肾透明细胞癌来源的IL4I1介导PD1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞募集的相关研究

目的:探讨肾透明细胞癌(ccRCC)来源的白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)对表达PD1的CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的诱导与募集作用。方法:利用公共数据库分析ccRCC组织中IL4I1的表达与CD8^(+)T淋巴细胞浸润及免疫功能相关分子表达的关系,通过免疫组织化学法进行验证;构建过表达IL4I1蛋白的769P细胞系并验证;荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达IL4I1 ccRCC细胞表达趋化因子的变化。结果:高表达IL4I1的ccRCC组织中有更多的CD8^(+)T淋巴细胞浸润(P=6.843×10^(-7)),其浸润水平与IL4I1的表达水平呈正相关(r^(2)=0.5764,P<0.001);且浸润的CD8^(+)T细胞多表达抑制型分子PD1。过表达IL4I1的ccRCC 769P细胞所表达的趋化因子配体(CCL2、CCL4、CCL5、CCL17)在mRNA水平显著下调(t=95.16、116.1、21.28、68.47,均P<0.05)。同时,细胞培养上清中CCL4、CCL5浓度明显升高(t=6.760、6.846,均P<0.05)。结论:ccRCC组织中IL4I1与PD1+CD8^(+)T淋巴细胞浸润密切相关,可能通过调控趋化因子的表达,参与免疫抑制型CD8^(+)T淋巴细胞在肿瘤局部的募集。

肾癌来源的IL4I1介导Treg诱导与募集的实验研究

目的:探讨肾癌细胞来源的白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)对调节性T细胞(Treg)的诱导与募集作用。方法:利用公共数据库分析肾透明细胞癌(ccRCC)组织中IL4I1表达与Treg浸润的关系,通过免疫组织化学法(IHC)进行验证;构建稳定敲低IL4I1的786-O细胞系,进行转录组测序(RNA-Seq)及基因集富集分析(GSEA);实时荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)比较敲低786-O细胞系IL4I1表达后肾癌细胞表达趋化因子的变化,流式细胞术(FCM)分析体外IL4I1对Treg诱导分化的影响。结果:IL4I1在ccRCC组织中过表达(t=6.029,P<0.05),并且随着IL4I1表达的升高,肿瘤组织中Treg数量增加(F=13.69,P<0.05)。GSEA显示,沉默IL4I1表达的786-O细胞系和对照细胞系的差异表达谱在细胞因子和趋化因子产生及负向调节其产生的生物学过程(BP)中富集(P.adjust=9.2×10^(-4)、7.5×10^(-4)、7.7×10^(-4)、2.67×10^(-2))。敲低IL4I1表达后,786-O细胞表达的CC趋化因子配体(CCL)3、CCL4、CCL5、CCL8、CCL17、CCL19在mRNA水平显著下调(t=6.250、7.716、20.640、5.324、6.360、3.484,均P<0.05),同时细胞培养上清中CCL4、CCL5浓度降低(t=6.773、13.64,均P<0.05)。与敲低表达IL4I1细胞共培养的外周血单个核细胞中Treg比例少于对照组(t=3.843,P<0.05)。结论:肾癌组织中IL4I1与Treg浸润密切相关,可能通过调控趋化因子的表达参与Treg在肿瘤局部的募集;肾癌细胞来源的IL4I1能够促进Treg的分化。

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体(英文)

目的利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47kD的条带;Westernblot分析证实表达的蛋白即Fab抗体。ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

热休克蛋白gp96-肽复合物肿瘤疫苗的应用前景与挑战

肿瘤组织来源的热休克蛋白gp96-肽复合物(heat shock protein 96-peptide complex,HSPPC-96)结合有肿瘤特异性抗原多肽,能够诱导特异性抗肿瘤免疫。自体HSPPC-96疫苗在延缓肿瘤复发和提高患者总体生存率等方面彰显优势,应用前景广阔。然而作为自体来源的个体化疫苗,HSPPC-96疫苗的实施和推广也面临着巨大的挑战,如肿瘤组织来源限制、对晚期肿瘤疗效不明确等问题。本文综合分析了HSPPC-96疫苗免疫治疗的临床进展、应用前景及其面临的挑战。

抗TNF-α蛋白Fab抗体的制备和鉴定

目的制备人源性抗肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白的可溶性Fab抗体。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况,ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体;ELISA筛选出的2株抗体(TA-04、TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功制备并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体。

