骨形态发生蛋白4诱导下骨骼肌内异位骨化的细胞来源

背景:骨骼肌异位骨化是临床上严重的并发症。对于骨骼肌异位骨化而言,其参与成骨过程中的细胞仍不明确。目的:观察肌细胞及筋膜细胞以及内皮细胞在骨肌中异位骨化过程中的参与情况,观察骨形态发生蛋白4诱导下骨骼肌内异位骨化的细胞来源。方法:培养C2C12细胞和诱导培养基数天下C 2 C 12细胞形成的肌管,将质量浓度500 ng/mL骨形态发生蛋白4分别加入培养基后,显微镜下观察处理10 d内C2C12细胞和肌管是否继续增殖;按不同比例共培养大鼠肌细胞(L6)和人成纤维源性细胞(fibroblast-derived cells,FDC),通过番红O染色和阿尔新蓝染色研究上述细胞在质量浓度500 ng/mL的骨形态发生蛋白4和质量浓度10 ng/mL的转化生长因子β3处理下21 d内成骨和成软骨分化潜力。使用转基因动物FVB/N-TgN(TIE2-LacZ)182Sato小鼠,通过在基因鼠大腿肌间隙植入含有15μL的腺相关病毒-骨形态发生蛋白4(5×1010 PFU/mL)10 d及14 d,再通过X-gal染色来观察异化骨中有无新血管内皮生成。结果与结论:①骨形态发生蛋白4导致肌束退化并增加C2C12细胞增殖。与其他组相比,FDC组具有较高的阿尔新蓝和番红O染色面积(P<0.05)和较低碱性磷酸酶染色面积(P<0.05);而L6组和其他组相比具有更大的碱性磷酸酶染色面积(P<0.05),但阿尔新蓝和番红O染色面积较小(P<0.05)。②将腺相关病毒-骨形态发生蛋白4吸附的明胶海绵移植到FVB/N-TgN(TIE2-LacZ)182Sato小鼠中会导致异位骨化。③X-gal染色结果显示,在软骨细胞及异化骨中无明显染色,提示Tie2+内皮细胞不参与异位骨化的形成。④结果证实,在腺相关病毒-骨形态发生蛋白4诱导的骨骼肌异位软骨化过程中,成纤维细胞是软骨细胞的主要细胞来源,而肌源性细胞是成骨细胞的主要来源。Tie2+内皮细胞可能不是软骨和骨的细胞来源。

全髋关节置换术假体稳定性的研究进展

随着人口老龄化的加剧和对高品质生活的渴望,对全髋关节置换术(THA)的需求逐年增加。脱位仍然是THA术后的常见并发症。尽管利用3D建模或导航系统能帮助医生较为准确的评估假体安放位置,但是术中稳定性检查仍是最可靠的评估手段。目前临床医师对于假体稳定性检查方法的认知还有一定不足,本文章结合文献报道内容,对THA假体稳定性的研究现状进行分析,主要目的在于为手术医生提供参考,现作如下综述。

膝关节骨性关节炎分子发病机制和治疗展望

膝关节骨性关节炎（osteoarthritis,OA）是一种常见的非对称性、非炎症性、无全身性征象的疾病,是骨科临床的常见病和多发病,多表现为膝关节的疼痛、畸形、不同程度的功能障碍,严重影响患者的生活质量和劳动能力[1]。目前临床上该病的治疗方法主要有：1非手术治疗,包括健康教育及生活指导、针灸推拿、康复治疗、药物治疗。2手术治疗,主要包括关节镜下膝关节冲洗和清理术、截骨术、关节置换术和膝关节融合术。

组织工程化骨组织诱导脊柱融合的实验研究

目的在体外构建一种自体骨组织替代物,回植入体内,以期诱导兔脊柱融合。方法体外培养兔的骨髓基质干细胞,基因重组工程生产出具有诱骨活性的重组人骨形态发生蛋白-4(recombinanthumanbonemorphogeneticprotein-4,rhBMP-4),采用真空冷冻抽干技术将一定量的rhBMP-4和Ⅰ型胶原结合,构建出一种新的载体,并将一定量的骨髓基质干细胞吸附在载体上。建立兔脊柱关节突融合的动物模型,实验组植入复合rhBMP-4和骨髓基质干细胞的Ⅰ型胶原,对照组只采用Ⅰ型胶原和骨髓基质干细胞,植入兔脊柱的关节突之间来诱导脊柱融合。结果应用rhBMP-4和Ⅰ型胶原组新骨形成良好,此侧的脊柱融合良好,而对侧无明显的骨组织形成。结论应用含有骨生长因子、骨前体细胞和胶原载体的复合物是一种较为理想的自体骨组织替代物。

BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定

目的利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白 - 4 (BMP - 4 )。 方法应用RT -PCR技术 ,从成熟人的胎盘组织中扩增出长 0 .34Kb编码人骨形态发生蛋白 - 4成熟肽的基因序列 ,经测序证实后 ,装入表达载体pET - 2 2b ,诱导表达后SDS -PAGE显示在 14kd处有一明显的表达条带。经初步鉴定 ,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中 ,部分以包涵体的形式存在于沉淀中。将沉淀中的包涵体蛋白纯化、变性和复性处理 ,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后 ,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性。 结果第 14d和 2 1d ,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成。 结论大肠杆菌表达的BMP -

人骨形态发生蛋白-4成熟肽cDNA的克隆

目的 :克隆人骨形态发生蛋白 4完整成熟肽的基因。方法 :根据Genebank人骨形态发生蛋白 4的基因序列化学合成两条引物 ,从人胎盘组织中提取得到总RNA ,用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR )技术扩增出长 0 .3 4kb编码人骨形态发生蛋白 4(BMP 4)成熟肽的基因序列。将所得的基因片段插入克隆载体PBluescriptⅡSK质粒中并转化大肠杆菌TG 1,提取重组质粒 ,酶切鉴定并测序。结果 :RT PCR产物琼脂糖凝胶电泳显示一长约 3 70bp的条带 ,阳性克隆质粒经双酶切可切出约 3 5 0bp的片段 ,全自动DNA测序结果表明和Genebank中的序列完全相符。结论 :通过反转录聚合酶链式反应可从人胎盘组织中成功克隆出人BMP 4成熟肽基因。

股骨颈骨折固定术现状与展望

股骨颈骨折是老年人常见病和多发病,根据病人的年龄、身体状况,骨折线的部位有多种治疗方法。传统的牵引疗法,需要长时间的绝对卧床,易产生许多并发症,如肺炎、褥疮、心血管疾患等。某些手术疗法对骨的局部骨结构及血供破坏严重,常导致骨折延迟愈合、不愈合、股骨头缺血坏死、创伤性关节炎等后遗症。股骨颈骨折固定术是临床常用的治疗方法,其固定术包括内固定术和外固定术两大类,本文旨在从生物力学的观点和原则出发对股骨颈骨折固定的器械和装置加以分析、论证。并对其将来的发展提出一些科学的看法和设想。

基因治疗与脊柱脊髓疾病

分子生物学的发展使基因治疗在医学的各个领域开始了探索性的研究。应用于脊柱脊髓疾病的基础研究主要在脊柱融合、椎间盘退变和再生、小关节疾患、脊髓损伤等方面,具有广阔的发展前景。

胰岛素样生长因子-1与碱性成纤维样生长因子联合应用对大鼠坐骨神经再生的影响

目的创建神经再生室,并注入胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和碱性成纤维样生长因子(bFGF),探讨其联合应用对大鼠坐骨神经再生功能的影响。方法将80只雄性SD大鼠随机分为5组,每组16只。手术离断坐骨神经,造成10 mm的缺损,用自制甲壳素导管桥接神经两断端,形成神经再生室。A组注入生理盐水,B组注入明胶,C组注入IGF-1凝胶,D组注入bFGF凝胶,E组注入IGF-1+bFGF凝胶。加入药物后分别于术后4、8周收集标本,观察再生神经的大体形态,检测神经传导速度,并进行特殊染色及S-100免疫组化检测。结果术后4周大体观察,见甲壳素管部分吸收,8周见甲壳素管基本完全吸收,A、B组再生神经纤维较少,色淡红质嫩,C、D组再生神经纤维增多,色淡黄,较细,E组再生神经纤维浅黄、质韧、弹性佳。神经电生理检测示,E组神经传导速度值均大于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。特殊染色及免疫组化显示,E组再生神经细胞数目及S-100细胞阳性数目平均值均大于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合应用IGF-1、bFGF对周围神经损伤后的神经细胞再生具有协同促进作用。

