植物组织培养外植体灭菌技术研究进展

外植体污染一直是植物组织培养过程中极难解决的问题,外植体灭菌效果直接关系着植物组织培养能否成功启动。本文从影响外植体灭菌效果的因素、外植体灭菌方法、纳米粒子在外植体灭菌中的应用等方面综述了近些年植物组织培养外植体灭菌技术研究进展。结果发现:在干旱季节或连续的晴朗天气条件下采集外植体,污染率最低;在外植体表面灭菌之前先进行流水冲洗、洗涤剂(消毒液)浸泡、黄化、水培、热水浴等处理,可在一定程度上降低污染率;外植体表面消毒可使用氯化汞和次氯酸钠等消毒剂;当外植体有严重的内生菌时,可使用四环素、链霉素等抗生素进行抑制。此外,纳米粒子也越来越多地用于植物组织培养中污染物的抑制。

CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展及其在植物中的应用

CRISPR/Cas9系统可以对目标基因进行定向编辑,在植物基因功能研究和遗传改良中具有巨大的潜在应用价值,因其具有高效、操作便捷及成本低的特点,成为当前基因组编辑技术的主流。概述了CRISPR/Cas9系统的起源、分类、作用机制及其在农作物和林木基因功能验证和遗传改良中的应用,并对未来需要完善的相关问题和发展趋势进行了探讨。

基于CRISPR/Cas9系统构建拟南芥EXPA多基因编辑表达载体

CRISPR/Cas9系统是一种由sg RNA及Cas9核酸酶组成的适应性免疫系统,已被成功运用于多种植物基因组编辑。扩展蛋白(expansin, EXP)是一类可以使细胞壁伸展和松弛的细胞壁蛋白,对植物的各个组织生长发育都有着重要的作用,由EXPA、EXPB、EXLA和EXLB 4个不同的基因家族组成。本研究以拟南芥的EXPA基因为例,通过CRISPR/Cas9系统构建拟南芥EXPA多基因编辑的表达载体,并利用农杆菌介导CRISPR/Cas9表达载体的方法转化拟南芥,以创制拟南芥扩展蛋白多基因突变体,为后续的研究提供突变体材料。