基因工程技术制备抗IL-2蛋白抗体Fab片段及其鉴定方法的建立

目的利用基因工程技术制备人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab抗体片段,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的IL-2蛋白从人天然噬菌体抗体库中筛选出表达抗IL-2蛋白Fab抗体片段的阳性克隆,酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了抗IL-2蛋白的Fab段抗体,在SDS-PAGE中形成47kD的条带,Western blot证明为抗人Fab段抗体;ELISA证实该抗体片段具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与牛血清白蛋白、IL-4无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab片段,构建了一种制备基因工程抗体的有效途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

触珠蛋白在家兔肠系膜上动脉闭塞性休克前后血清差异表达的研究

目的:探讨家兔肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克前后血清蛋白质组学变化及触珠蛋白的差异表达情况。方法:应用家兔肠系膜上动脉夹闭法复制家兔SMAO休克模型,在此基础上通过双向电泳-质谱-生物信息学方法分析鉴定SMAO休克前后血清中的差异蛋白,并应用Western blot和Elisa对血清触珠蛋白在SMAO休克前后血清中的差异表达情况进行验证。结果:在家兔SMAO休克前后血清双向电泳图谱中发现19个差异蛋白点,其中11个蛋白质点只见于SMAO休克后血清双向电泳图中;8个蛋白质点明显见于SMAO休克前的血清双向电泳图中。鉴定并验证了触珠蛋白在SMAO休克后血清中含量增高。结论:家兔SMAO休克后血清触珠蛋白含量增高,可能参与了SMAO休克后机体的代偿调节。

家兔肠系膜上动脉闭塞性休克前后的血清比较蛋白质组学初步研究

目的:探讨家兔肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克前后血清蛋白质组学变化及其在SMAO休克发生中的作用。方法:应用家兔肠系膜上动脉夹闭法复制家兔SMAO休克模型,在此基础上通过双向电泳分离家兔SMAO休克前后血清中的蛋白,找出凝胶上的差异蛋白点,用基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱技术进行鉴定,并通过生物信息学对差异蛋白的功能进行分析。结果:在家兔SMAO休克前后血清双向电泳图谱中发现19个差异蛋白点,其中11个蛋白质点在SMAO休克后血清中表达明显上调;8个蛋白质点在SMAO休克后血清中表达明显下调。从中选取4个差异最明显的点经基质辅助激光解吸/电离串联飞行和数据库搜索共鉴定出符合条件的2个差异蛋白点,为对氧磷酶和触珠蛋白,均在SMAO休克后血清中含量增高。结论:家兔SMAO休克前后血清蛋白质组会发生明显变化,对氧磷酶和触珠蛋白可能参与了SMAO休克后机体的代偿调节。

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。

超声和CT检查对肾上腺区占位性病变的诊断价值对比分析

目的:对比分析超声和CT两种检查方法对肾上腺区占位性病变定位和定性诊断的应用价值。方法:回顾分析481例肾上腺区占位性病变,男220例、女261例,左侧213例、右侧260例,双侧8例。术前进行肾上腺超声和CT检查,以术后病理检查结果为标准比较两种方法定位和定性诊断的有效性。结果:病理结果:源于肾上腺的皮质腺瘤285例,嗜铬细胞瘤56例,囊肿51例,髓样脂肪瘤26例,神经纤维瘤6例,神经鞘瘤3例,节细胞性神经瘤12例,结核3例,脓肿1例,平滑肌瘤3例,肉瘤1例,神经母细胞瘤1例,腺癌5例。肾脏囊肿2例,肾脏肿瘤22例,副脾2例,腹膜后平滑肌瘤和神经母细胞瘤各1例。超声定位诊断准确率95.4%,CT定位诊断准确率93.6%(χ2=1.617,P=0.203),差异比较无统计学意义;超声定性诊断率64.7%,CT为89.6%(χ2=83.721,P=0.000),差异比较有统计学意义。结论:肾上腺区占位性病变超声定位诊断价值基本等同于CT,定性诊断价值远低于CT。

膀胱移行细胞癌复发相关因素分析

回顾性分析167例复发性膀胱移行细胞癌患者的临床病理资料。选择患者的性别、年龄、病理分类、肿瘤直径、肿瘤数目、生长部位、形态、治疗方式、有无血管浸润及有无炎细胞浸润10项因素与复发时间进行COX回归分析。结果初次分类、肿瘤数目、血管浸润和手术方式与复发时间有相关性(P均<0.01)。认为初次分类为高恶性膀胱移行细胞癌较低恶性癌易于在短期内复发;多发性肿瘤及有血管浸润者,复发时间明显短于单发性肿瘤及未发生血管浸润的肿瘤;恰当的手术方式能够明显延长复发时间。