脂肪和滑膜来源间充质干细胞成软骨分化能力的比较

目的:比较人膝关节脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)和滑膜来源间充质干细胞(SDSCs)的成软骨分化能力,寻找更为合适的种子细胞来治疗骨性关节炎软骨病损。方法:取20例骨性关节炎患者的髌下脂肪垫、滑膜组织和剥离的软骨,分离、培养ADSCs、SDSCs和炎性软骨细胞(ICs),观察增殖和分化情况。收集体外3D培养7、14、21 d的3种细胞培养液上清,应用ELISA检测IL-1、IL-6和IL-10的分泌情况。取3D培养21 d获得的细胞团块,测量其直径并经番红O、阿尔新蓝及Ⅱ型胶原免疫组化染色分析细胞成软骨分化情况。结果:3种细胞均呈现类成纤维细胞形态,其中ICs多为短梭形多分支,而ADSCs和SDSCs多为长梭形。不同时间点ICs分泌的IL-1和IL-6高于SDSCs和ADSCs,ADSCs分泌的IL-10高于SDSCs及ICs(P <0. 05)。3D培养21 d后,SDSCs细胞团块直径大于ICs和ADSCs(P <0. 05)。阿尔新蓝和番红O染色结果发现,SDSCs和ICs的阳性区域面积大于ADSCs(P <0. 05);Ⅱ型胶原免疫组化染色结果发现ICs和SDSCs阳性区域面积均大于ADSCs(P <0. 05)。结论:SDSCs成软骨分化能力较强,ADSCs的抗炎作用较强。

侧身下肢牵引固定器的研制与应用

介绍一种侧身下肢牵引固定器，把卧床固定和自攻式牵引装置组合为一体，具有牵引复位和固定两种功能。经临床应用牵引与固定效果良好，适用于下肢骨折、关节脱位的复位与固定。

姜黄素和硫酸镁联合应用协同促进炎性软骨细胞的逆分化

背景:骨性关节炎是老年人疼痛和致残的常见原因,其根本原因在于不适当的机械应力、炎症递质和生化因子的共同作用。姜黄素已被证明具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、辐射防护以及治疗骨关节炎等作用,硫酸镁(MgSO_4)同样具有缓解关节疼痛,促进关节破坏的作用。目的:探究姜黄素和MgSO_4联合应用协同促进炎性软骨细胞逆分化的作用机制。方法:原代培养炎性软骨细胞,在体外单层培养条件下,细胞增殖实验检测炎性软骨细胞的增殖情况。实验细胞分为4组,进行体外3D诱导逆分化培养,炎性软骨细胞组为炎性软骨细胞单独培养,姜黄素组采用姜黄素干预培养,MgSO_4组为采用MgSO_4干预培养,联合治疗组为姜黄素+MgSO_4联合干预培养,共培养18 d。结果与结论:(1)细胞增殖实验显示,第3代炎性软骨细胞早期增殖速率较高,分化程度较低;(2)定量PCR检测显示,联合治疗组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX9 mRNA表达量均高于姜黄素组或MgSO_4组(P <0.01);(3)体外3D诱导分化培养中联合治疗组的大体标本的尺寸和软骨逆分化的阿尔新蓝染色、番红O染色的阳性区域均明显高于其他3组(P <0.01);(4)TUNEL染色显示,联合治疗组及MgSO_4组凋亡特异性染色的阳性区域均明显小于另外2组(P <0.01);(5)结果证实,联合应用姜黄素和MgSO_4具有协同促进炎性软骨细胞逆分化的作用。

内外固定组合装置治疗股骨颈骨折的生物力学原理

目的：作者根据生物力学原理研制出一种新型治疗股骨颈骨折的组合固定器械，并对其进行生物力学测试。方法：职7具尸体髋关节标本，模拟股骨颈骨折然后采用组合装置固定，对照组采用单纯加压螺纹钉固定，对比两组固定的生物力学强度和刚度。结果：实验组在应力－应变，位移，刚度，抗扭强度和承载能力5方面均优于对照组。结论：组合装置固定优于单纯螺纹钉内固定。

博物馆文物陈列与文物保护意识问题研究

博物馆作为收藏文物的重要场所,主要以陈列展览为主要内容,文物不仅能够传承文化,还具有一定的教育作用。文物在陈列展出过程中需要将文物安全作为重要原则,让文物在稳定、整洁的环境中,尽量减少对文物的干预,以便于能够更好的还原文物所蕴含的历史信息,才能够更好的体现出文物的美学价值和研究价值。本文以博物馆文物陈列与文物保护意识问题为主题进行研究,分析现阶段博物馆文物陈列与保存所存在的问题以及相关解决措施,为从事相关行业的工作者提供一定的参考。

