为 AAC,密码子 77的 GCT突变为 ACT,密码子 82与 83之间插入了一个 C。认为 P16基因在 B细胞恶性淋巴瘤细胞系中的突变率较高 ,提示其改变可能参与恶性淋巴瘤的发生发展。

极限稀释法的原理及其在造血细胞培养中的运用

长期以来,造血细胞体外培养计算克隆的方法一直沿用半固体法。由于支持物琼脂、甲基纤维素粘附于细胞表面,对于进一步采用电镜、染色体、同位素和单克隆抗体等分析带来很大困难,.且克隆计数由于35mm培养皿面积较大,人为误差很多。有无更好的方法?万景华等在此方面做了开创性工作,我们则在万氏的基础上加以发展,首先运用于多向祖细胞(CFU—Mix)的培养和白血病克隆形我的研究. 基本原理和计算公式在同一条件下,重复做几次独立试验,每次有两个对立的结果,事件A发生或不发生。根据这一基本原理设计了极限稀释法。

造血细胞体外培养在骨髓增生异常综合征中的应用及意义

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组变异性较大的克隆性造血系统疾病,多死于感染和出血等并发症或转化为急性白血病,病程长短不一.随着造血祖细胞体外培养体系的发展和方法上的改进,为探讨包括MDS在内的各种造血异常性疾病的发病机理提供了一种十分有用的手段.MDS造血祖细胞体外培养研究概况1.粒单祖细胞的异常生长:对MDS造血细胞体外培养研究最多的是粒单祖细胞(CFU-GM),其结果在总体上是相似的.大多数MDS患者,CFU-GM的生长与正常造血细胞相比有明显的异常,只是各家报道这些异常出现的频率和严重程度不同而已.主要包括CFU-GM形成率减少或缺乏。

急性髓系白血病Bcl-2基因表达及其临床意义

目的：探讨Bcl－2基因在急性髓系白血病（AML）中的作用。方法：应用APAAP法检测67例AML患者骨髓单个核细胞Bcl－2基因表达，半固体培养法检测CFU－L形成能力，并观察临床化疗效果。结果：发现AML患者Bcl－2基因表达显著高于正常对照组（P＜0．001），分化较成熟的M3型白血病表达率显著低于其它各亚型白血病（P＜0．01），Bcl－2蛋白表达与CFU－L形成无相关性，与患者外周血白细胞数呈正相关，高表达组CR率（47％）显著低于低表达率组（100％，P＜0．005）。结论：Bcl－2基因过度表达对AML的发生、发展有一定的作用，是造成耐药的重要原因，是判断AML预后的一个十分有用的指标。

55例白血病祖细胞体外生长类型及其临床意义的探讨

本文研究结果显示白血病祖细胞体外生长可以分为３种类型：依赖生长型、不生长型和自发性生长型，其中自发性生长型的白血病患者临床预后较其他类型差。

人急性髓系白血病细胞的无血清培养现况

本文比较了几种人急性髓系白血病细胞无血清培养(SFC)体系的组成,说明了体系中各血清替代物的作用。在SFC 中所形成的集落表明,人急性髓系白血病细胞呈现自发性生长、刺激因子依赖性生长及不生长等细胞群体异质性。同时对比了在有血清培养(SCC)体系中的生长,指出SFC 中,去除粘附细胞和T 淋巴细胞的必要性。

分子生物学在恶性血液病研究中的运用

进入90年代以来，分子生物学技术在恶性血液病的研究中显示越来越重要的作用。广泛渗透到发病机理，临床诊断、治疗方法．判断预后等诸方面，本文就其中的几个‘热点’问题作一评述．

白血病患者多向造血祖细胞培养后的透射电镜观察

本文运用透射电镜证明,所运用的极限稀释多向造血祖细胞(CFu—Mix)微量培养体系是体外研究造血细胞分化的重要方法。在加入一系列生长因子后,正常人骨髓细胞可向红、粒、巨核细胞系方向分化,而白血病细胞却不能,其集落细胞仍带有明显的白血病性质,提示白血病可能为多向造血祖细胞阶段的恶性变。

阿糖胞苷、环胞苷的体外细胞毒作用及与临床化疗的相关性

我们用两种体外药物敏感检测方法(微量液体克隆形成法、MTT比色法)检测了阿糖胞苷、环胞苷对正常人CFU—GM及白血病细胞的细胞毒作用及与临床化疗的相关性。微量液体克隆形成法的结果提示阿糖胞苷对正常人CFU-GM、K562细胞L CFU的细胞毒作用分别是环胞苷的2.60倍、4.04倍,且CFU-GM对阿糖胞苷及环胞苷的耐受性明显大于K562细胞的L-CFU。MTT比色法的结果提示阿糖胞苷对K562细胞群体的杀伤作用是环胞苷的2.32倍。微量液体克隆形成法提示含阿糖胞苷、环胞苷的多药平均敏感指数与临床化疗的总相符率为75％(9/12),阿糖胞苷、环胞苷的单药敏感指数与临床化疗的总相符率为91.61％(11/12),后者的相符率高于前者。

IL-2活化脐血细胞抗白血病效应的实验研究

探讨ＩＬ┐２活化脐血细胞的抗白血病效应。方法利用ＩＬ┐２作用于脐血细胞，以使其活化，然后再与带有标志基因ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ的ＨＬ┐６０及Ｋ５６２细胞共培养，应用Ｘ┐ｇａｌ组化染色法观察其对白血病细胞系的抑制和杀伤作用。结果活化脐血细胞在生长、集落形成方面与未活化脐血细胞无显著性差异（Ｐ＜０．０５）。在采用经ＩＬ┐２活化的脐血细胞与基因标记ＨＬ┐６０及Ｋ５６２培养体系中，经３天的共培养，携带基因标记的白血病细胞系明显受到抑制和杀伤作用，蓝染细胞率显著下降（ＨＬ┐６０培养前后分别为３４．６７±５．０１，１９．８３±３．３１，Ｋ５６２分别为３４．１７±３．７６，２０．５±３．７３）。