Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（ＦＳＫ）是一种植物二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂，实验发现：ＦＳＫ和作为参照的诱导分化剂维甲酸（ＲＡ）单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性，并降低膜ＰＫＣ活性，ＦＳＫ可使表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３－１，４，５）水平降低至对照组的４４．４％至６７％；ＦＳＫ与ＲＡ合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶（ＡＫＰ）的活性。以上结果表明，ＦＳＫ对成骨样细胞内磷脂酰肌醇信息传递体系有深刻影响，可能与其调节细胞的增殖分化有关。

膜去极化与cAMP在胰岛细胞株HIT中诱导CBP片段的转录活性

为了研究 Ｃ Ｂ Ｐ在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中调节基因转录的机制，将不同的 Ｃ Ｂ Ｐ片段瞬时转染到细胞中，观察其转录活性．实验表明，在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中，膜去极化及 ｃ Ａ Ｍ Ｐ 均可诱导 Ｃ Ｂ Ｐ３０（ Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ结合功能区）转录活性增强，并有协同效应． Ｐ Ｋ Ｃ对 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 的转录活性无影响；与 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ有更强结合力的 Ｃ Ｂ Ｐ Ｋ Ｉ Ｘ Ｓ／ Ｂ（氨基酸序列短于 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 的 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ结合功能区）其基本转录活性及膜去极化、ｃ Ａ Ｍ Ｐ诱导下的转录活性均比 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 更强．反义 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ 的过度表达可降低 ｃ Ａ Ｍ Ｐ诱导的 Ｃ Ｂ Ｐ的转录活性．提示在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中，膜去极化及 ｃ Ａ Ｍ Ｐ对共转录因子 Ｃ Ｂ Ｐ转录活性的调节作用通过 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ介导．

腺苷及其衍生物对细胞跨膜信息传递的影响

腺苷可使ROS 17/2.8细胞膜腺苷酸环化酶(AC)活性及膜流动性降低。腺苷与甲状旁腺素(PTH)合用,可显著地降低PTH对AC活性的激活程度,并同时使PTH降低碱性磷酸酶(AKP)活性的程度有所减弱。而当腺苷衍生物木糖腺苷或木糖腺苷8-六氢吡啶与PTH合用时却使AC活性大为增加,表明木糖基团的引入,可使腺苷对ROS 17/2.8细胞跨膜信息传递具有截然相反的作用。

膜去极化和cAMP在胰岛细胞株HIT中活化CBPC端片段

在胰岛细胞株 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中，用瞬时转染法观察高 Ｋ＋ 导致的膜去极化与ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段转录活性的影响．发现二者均可诱导 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的转录活性增强，并有协同效应； Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的突变体（ Ｓｅｒ１ ７７２ 突变为 Ａｌａ）表现相同的诱导特性，但其基本转录活性降低．说明膜去极化和 ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段转录活性的诱导作用与 Ｐ Ｋ Ａ 磷酸化位点 Ｓｅｒ１ ７７２ 无关，而该位点的磷酸化对调节 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段的基本转录活性起重要作用．蛋白激酶 Ｃ 通路对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｔｉ的转录活性无影响．

甲胎蛋白对HeLa细胞N-ras、p53和p21^(ras)表达的促进作用

大量研究已证明甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞的增殖具有调节作用 .为探讨AFP对细胞生长促进作用的分子机理 ,采用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,用Northern印迹分析法分析不同作用时间时细胞N rasmRNA的表达以及用Western印迹分析法分析p5 3、p2 1ras的表达 .结果发现 ,在AFP(2 0mg L)作用后 ,HeLa细胞的N rasmRNA、p5 3蛋白质和p2 1ras蛋白质的表达量与对照组比较在 12h和 2 4h时都有明显增加 .AFP的作用均可被抗AFP单克隆抗体所拮抗 .实验结果提示 ,AFP对细胞生长的调节作用可能通过促进这些原癌基因的表达来实现 .

甲胎蛋白对Hela细胞增殖的促进作用

目的 :采用由脐带血血清中提纯的胎蛋白 (Alpha-fetoprotein,AFP)作用于体外培养的Hela细胞。方法 :通过对MTT计数 ,3H -TdR掺入以及细胞周期时相改变等指标的检测。结果 :发现AFP(浓度大于10mg/L)对Hela细胞增殖有明显的促进作用。结论

中药固真方对成骨样细胞UMR106增殖分化的影响

中药固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用 .为了进一步探讨其作用机理 ,研究观察了固真方对成骨样细胞 UMR1 0 6DNA合成、原癌基因 c- fos,c- ki- ras m RNA表达以及骨钙素 (osteocal-cin)基因 m RNA表达的影响 .结果表明 :固真方可明显促进 DNA合成 ,且在 1 0 -5稀释度时达高峰 ;增殖相关的原癌基因 (c- fos,c- ki- ras) m RNA表达增强 ;成熟成骨细胞特征性标志蛋白——骨钙素基因 m RNA表达增强 .结果提示 :中药固真方可能通过影响一些与增殖相关的原癌基因及骨钙素基因表达而促成骨样细胞 UMR1 0