染色质可接近性在前列腺癌研究中的作用

研究表明在基因表达的动态平衡调控中染色质的三维空间结构变化和染色质可接近程度处于动态变化中。在前列腺癌的基础研究中,染色质可接近被用于病因探索和药物研发等方面。利用染色质可接近性和染色质组学,许多研究人员在染色质层面揭开了前列腺癌的神秘面纱。本文就染色质可接近性这一概念在前列腺癌研究中的相关研究进展加以综述。

新生抗原在肿瘤免疫治疗中的应用进展

新生抗原(neoantigen)是位于恶性肿瘤细胞表面并在基因变异的基础上产生的带有特异性氨基酸序列蛋白,它们具有肿瘤特异性并普遍存在于不同的肿瘤组织中,从而能够被T细胞识别并进一步引起免疫反应。在不同肿瘤中,新生抗原的数量与免疫活性有关,并进一步影响检查点阻断后的肿瘤抑制。多项研究表明,新生抗原可在肿瘤治疗中具有潜在作用,其安全性和可靠性得到了认可,它不仅为肿瘤免疫疗法提供了理论基础,也进一步推动了个性化医疗的进程。

新生抗原与个体化肿瘤免疫治疗

新生抗原(neoantigen)是一种位于肿瘤细胞表面的特异性抗原,是肿瘤基因突变的产物,这种突变在正常细胞中不存在。过去几年的研究表明新生抗原在肿瘤免疫治疗中起着关键作用,新生抗原的识别筛选和鉴定加速了肿瘤患者个体化免疫治疗的发展,终将使更多患者受益。

零缺血小切口肿瘤剜除术在T1b期肾癌中的手术技巧和应用体会

目的探讨零缺血小切口肿瘤剜除术治疗T1b期肾癌的手术技巧及临床应用效果。方法回顾性分析46例分别采用小切口方式（分为阻断肾蒂与不阻断肾蒂）、传统开放（分为阻断肾蒂与不阻断肾蒂）和腹腔镜方式（均阻断肾蒂）治疗T1b期肾癌的临床效果。结果小切口组在术中出血量、手术时间、术后恢复方面均较其他两种术式有显著优势（P〈0.01）;小切口组内阻断肾蒂与未阻断肾蒂相比,术前、术后6个月肾小球滤过率（GFR）变化量分别为（5.1±1.7）mL/min和（1.1±0.8）mL/min,差异有统计学意义（P=0.008）。术后随访24～108个月,3组肿瘤局部复发差异无统计学意义（χ^2=0.46,P=1.0）。结论在T1b期肾癌的治疗中,零缺血小切口肿瘤剜除术在有效的切除肾脏肿瘤的基础上,能够最大限度地保护肾功能,减少手术创伤。

人源化Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

目的:构建人天然Fab段噬菌体抗体库,为人源抗体的制备建立技术平台。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,构建噬菌体抗体库,酶切鉴定有无插入片段并测序分析,用IL-2和地高辛进行富集筛选。结果:最终构建的抗体库库容约为8.4×107,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率是70%,DNA测序分析证实抗体重链属IgG亚类,轻链为λ链。用IL-2和地高辛进行三轮筛选,抗体库均得到了不同程度的富集。结论:成功构建了一个天然的人源化噬菌体抗体库,可用于下一步胰淀素人源化抗体的筛选、纯化和表达。

胰淀素Fab抗体的筛选及初步鉴定

目的:从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选胰淀素(amylin又称为胰岛淀粉样多肽)Fab抗体,测定其特异性及抗原结合活性。方法:以胰淀素为抗原,对抗体库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选;将从人源噬菌体抗体库中筛选出的阳性克隆,提取其质粒、切除gⅢ、自身环化并转入大肠杆菌中,以IPTG诱导表达可溶性抗体,最后用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定抗原结合活性和特异性。结果:成功筛选并表达了抗胰淀素的可溶性Fab抗体,经SDS-PAGE蛋白电泳,在相对分子质量约为47 kD处可见一蛋白条带。ELISA和Western blot证实了该Fab片段与胰淀素抗原的结合活性和特异性。结论:利用噬菌体抗体库技术获得了人源性的特异抗胰淀素Fab抗体,为临床进行下一步研究奠定了基础。

人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选

目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库。酶切和PCR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析。用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析。结果:最终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70%。阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集。阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性。结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础。