人重组巨噬细胞移动抑制因子在大肠杆菌的高效表达与鉴定

利用ＰＣＲ技术，从人Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增巨噬细胞移动抑制因子的（ＭＩＦ）ｃＤ－ＮＡ，经与大肠杆菌表达载体重组，构建成不同表达克隆，在大肠杆菌高效表达成功ＭＩＦ融合蛋白，占细菌总蛋白的３２％～６０％，经纯化的ＭＩＦ产物纯度可达９８％，其氨基酸组成分析与理论值一致。经豚鼠ＭΦ移动抑制实验表现出明显的ＭＩＦ活性。该研究为确定ＭＩＦ体内外生物活性提供了基础。

藻黄胶囊Ⅲ号对人肾小球系膜细胞的影响

目的通过研究藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)对人肾小球系膜细胞(GMC)的影响,从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭(CRF)的机理。方法ZHC3孵育体外培养的人GMC,采用MTT法检测GMC的增殖,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌水平。结果ZHC3可显著抑制GMC的增殖(P<0.01),减少FN、IL-6、TGF-β1的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论ZHC3可减少肾小球内细胞外基质堆积,延缓肾小球硬化,这可能是ZHC3防治CRF的机理。

重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定

目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴 定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。 结果:获得rhESC42融合蛋 白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。 结 论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后 的功能研究奠定基础。

不同细胞因子对脐血CD_(34)^+细胞扩增的影响

目的探讨不同细胞因子促进脐血CD34+细胞扩增的效应,为下一步的临床应用奠定基础。方法采用EasySep免疫磁珠阳性选择系统分离脐血中CD34+细胞,在无血清、无基质细胞培养体系中添加不同细胞因子培养2周,分组:A组,SCF+FL+TPOB组,SCF+FL+TPO+IL-3C组,SCF+FL+TPO+G-CSF。结果CD34+细胞数目于培养后7d达到峰值,3组间差异无显著性;B组扩增至14d时细胞总数达(384.40±17.48)倍,显著高于另外2组。扩增7d后的脐血细胞经体外培养可形成造血集落。结论体外扩增脐血CD34+细胞理想的细胞因子组合为SCF+TPO+FL,以7d为宜。

一个新的单参数填充函数

填充函数法是求解全局优化问题的一种重要的确定性算法.本文将在前人的基础上,提出了一个新的单参数填充函数.并通过数值算例验证了该算法的有效性和可行性.

白斑综合征中国对虾肝胰腺蛋白质组学研究的技术探索

建立白斑综合征中国对虾肝胰腺蛋白质组学技术体系，以惠白斑综合征中国对虾的肝胰腺为研究对象，健康中国对虾肝胰腺为对照组，探索2种蛋白质组学差异蛋白的分离和鉴定的方法。采用双向凝胶电泳（4～7固相pH梯度干胶条，10％SDS-PAGE）分离蛋白质组，银染显色，图像分析软件比较分析，识别差异蛋白，胶上扣点，处理后通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MOLDI-TOF）得到肽质量指纹图谱，软件分析后应用Mascot数据库搜索软件鉴定蛋白。分别获得中国对虾患白斑病组及对照组正常肝胰腺蛋白质组表达图谱，分别识别出203和107个蛋白质点，筛选并尝试鉴定数个差异蛋白。对各方法步骤进行了技术探讨，对实验过程提出了一系列建议，建立了双向电泳及生物质谱方法研究中国对虾白斑病的蛋白质组学技术体系，该体系拓宽了对虾免疫生理研究的途径，以从蛋白质水平探讨对虾发病机制，寻找有效药物靶点。

Wnt/β-catenin信号通路与发育和疾病研究进展

Wnt信号通路是参与发育过程的关键信号网络,能够参与组织特化和细胞迁移等的发育过程。Wnt信号通路在成体动物组织内稳态的维持过程中同样发挥着重要的作用,异常的Wnt信号常与多种癌症的发生密切相关。本文概述了近两年来Wnt信号通路的激活机制、与其他功能蛋白和通路间的交互影响及其在发育和疾病方面的最新进展。

附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展

哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力。附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破。