人脂肪间充质干细胞和滑膜间充质干细胞协同抑制炎性软骨细胞的退变

背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程。目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞的退变是否具有协同抑制作用。方法:原代培养脂肪来源间充质干细胞、滑膜来源间充质干细胞和炎性软骨细胞。体外二维培养条件下,采用MTS细胞增殖实验检测3种细胞的增殖情况,定量PCR及免疫荧光分析3种贴壁细胞成软骨标志物基因水平及蛋白水平的差异。体外3D混合培养条件下分3组:脂肪来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+C组),滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(S+C组),脂肪来源间充质干细胞+滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+S+C组)。收集3组混合培养的细胞团块,进行阿尔新蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色,并做定量分析。采用定量PCR检测成软骨分化标志物的基因水平差异。收集培养液上清通过酶联免疫吸附技术检测促炎因子及抗炎因子的分泌情况。结果与结论:(1)体外二维培养条件下,脂肪来源间充质干细胞的增殖速率高于炎性软骨细胞和滑膜来源间充质干细胞,差异有显著性意义(P<0.05);炎性软骨细胞的成软骨标志物Ⅱ型胶原、蛋白聚糖m RNA表达量以及Ⅱ型胶原蛋白表达量明显高于脂肪来源间充质干细胞和滑膜来源间充质干细胞(P<0.01);(2)体外3D混合培养条件下,A+S+C组的成软骨分化特异性染色阳性区域面积百分比均明显高于S+C组和A+C组(P<0.05);A+S+C组成软骨分化标志物蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达量明显高于S+C组和A+C组(P<0.05);S+C组促炎因子白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平明显高于A+C组及A+S+C组(P<0.05),A+C组及A+S+C组抗炎因子白细胞介素10水平明显高于S+C组(P<0.05);(3)结果表明,联合应用脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞退变具有协同抑制作用。

BMP4、VEGF、sFlt1多基因逆转录病毒转染肌源性细胞对小鼠体内成骨过程的影响

目的:研究以肌源性细胞为基础的BMP4、VEGF、s Flt1多基因治疗在小鼠体内对成骨过程的影响。方法:分别以2种肌源性细胞C2C12和PM为细胞载体,用BMP4、VEGF、s Flt1逆转录病毒进行重复转染。2种肌源性细胞分别重复转染后,产生6组实验细胞,分别是C2C12-B-sF lt1、C2C12-B、C2C12-B-VEGF、PM-B-sF lt1、PM-B、PMB-VEGF。6组细胞在体外复合明胶海绵后分别植入小鼠的股肌袋内。术后不同时间应用组织学、X线检查观察各组的成骨量以及软骨化骨的组织学演变过程。结果:C2C12-B-sF lt1和C2C12-B 2组细胞在体内可引发软骨化骨过程,2组的成骨量在特定的时间段内无明显区别,但X线检查显示2组的成骨空间方向不尽相同。C2C12-B-VEGF在体内没有诱发软骨化骨的过程,其所诱发的组织学过程类似血管瘤。PM-B-sF lt1、PM-B、PM-B-VEGF 3组细胞在体内诱发软骨化骨的过程较为类似,3组的成骨量在35 d的观察期内无明显区别。结论:骨骼肌源性细胞可作为BMP4基因治疗的基础细胞,而在增加了VEGF和sF lt1基因的复合基因转染后,其软骨化骨的表现具有细胞种群的特异性。

人骨骼肌来源不同表面标志物间充质干细胞特定亚群的多向分化潜能

背景:骼肌来源的间充质干细胞,在骨形态发生蛋白4等因子的调节下具有多向分化潜能,但具体细胞亚群的分化情况尚不十分明确。目的:观察人骨骼肌来源的不同表面标志物的间充质干细胞特定亚群的多向分化潜能。方法:应用流式细胞分选技术,分选出具有不同细胞表面标志物的人骨骼肌干细胞亚群,根据CD56及CD34/CD144的表达差异,将细胞分成CD56^+,CD56^+CD34^+CD144^+,CD34^+CD144^+及未分选组共4组,对比不同细胞亚群组在骨形态发生蛋白4成骨诱导或骨形态发生蛋白4^+转化生长因子β3成软骨诱导后的差异。通过碱性磷酸酶染色后碱性磷酸酶阳性细胞的百分比评估细胞骨代谢情况。将各亚群细胞进行3D培养和细胞因子处理后,通过硝酸银染色评估其成骨分化程度,通过阿尔新蓝染色评价成软骨分化程度。结果与结论:(1)细胞骨代谢:经骨形态发生蛋白4处理后,4组细胞的碱性磷酸酶阳性细胞的百分比差异无显著性意义(P>0.05);(2)细胞分化:不同表面标记物的4组细胞成骨及成软骨分化有明显差异,在相同成骨培养条件下,CD56^+组成骨能力最强;相同成软骨培养条件下,CD56^+,CD56^+CD34^+CD144^+组呈阿尔新蓝染色阳性,CD56^+CD34^+CD144^+组的染色更深且区域更大;(3)结果证实,成骨与成软骨潜能与不同的人骨骼肌间充质干细胞类型有关。人骨骼肌来源的间充质干细胞CD56^+亚群和成骨潜能有密切关系。同时CD56^+CD34^+CD144^+亚群分化能力更强,具有更强的成软骨潜能。