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一种适于植物幼胚mRNA整体原位杂交的方法 被引量:1
1
作者 李师弢 吕应堂 杨弘远 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第1期105-106,共2页
A mRNA whole_mount in situ hybridization method is reported here for quick, direct analysis of the spatial and temporal mRNA expression patterns in plant young embryos. A cDNA clone THE 3 (tobacco heart embryo 3) was ... A mRNA whole_mount in situ hybridization method is reported here for quick, direct analysis of the spatial and temporal mRNA expression patterns in plant young embryos. A cDNA clone THE 3 (tobacco heart embryo 3) was isolated by differential screening from tobacco (Nicotiana tabacum L.) heart embryo cDNA library as compared with the globular embryo cDNA library. The distribution of THE 3 mRNA in tobacco heart embryos and globular embryos was investigated by a whole_mount in situ hybridization technique, showing that THE 3 is preferentially expressed in heart embryos. 展开更多
关键词 幼胚 mRNA整体原位杂交 烟草 胚胎发育
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In Vitro Development of Tobacco Primary Endosperm Cells in Microculture 被引量:1
2
作者 李师弢 房克凤 杨弘远 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第5期542-544,共3页
用酶解_研磨法分离出烟草 (NicotianatabacumL .)受精后胚囊和初生胚乳细胞进行微室饲养培养。培养基为Km8p附加各种其他成分 ,饲养细胞为分裂旺盛的烟草叶肉原生质体 ,在 2 5℃下静止暗培养。培养 3d后 ,初生胚乳细胞开始第一次分裂 ,... 用酶解_研磨法分离出烟草 (NicotianatabacumL .)受精后胚囊和初生胚乳细胞进行微室饲养培养。培养基为Km8p附加各种其他成分 ,饲养细胞为分裂旺盛的烟草叶肉原生质体 ,在 2 5℃下静止暗培养。培养 3d后 ,初生胚乳细胞开始第一次分裂 ,继续分裂至 14d时形成大的细胞团。首次报道了双子叶植物初生胚乳细胞的离体发育。 展开更多
关键词 primary endosperm cell in vitro development icotiana tabacum
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链霉菌胞外多糖139A生物合成中引导糖基转移酶基因的克隆和鉴定 被引量:2
3
作者 王玲燕 李师弢 +2 位作者 郭连宏 姜蓉 李元 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期723-729,共7页
链霉菌 139能够产生一种新的胞外多糖 139A ,该多糖具有抗类风湿性关节炎的活性。为研究多糖 139A的生物合成基因簇 ,首要策略是克隆到在多糖 139A的生物合成中起关键作用的引导糖基转移酶基因。根据其他几个种属的糖基转移酶氨基酸序... 链霉菌 139能够产生一种新的胞外多糖 139A ,该多糖具有抗类风湿性关节炎的活性。为研究多糖 139A的生物合成基因簇 ,首要策略是克隆到在多糖 139A的生物合成中起关键作用的引导糖基转移酶基因。根据其他几个种属的糖基转移酶氨基酸序列的两个保守区域设计简并引物 ,通过PCR方法扩增出相应的DNA片段作为探针 ,从链霉菌 139基因组文库中分离到引导糖基转移酶基因ste5 ,并定位于约 32kb的基因簇上。序列分析发现其蛋白序列与引导糖基转移酶具有较高的同源性 ,其C 端含有A ,B和C 3个保守区 ,N 端具有 5个跨膜区。引导糖基转移酶基因阻断突变株不能够产生多糖 139A表明其参与多糖 139A的生物合成。 展开更多
关键词 微生物胞外多糖 生物合成 糖基转移酶 基因阻断 链霉菌
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水稻原胚和刚启动分化的幼胚cDNA文库的构建与分析 被引量:3
4
作者 陈绍荣 李师弢 +1 位作者 吕应堂 杨弘远 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第2期214-216,共3页
Two cDNA libraries were constructed from microdissected 214 rice proembryos (2-3 d after pollination) and 121 just differentiating young embryos (3-5 d after pollination) respectively through RT_PCR technique. The pri... Two cDNA libraries were constructed from microdissected 214 rice proembryos (2-3 d after pollination) and 121 just differentiating young embryos (3-5 d after pollination) respectively through RT_PCR technique. The primary libraries had a total of 3.7×10 6 phages for the proembryos and a total of 2.5×10 6 phages for the just differentiating young embryos, in which 96% of the phages were recombinants. Insert sizes ranging from 400 bp to 3?500 bp were obtained. All of the above mentioned accorded with the general requirements of cDNA library construction. 展开更多
关键词 水稻 原胚 分化胚 CDNA文库 基因表达
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烟草合子与二胞原胚在离体培养中的发育 被引量:8
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作者 李师弢 傅缨 +2 位作者 孙蒙祥 杨弘远 周嫦 《实验生物学报》 CSCD 1998年第3期309-315,共7页
用酶解-研磨法分离烟草与大叶烟草受精后的胚囊,继之以显微解剖分离合子与二胞原胚。将3—5个合子或二胞原胚置于微室的琼脂糖小滴中,以预先培养3—4天、分裂1—2次的烟草、大叶烟草或黄花烟草叶肉原生质体饲养。培养基为KM8p与其它附... 用酶解-研磨法分离烟草与大叶烟草受精后的胚囊,继之以显微解剖分离合子与二胞原胚。将3—5个合子或二胞原胚置于微室的琼脂糖小滴中,以预先培养3—4天、分裂1—2次的烟草、大叶烟草或黄花烟草叶肉原生质体饲养。培养基为KM8p与其它附加成分。在25℃与黑暗下静置培养。培养3—4天,约60%合子完成第一次分裂。多数行不等分裂产生大小两个细胞。12天后形成少数原胚或多细胞团。二胞原胚培养亦分裂为多细胞原胚。研究了合子分离方法、合子发育时期、饲养细胞种类与培养天数等因素对合子离体发育的影响。 展开更多
关键词 烟草 合子 二胞原胚 离休培养 发育
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植物幼小原胚的电激转化 被引量:3
6
作者 李师弢 王胜华 杨弘远 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第6期598-602,共5页
用电激法将外源报告基因导入植物原胚获得瞬间表达.用酶解和显微解剖法分离出烟草含8~32个细胞的幼小原胚与含250~400个细胞的球形胚,导入GUS和GFP基因后,置于KM8p培养基 1~2d.当电场强度为 500~15... 用电激法将外源报告基因导入植物原胚获得瞬间表达.用酶解和显微解剖法分离出烟草含8~32个细胞的幼小原胚与含250~400个细胞的球形胚,导入GUS和GFP基因后,置于KM8p培养基 1~2d.当电场强度为 500~1500 V/cm时,可检测到 GUS蓝色反应和 GFP绿色荧光,其中幼小原胚在电场强度为 750 V/cm时,外源基因瞬间表达频率最高,为 2.2%,球形胚在电场强度为1250 V/Cm时表达频率最高为 5.9%.若以转化细胞占胚细胞总数的比例为有效转化频率,则幼小原胚的有效转化频率约为球形胚的7倍. 展开更多
关键词 植物 原胚 电激转化 遗传转化 转基因植株
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