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号传递系统的作用

为了探讨阿片肽与细胞表面受体结合后所产生的生物效应及其机制 ,用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽 ( MENK)及抗 δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞 ( NS- 1 ) ,然后测定蛋白激酶A( PKA) ,蛋白激酶 C( PKC)活性及三磷酸肌醇 ( IP3 )含量 .研究结果表明 ,NENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .MENK对 PKC影响呈双向反应 ,0 .1 μmol/L MENK可以升高胞浆 PKC活性 ,但却明显降低胞膜 PKC活性 ;在 MENK浓度为 1 0μmol/L时则情况刚好相反 .1 μmol/L的 MENK可明显降低胞浆及胞膜 PKC活性 ,抗体可拮抗这种下调作用 .MENK可降低细胞内 IP3 的含量 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .由此可以推论 :MENK在与 δ阿片受体结合后 ,可以经过多种信号传导系统来调节细胞功能 ,从而产生不同的生物效应 .

甲状旁腺素和胰岛素样生长因子促成骨样细胞ROS 17/2.8增殖分化中的协同作用

间歇性小剂量地给予甲状旁腺素 (parathyroid hormone,PTH)可促进成骨 .胰岛素样生长因子 - I(insulin- like growth factor- I,IGF- I)由成骨细胞所产生并贮存于骨基质中 ,可促进成骨细胞的增殖分化 .为进一步了解向钙性激素和骨源性生长因子对骨生长的影响 ,利用成骨样细胞 ROS1 7/ 2 .8进行体外实验 ,观察了 PTH和 IGF- I这两种在骨生长和代谢中有重要作用的激素和因子相互作用的效果 ,并对其相互作用机制作出初步探讨 .结果显示 :联合使用 IGF- I及 PTH(间歇性给药 )时 ,(1 ) SRB(sodium rhodamine B,SRB)染色显示经 PTH(1 0 -9mol/ L,间歇给药 )和 IGF- I(1 0 -9mol/ L)联合处理的细胞 ,其数目明显增加 ,且明显高于单独处理组 ;(2 ) 3H- Td R参入增加 ,也明显高于单独处理组 ;(3)与增殖相关的原癌基因 (c- fos,c- jun,c- ki- ras)的表达增强 ,明显高于单独处理组 ;(4)骨钙素 (osteocalcin)基因 m RNA表达增强 ,明显高于单独处理组 ;(5) IGF- I(1 0 -8mol/L,1 0 -9mol/ L)可使 PTH受体基因 m RNA表达增强 .这些结果提示 PTH和 IGF- I在成骨样细胞ROS 1 7/ 2 .8增殖分化中具有协同作用 ,原癌基因的表达增强可能是其作用的一个环节 .此外 ,IGF- I可能通过增强 PTH受体表达 ,使细胞对

甲状旁腺素、胰岛素样生长因子-Ⅰ对骨特征性标志蛋白的影响

为了阐明甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ，ＰＴＨ）、胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ，ＩＧＦ－Ⅰ）在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时对其分化状况的影响，研究了ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ对骨特征性标志蛋白碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌ－ｃｉｎ）ｍＲＮＡ表达及骨胶原蛋白（ｃｏｌａｇｅｎ）合成的影响．结果表明，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可抑制ＡＬＰ活性，ＰＴＨ的抑制作用强于ＩＧＦ－Ⅰ，抑制作用具有时间剂量依赖性；ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可诱导骨钙素ｍＲＮＡ表达增加；ＰＴＨ能够促进３Ｈ－脯氨酸参入新生小鼠颅骨组织，既ＰＴＨ能够骨胶原蛋白合成增加．这些结果提示，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时也促进其分化，表明在成骨细胞的生发成熟过程中，增殖、分化现象相辅相成，相伴而行．

科学博士学位授予中不唯SCI的评价体系

提出了不唯SCI的概念,介绍了北京大学医学部在博士学位授予工作中的做法,即在保证质量的前提下,放宽科学博士学位授予中论著的发表时限,优秀博士生可先获得学位后发表论著;配套建立论著追溯、导师信用档案、学位-招生反馈回路等保障制度,形成科学、客观、量化的科学博士学位质量评价体系。

甲胎蛋白对细胞增殖的调节作用

以往认为甲胎蛋白 (AFP)的功能犹如成人血清清蛋白 ,近年来发现AFP对免疫细胞、肝癌等多种细胞的生长有调节作用。本文就AFP对细胞生长调节作用的新功能进行阐述。

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。

甲状旁腺素、胰岛素样生长因子-1可加速成骨样细胞ROS17/2.8增值周期的进程

甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)不仅在调节钙磷代谢中可促进骨发生破骨细胞性溶骨,也可促进骨的合成代谢作用。近年发现PTH还可促进成骨细胞的增殖分化。其细胞生物学和分子生物学机理尚待研究。本实验以成骨样细胞ROS17/2.8为研究材料,以胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)为细胞增殖的阳性对照,检测了PTH对DNA合成、细胞周期进程及cyclin E和cyclinA的表达,以求探讨PTH促成骨细胞增殖时对细胞周期的影响。结果表明,PTH可促进DNA合成,改变细胞周期各时相细胞比例及增加cyclin E和cyclin A的表达。该结果提示PTH可加速成骨细胞增殖周期的进程。

