环尾狐猴源弓形虫的检测与鉴定

为了确定引起广东环尾狐猴（Lemur catta）呼吸困难、厌食和出血性肺炎症状的病原,从2只死亡的环尾狐猴体内无菌采集心肝肺肾组织样本。通过病原形态学观察,鉴定为弓形虫（Toxoplasma sp.）后,另外采集在狐猴笼舍出现的2只老鼠和1只猫4份组织样本。所有样本分别采用荧光定量PCR及一步法PCR技术进行弓形虫的检测与529 bp重复序列分析。以弓形虫B1基因片断为扩增对象的荧光定量PCR检测显示6份样本的CT为25.84~30.29,溶解曲线中均出现明显峰值,核酸定量峰值均大于阳性对照。用一步法PCR自6份样本中均扩增出529 bp目的片段,测序和Blast分析显示,该目的片段与GenBank中登录号为KC607824和DQ779189的刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）核苷酸序列相似性最高,均为98.7%;与国际标准强毒虫株RH的核苷酸相似性为98.5%。这些结果表明,荧光定量PCR技术可以用于环尾狐猴弓形虫病的快速诊断,本次环尾狐猴的死亡可能是由于弓形虫的感染引起的,刚地弓形虫可能由野猫与老鼠传播。

环尾狐猴源弓形虫多位点基因的克隆、测序及基因分型

为确定引起广东环尾狐猴(Lemur catta)疑似弓形虫病的病原,从2只死亡的环尾狐猴体内无菌采集肺脏、肝脏、心、肾和脑等组织制作常规石蜡切片,HE染色。通过病理组织学观察,鉴定为弓形虫(Toxoplasma sp.)后,采用PCR-DNA测序分析方法对环尾狐猴源分离虫株(TgRTL1)的SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、L358、PK1、c22-8、c29-2和Apico基因位点进行PCR扩增、克隆和测序,采用DNAStar和MEGA5.05软件,将所获序列与网上下载的弓形虫RH株、ME49株和VEG株相应序列进行比对和同源性分析,并构建系统发育树。结果显示,从广东分离的环尾狐猴源弓形虫株,在10个遗传位点经PCR-DNA测序分析,确定该虫株的基因型为Toxo DB#3。本研究是对中国环尾狐猴源弓形虫采用多位点DNA序列分析进行基因型鉴定的首次报道,为进一步研究我国弓形虫流行病学、生物学特性以及弓形虫病的诊断提供了科学理论依据。

华南虎狮弓蛔虫三种线粒体基因的遗传进化分析

为研究华南虎狮弓蛔虫(Toxascaris leonina)线粒体基因的分子特性,对来源于4只华南虎的狮弓蛔虫的pcox1、pnad1和pnad4三种线粒体基因进行了扩增、克隆和测序,采用DNAStar和MEGA5.05软件对所获序列,以及Gen Bank中公布的狮弓蛔虫等相关序列进行了同源性比对和遗传进化分析。结果显示,4只华南虎的狮弓蛔虫扩增的pcox1、pnad1、pnad4基因序列长度分别为393、366、399 bp,3段基因序列种内变异明显低于种间变异。系统进化树中,狮弓蛔虫可分为猫科和犬科动物两大分支,其中4只华南虎的狮弓蛔虫与已报道的孟加拉虎、东北虎、华南虎、非洲狮、猞猁的狮弓蛔虫聚为一支;另外狼和犬的狮弓蛔虫聚为一支;以pnad1、pnad4建立的系统发育树中,虎源狮弓蛔虫又单独聚为一支,表明狮弓蛔虫在不同虎类之间并没有严格的宿主特异性。该研究为狮弓蛔虫的分子鉴定和分子遗传学研究提供了科学依据。