大鼠附睾蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

背景与目的:提取大鼠附睾液蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离附睾蛋白组的方法。方法:分离提取大鼠附睾液蛋白,样品利用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8.5-4.0之间的组份进行二维反相高压液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成PI/UV图谱。结果:成功提取了附睾液蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了大鼠头体尾部附睾液蛋白的二维PI/UV图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8.5-4.0区间的20个组份,并将每个组份进行二维色谱分离后转换为PI/UV图谱。结论:为进一步全面研究附睾蛋白功能和体液差异蛋白质组研究打下了基础。

线粒体DNA突变与衰老

衰老是一种复杂的病理生理现象,主要表现为机体各种功能的下降。研究表明,衰老的发展过程与线粒体功能异常有密切关系。在衰老过程中,线粒体生物学发生变化,线粒体DNA突变与衰老的进程有密切关系。本文就线粒体DNA的分子结构、遗传学特点,对线粒体DNA突变与衰老关系进行综述。

人线粒体DNA荧光定量PCR检测方法的建立

建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人线粒体DNA的方法。选取人线粒体DNA高度保守基因片段,将该基因片段与pCF-T载体连接后,转化入E.coli DH5α,提取重组质粒PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green I荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线。结果表明:构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含101~108拷贝时,扩增反应CT值与拷贝数的对数成线性关系),相关系数为0.997。批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.23%~3.29%以及3.10%~5.21%。我们成功建立了实时荧光定量PCR检测人线粒体DNA的方法,该方法可作为进一步研究线粒体DNA的方法,在相关疾病诊断和监测中具有一定的应用前景。

孤雌生殖和孤雌胚胎干细胞研究进展

孤雌生殖是没有精子参与的卵母细胞激活分裂和发育过程。孤雌生殖技术是获得组织相容性胚胎干细胞系的一项重要技术。孤雌胚胎干细胞既具有与正常胚胎干细胞相同的自我更新和多向分化潜能,又规避了人胚胎干细胞面临的伦理问题,日益受到重视。但孤雌胚胎干细胞系存在建系率低、分化能力有限和异常基因印迹等诸多问题,原因可能与缺乏父本基因有关。目前已经建立了小鼠、猴和人类的孤雌胚胎干细胞系。就近年孤雌生殖和孤雌胚胎干细胞的研究进展综述。

Dishevelled:WNT信号通路的关键蛋白

Dishevelled(Dvl/Dsh)是Wnt信号通路上的关键蛋白,能将Wnt信号从受体传递到下游的效应因子上。经典Wnt信号通路中,Dvl被受体Fizzled召集到细胞膜上,与axin/GSK3/APC复合体结合,从而抑制细胞质内β-catenin的降解。本文对DVL在Wnt信号通路中的作用及作用的分子机制进行讨论。

HSPA5研究进展

HSPA5是热休克蛋白70家族成员之一，作为一种分子伴侣在蛋白质折叠和转运过程、内质网应激反应和精子发生过程中发挥重要作用。他在多种肿瘤组织中呈高表达，反义抑制其表达水平或将HSPA5启动子连接自杀基因可用于肿瘤治疗。在小鼠和人的生精过程中的不同表达暗示在精子的生理功能中可能扮演重要角色。

大鼠附睾液蛋白质组二维液相色谱分离的实验研究

目的建立一种利用二维液相色谱分离和质谱鉴定大鼠附睾液蛋白质组的实验方法,为以后研究其他哺乳动物附睾蛋白质组提供实验基础。方法分离提取大鼠附睾头、体、尾部管腔蛋白,样品经脱盐、浓缩,利用起始缓冲液置换,进行一维色谱聚焦分离,收集pH4．0—8．5之间的组分进行二维反相色谱分离,并通过自动馏分收集器收集分离组份;最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成二维pL／UV图谱;选择含高丰度蛋白的馏分经冷冻干燥浓缩后进行质谱鉴定。结果通过二维液相色谱成功分离了大鼠附睾头、体、尾部附睾液蛋白并建立了二维pL／UV图谱;对二维获得的含高丰度蛋白的馏分进行了质谱鉴定,获得大鼠附睾头、体、尾部主要蛋白。结论为进一步利用二维液相色谱全面分离附睾蛋白和研究附睾功能奠定了基础。

附睾蛋白的研究方法及进展

附睾是精子成熟,转运和贮存的场所,哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力,因而附睾蛋白的研究受到越来越多的关注。本文从不同的实验角度综述了附睾蛋白的研究方法及其进展。