辅调节因子在核受体基因表达调控中的作用

核受体 ( nuclear receptor)在增强或抑制基因转录时 ,需借助于诸多辅调节因子的协同作用 ,使调节更为精细、有效及特异 .辅调节因子 ( coregulator)可区分为辅激活因子 ( coactivator)和辅抑制因子 ( corepressor)两大类 ,均具有多种功能各异的蛋白质因子 ,分别汇聚于核受体上构成不同复合体 .它们的主要作用机理是 :( 1 )促使核小体中的组蛋白乙酰基化 ,导致与 DNA的结合松散 ;或脱乙酰基 ,而使组蛋白与 DNA的结合回复紧密状态 ,从而创造一个有利于转录或封闭转录的局部环境 ;( 2 )作用于通用转录因子及 RNA聚合酶 ,以激活转录或抑制转录 .

甲胎蛋白受体的性质及其所介导的cAMP-PKA信号转导途径

研究HeLa细胞膜上甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)受体的存在情况及其介导的信号转导 .先用Na[12 5I]标记AFP ;标记的AFP和培养的HeLa细胞结合 ,Scatchard法和受体 配体结合法分析受体数目 ;再用放射免疫结合法分析在百日咳毒素 (pertussistoxin ,PTX)预处理前后AFP对细胞内环腺苷酸 (cAMP)浓度及细胞内蛋白激酶A(proteinkinaseA ,PKA)活性变化的影响 .在HeLa细胞膜表面存在 2种不同解离平衡常数 (Kd)的AFP受体 ,Kd1=5 2pmol L(2 10 0位点 细胞 ) ;Kd2 =2 3nmol L (114 0 0位点 细胞 ) .在AFP(2 0mg L)作用下 ,HeLa细胞内cAMP浓度变化及PKA活性的改变为与对照组比较 ,用PTX预处理前cAMP浓度升高 2 6 7% ,PKA活性增高 10 3 2 % ;用PTX预处理后升高 86 % ,PKA活性增高 2 5 3% .抗甲胎蛋白单克隆抗体可阻断AFP对细胞cAMP浓度和PKA活性的影响 .结果证明 ,在HeLa细胞膜上有 2种不同解离平衡常数的甲胎蛋白受体存在 ,受体有可能通过cAMP PKA途径介导信号转导 .

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的作用及其机制。方法:用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkep-halin,MENK)及抗δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性,并采用放射免疫分析法测定其三磷酸肌醇(IP3)的含量。结果:MENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。MENK对PKC影响呈双向反应,0．1μmol/ L MENK可以升高胞浆PKC活性,但却明显降低胞膜PKC活性;MENK浓度为10μmol/L时PKC 活性的改变则与此相反;1μmol/L的MENK可明显降低胞浆及胞膜PKC活性,抗体可拮抗这种下调作用。MENK可降低细胞内IP3的含量,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。结论:MENK 在与δ阿片受体结合后,可以通过多种信号转导系统来调节细胞功能,从而产生不同的生物效应。

Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用

Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。

甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞和人肝癌Bel 7402细胞生长具有抑制作用

目的 :研究甲硫氨酸脑啡肽对体外培养的NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞增殖的影响。方法 :MTT微培养染色法检测不同质量浓度的甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞的作用以及一定质量浓度的纳洛酮、阿片δ受体单克隆抗体、5 氟脲嘧啶对这种作用的影响。结果 :(1) 10mg·L-1至 80mg·L-1的甲硫氨酸脑啡肽对这 2种细胞均有不同的抑制效应 (NIH3T332 %～ 6 6 %与Bel740 2 36 %～ 6 4% ) ;(2 )纳洛酮能阻断甲硫氨酸脑啡肽对细胞抑制效应 ,阿片δ受体单克隆抗体没有这种阻断能力 ;(3) 5 氟脲嘧啶 (10mg·L-1)和甲硫氨酸脑啡肽 (5 0mg·L-1)有协同作用。结论 :甲硫氨酸脑啡肽能抑制细胞增殖。提示NIH3T3细胞和Bel 740 2细胞胞膜上可能存在阿片 ζ受体介导。

固真方对UMR106成骨样细胞蛋白激酶活性的影响

探讨中药固真方对细胞信号转导体系中蛋白激酶活性的影响。结果 :表明经固真方处理的大鼠UMR10 6成骨样细胞的蛋白激酶A、蛋白激酶C以及酪氨酸蛋白激酶活性均有增高 ,分别为对照组的137 5 %、362 4 %及 2 0 2 6% (P <0 0 1或P <0 0 5 )。提示 :固真方可活跃和增进细胞的信号转导 ,这可能是其促细胞增殖的一种机制。